成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞Ahr入核的比较

目的探究成像流式细胞术和免疫荧光技术检测成纤维样滑膜细胞中Ahr入核的差别。方法用15%的DMEM培养人来源的成纤维样滑膜细胞细胞株MH7A,分别用激光共聚焦显微镜和量化成像流式细胞仪(ImageStreamX MarkⅡ)检测空白对照组、Kyn组和Kyn+CH223191组对MH7A中Ahr的入核水平,并采用非参数检验比较两种检测技术检测结果的相关性。结果与空白对照组相比,免疫荧光技术和成像流式细胞术测得的MH7A细胞中Kyn组和Kyn+CH223191组Ahr入核能力增加(P<0.05),两种实验方法测得的三组结果相关性良好,R 2值分别是0.8638、0.9287和0.9018,差异有统计学意义(P<0.05)。结论相较于免疫荧光技术的操作和结果,成像流式细胞术数据处理比较复杂,但所得结果精确度高,避免了实验者的主观性,减少实验误差。

流式细胞术快速检测T细胞亚群和NKT细胞亚群的免疫荧光变化

利用单克隆抗体与免疫荧光结合的特异性,探讨流式细胞仪检测T细胞亚群和NKT细胞亚群免疫荧光变化。选用培养C57BL/7小鼠脾细胞分别经SEB.COA活化,收集体外扩增10d淋巴细胞为效应细胞,经免疫荧光探针FITC、PI、PerCP和APC标记可同时检测各亚群免疫荧光变化,结果表明SEB活化主要是NKT细胞,它们与COA活化NKT细胞亚群相比比率显著增高。COA活化细胞主要是T细胞亚群。依据免疫荧光原理应用流式细胞术,为进一步研究NKT细胞结构和功能提供一种快速的检测手段。

流式细胞术双色免疫荧光标记观察寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群

目的了解寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化。方法应用流式细胞仪双色免疫荧光标记,检测98例寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群并与102名正常人进行比较。结果银屑病患者外周血CD4+细胞百分数显著高于正常人对照组(P<0.05);NK细胞百分数显著低于正常人对照组(P<0.01),寻常性进行期银屑病患者T细胞和CD4+细胞显著高于静止期银屑病患者(P<0.05),进行期银屑病患者T细胞、B细胞、CD4+细胞百分数均显著高于正常人对照组(P<0.001),NK细胞显著低于正常人对照组(P<0.001)。静止期银屑病患者与正常人对照组相比淋巴细胞亚群各项指标无明显差异。结论寻常性银屑病患者外周血淋巴细胞亚群的变化主要表现在T、B淋巴细胞特别是CD4+细胞的升高和NK细胞的降低。

流式细胞术免疫荧光测量中的直标及间标

直接标记和间接标记是免疫荧光测量中两种不同的标记方法。在流式细胞计测量中，一般说来，直接标记不易引入样品的非特异性结合，因此引入干扰少，样品的数据好处理，而间接标记由于有放大作用，容易引入非特异结合的干扰，严重时所得数据无法区分特异及非特异信号，造成数据分析的混乱，通过样品实测比较，认为在流式细胞计测量中应用直接样品更为合适。

间接荧光染色-流式细胞术检测细胞内磷酸化Erk1/2

丝裂源活化的蛋白激酶（mitogen-activatedprotein kinases,MAPKs）家族参与细胞生长、增殖、分化和凋亡等重要过程。MAPK家族成员p42/44MAPK（Erk1/2）在生长因子、细胞因子、营养物质和能量刺激下活化,促进细胞增殖或抵抗凋亡;Erk1/2分子中Thr202和Tyr204位氨基酸残基的磷酸化是其活化的标志[1]。

间接免疫荧光显微术检测泡桐丛枝病原MLO的研究

以感染类菌原体ＭＬＯ的泡桐组培苗为病原繁殖材料，采用差速离心和Ｐｅｒｃｏｌｌ不连续密度梯度离心来提纯ＭＬＯ作为免疫抗原制备兔抗血清。抗血清经健康汁液吸收后，作为第一抗体，用异硫代氰酸荧光素ＦＩＦＣ标记的羊抗兔免疫球蛋白作为第二抗体，进行间接免疫荧光显微镜检查染病组织中的ＭＬＯ特异性荧光。经与ＤＡＰＩ染色技术比较，找出了适宜的徒手切片和减少非特异性反应的途径。此技术具有灵敏度高、特异性强和测定简便等特点。适用于ＭＬＯ组织定位、组培苗脱毒效果评估、病原株系鉴定和病害检疫等。

运用流式细胞术快速检测汉滩病毒滴度

目的:建立用流式细胞仪快速测定汉滩病毒滴度的方法。方法:汉滩病毒76-118株感染Vero-E6细胞,以汉滩病毒核蛋白单克隆抗体(mAb)3G1为一抗,FITC标记的羊抗小鼠抗体为二抗,用流式细胞术(FCM)检测阳性细胞率,评价感染后不同时间点,以及不同病毒接种量的阳性细胞率,并与间接免疫荧光法对比。结果:感染后36 h阳性细胞百分率为(10.06±0.42)%,最低检测的病毒滴度为100 TCID50/mL。结论:相对于传统的空斑实验及间接免疫荧光滴定法,FCM是一种简单、快速、有效检测汉滩病毒滴度的方法。

流式细胞术的最新进展

流式细胞术是一项集多种技术于一体的新型高科技细胞分析技术 ,是一种自动而迅速地进行细胞及免疫分析的标准方法。近年来在其基础上建立起来很多新型的流式细胞仪系统 ,具有体积小、功能全、价格低、使用方便、应用广泛等特点。

应用流式细胞术检测抗核抗体

目的建立流式细胞术(flow cytom etry,FCM)检测抗核抗体(an tinuclear an tibody,ANA)的方法。方法收集经间接免疫荧光法(ind irect imm unofluorescen t assay,IIF)测定的55例血清标本作为检测对象,36例健康体检者血清作为阴性对照,采用提取的H e la细胞核作为靶抗原,对所有血清标本进行FCM分析。结果将阳性细胞百分率大于12%的标本定为ANA阳性。IFA和FCM两种方法阴性和阳性的总符合率为92.7%(51/55),FCM测定值随着ANA滴度的增高而增高,并大部分集中于某一个范围。结论FCM分析法具有省时、客观、可定量分析的特点,是ANA检测的一种新方法。

流式细胞术外周血样品间标的方法

目的 建立一种新的用于流式细胞术 (FCM)外周血样品的间标荧光染色方法 .方法 抗凝全血 1 0 0 μL,加入一抗 5 0μL ,室温下反应 30 min,上 Q- PREP型免疫学样品制备仪 ,溶解红细胞和固定标品 ,加入荧光二抗 5 0 μL ,室温下反应 30 min,再加入 5 0 0 μL 的 PBS制成单细胞悬液 ,上流式细胞仪分析 ,同时与其他 5种常规方法进行比较 .结果 本方法与其他 5种方法的 FCM测定结果基本一致 (P>0 .0 5 ) ,而本方法样品用量少 ,操作简单 ,快速、染色时间仅需 70 m in.结论 我们建立的外周血样品间接荧光染色法 (方法 2 ) ,是外周血 FCM样品染色的理想方法 ,该方法对于 FCM在临床检验和基础研究的应用提供了技术支持 ,具有较强的实用价值 .

激光流式细胞术定量分析增殖细胞核抗原表达的实验研究

为研究流式细胞术定量分析肿瘤细胞增殖细胞核抗原的表达，采用双参数流式细胞术检测方法和单克隆抗体免疫荧光染色技术定量分析增殖细胞核抗原表达。结果Ｅｃ８７１２、８１１３、７９０１三株细胞的ＰＣＮＡ平均表达量分别为３１．５６％，７８．１４％和７４．３５％，双参数检测结果表明，ＰＣＮＡ主要在Ｓ期和Ｇ２Ｍ期高表达。双参数流式劝胞术检测方法结合单克隆抗体免疫荧光染色技术能较准确地定量分析肿瘤基因蛋白的表达量。

流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白测定的临床意义

目的 探讨流式细胞术对人脑胶质瘤多药耐药膜糖蛋白 (P - gp)测定的临床意义。 方法 采用流式细胞术直接免疫荧光染色法检测新鲜脑胶质瘤和正常脑组织标本中P - gp的表达。 结果 不同性别、年龄、肿瘤大小之间P - gp表达阳性率无明显差异 (P >0 0 5 ) ,不同恶性程度之间P -gp表达阳性率差异有显著性 (P <0 0 5 )。相同级别胶质瘤中复发与原发者P - gp表达差异有显著性 (P <0 .0 5 )。 结论 P- gp表达与病人性别、年龄、肿瘤大小无关 ,与肿瘤恶性程度呈正相关。P -gp测定可判断胶质瘤对化疗药物敏感性 ,指导临床应用多药耐药逆转剂 ,制订化疗方案 。

2种免疫荧光抗体检测运动员T细胞亚群、NK细胞的比较实验研究

目的通过用2种不同免疫荧光抗体标记运动员T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上测定并进行结果比较。方法采集50例运动员静脉血,分别用Coulter原抗体和Biolegend新抗体标记T细胞亚群和NK细胞,在流式细胞仪上检测T细胞(T3)、辅助性T细胞(T4)、抑制性T细胞(T8)、NK细胞(百分比)等指标,比较测试结果的差异。结果用2种荧光抗体检测运动员上述指标无统计学差异(P>0.05),结果具有高度可比性。结论 Biolegend新抗体高度适用于流式细胞仪上检测运动员T细胞亚群、NK细胞检测,而且长期使用更经济,建议作为首选标记抗体。

流式细胞术在医学检验教学中的实践

流式细胞术是以免疫荧光标记技术为基础，集光电检测技术、计算机技术与单克隆抗体等技术为一体的现代检测手段。该技术以其分辨率高、敏感性与特异性强、应用范围广泛、技术密集度高等特点，现已成为临床诊断与科研领域广受好评与不可或缺的一项新技术。

浅议间接免疫荧光法检测抗核抗体的报告模式

抗核抗体（antinuclear antibody,ANA）是自身免疫风湿性疾病（autoimmune rheumatic diseases,ARD）诊断中重要的血清学标志物[1,2],其检测方法较多,如间接免疫荧光法（indirect immunifluorescence,IIF）、免疫印迹法（immunoblotting test,IBT）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、蛋白芯片法、金标法及流式细胞术等,但临床应用最为广泛的主要是IIF、IBT和ELISA。

采用流式细胞术诊断急性白血病的探讨

采用免疫荧光法通过流式细胞仪分析l例急性白血病患者骨髓细胞CD系列抗原表达情形.抗原包括CD-3、CD_5、CD_7、CD_10、CD_13、CD_19、CD_20、CD_22、CD_33以及HLA—DR位点抗原.结果流式细胞仪散点图显示有一群非正常细胞,对此群细胞分析显示HLA—DR抗原阳性细胞大于80%,CD22阳性细胞占83.91%、表达CD_19的细胞占30.11%、表达CD_20的细胞占33.75%、而同时表达CD_10和CD_19抗原的细胞占55.84%.

机械力刺激促进细胞膜胆固醇外排引起细胞体积收缩产生力学韧性的机制研究

目的研究机械拉伸力作用下细胞质膜韧性状态的产生方式,并分析其产生机制。方法通过细胞拉伸装置,对肺上皮细胞施加单轴循环拉伸力,比较单次加力与组合加力对质膜的损伤差异,分析不同预刺激对高强度拉伸的保护作用。利用免疫荧光技术,流式细胞术,3D重建技术比较不同拉伸强度前后细胞体积变化,及细胞内钙水平,分析胞内钙激活质膜扰动酶并进一步影响细胞体积的机制。同时基于Hill函数建立力-钙-细胞体积-质膜膜损伤之间的量化关系,并进一步通过主成分分析降维方法提出韧性态和正常态的识别方法。结果低强度拉伸力预刺激后,能够降低高强度拉伸力引起的膜损伤,即产生质膜韧性。进一步研究发现,质膜韧性的产生需要一定强度的预刺激,当预刺激达到临界值时,胞内钙含量升高,细胞体积缩小,韧性态产生。机制上,力刺激激活钙依赖扰动酶TMEM16F促进细胞释放大量含有胆固醇的细胞外囊泡,降低了细胞膜胆固醇含量,进一步激活了体积调节性阴离子通道,实现细胞体积缩小。结论质膜力学韧性状态的产生需要一定值的预刺激,此状态的产生主要通过离子通道的激活,并以体积缩小为主要特征。