用间接免疫过氧化物酶试验检测鸡呼肠孤病毒

最近,美国阿拉巴马州农业试验站和Auburn大学兽医学院的研究人员研制生产出抗禽呼肠孤病毒株S1133的单克隆抗体（MAb）,并用于诊断试验。使用MAb的间接免疫过氧化物酶（IP）试验,在检测福尔马林固定。

猪圆环病毒2型免疫过氧化物酶单层细胞试验抗体检测试剂盒的研制及应用

本研究建立了一种免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay,IPMA),用于猪圆环病毒2型血清抗体检测,通过对IPMA反应条件的优化,组装了诊断试剂盒。研究结果表明,用IPMA检测猪圆环病毒2型人工感染猪血清,于感染后3周抗体阳转,第3周～10周抗体阳性检出率为92.8%(52/56),对照组猪血清抗体检测均为阴性(33/33)。试剂盒在-20℃稳定保存18个月与其他几种猪病毒参考血清无交叉反应,与用重组蛋白抗原建立的rcELISA符合率为89.2%。对来自黑龙江、吉林、河北、上海、内蒙古、云南、江西等地猪场健康成年猪血清480份和发病猪血清424份进行了检测,抗体检出率分别为91.7%和79.2%,表明我国猪群中猪圆环病毒2型污染相当严重。该试剂盒的研制为我国PCV2流行病学调查和疫苗免疫效果的评价提供了技术手段。

免疫过氧化物酶单层细胞试验检测猪圆环病毒2型方法的建立

猪圆环病毒（Porcinecircovirus，PCV）是目前发现的最小的动物病毒，属圆环病毒科、圆环病毒属病毒。根据PCV的致病性、抗原性和核苷酸的序列差异将它分为猪圆环病毒1型（PCV-1）和猪圆环病毒2型（PCV-2）2个血清型。以前的研究认为，PCV-1对猪没有致病性，PCV-2对猪有致病性，但两者都不引起细胞病变。但近年来从死产的仔猪分离到该病毒，表明可能并非如此。

犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶真核表达质粒的构建及初步免疫试验

为评价犬恶丝虫硫氧还蛋白过氧化物酶（TPx）真核表达质粒的免疫原性，本实验利用RT—PCR方法扩增TPx基因，将其克隆于真核表达载体pvAxloe构建重组质粒pVAXI—TPx，并对其进行体外表达鉴定及通过特异性抗体水平及相关的免疫因子的检测，评价其在体内诱导的免疫反应。

基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物

本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示:1)在1 mg的磁珠中,沙拉沙星(sarafloxacin,SAR)单克隆抗体最佳偶联量为15μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2)最佳抗原添加量为1 ng·mL^(-1),捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^(-1)PBS,IC50为0.73 ng·mL^(-1),线性范围为1.0~3.2 ng·mL^(-1);3)氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31μg·kg^(-1),回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法(HPLC)结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。

免疫过氧化物酶单层细胞试验检测猪圆环病毒Ⅱ型抗体方法的建立

猪圆环病毒病（PCVD）是由猪圆环病毒Ⅱ型（PCV-2）引起的猪传染性疫病，是继猪繁殖与呼吸综合征（PRRS）之后新发现的又一重要疫病，临床主要表现为生长迟缓、进行性消瘦、呼吸困难、黄疸、腹泻、皮炎、繁殖障碍、震颤等。自1997年Clark等人首次分离到PCV-2以来，该病已给全世界养猪业造成巨大的经济损失，我国为养猪大国，PCV-2感染也相当严重，全国各大小猪场均存在PCV一2感染的报道。

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫过氧化物酶单层细胞检测方法的建立

【目的】建立一种可直观判断猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)的检测方法。【方法】应用PRRSV多抗血清作为一抗,建立了PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测体系,并对相关反应条件进行优化,对其特异性和敏感性进行检测。【结果】最佳病毒接种感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0.1,最佳感染时间为24 h,一抗最佳稀释度为1∶1000,所建立的PRRSV免疫过氧化物酶单层细胞检测方法与其他几种流行猪病无交叉反应。对300份来自不同地区的临床血清进行检测,IPMA与PCR检测阳性符合率达93%。【结论】该方法具有良好的特异性和敏感性,为PRRSV的临床检测提供新方法。

猪瘟病毒免疫过氧化物酶单层细胞试验检测方法的建立

本研究旨在建立一种针对猪瘟病毒测定的免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA)方法。通过优化一抗二抗的稀释倍数、细胞接毒时间、细胞固定条件等,建立能够测定猪瘟病毒的特异性方法。结果显示,建立的IPMA检测方法最优反应条件为接种CSFV,37℃、5%CO_(2)培养72 h后,用含0.3%H_(2)O_(2)的甲醇溶液固定10 min,5%BSA封闭处理,1:200倍稀释的高免血清作用2 h,以1:1000倍稀释羊抗兔HRP-IgG作为二抗作用1 h,AEC 37℃显色15 min。结论:成功建立能够快速对猪瘟病毒含量测定的方法,该方法特异性强、操作方便,可以在生产过程中对猪瘟病毒的产毒情况进行监测。

应用免疫过氧化物酶试验诊断猪PRRS

1995年波兰学者建立一种免疫过氧化物酶单层细胞试验,用于诊断猪生殖—呼吸综合症(即蓝耳病,PRRS)血清抗体,从可疑猪场采集42份猪血清样本,经该法检测结果有23份为PRRS抗体阳性,其中有10份抗体滴度】1:256;另对没有感染PRRS猪场采集的60份血样检测,结果全为阴性。证实该法是比较特异的。目前,波兰已将此法作为PRRS常规诊断方法应用。

B．ovis死菌制剂苗接种后的过氧化物酶试验检查

本文报告了死菌制剂佐剂苗免疫后的过氧化物酶（Ｐｏｘ）检查试验，结果显示免疫组在注苗后３０天、７５天、１６５天Ｐｏｘ染色阳性率分别是９２％、９６％、１００％，积分是２８９、３１７、３３７。感染对照组是２５％、２５％、３３％，积分是３８、３１．４、３３．３。免疫攻毒组分别是８０％、８５％，积分为２３０、２４０。这两个试验组和对照组存在着非常显著差异（Ｐ＜０．０１）。作者认为Ｐｏｘ试验可能是一个有用的免疫学指标，在反映抗体对Ｂｒ．ｏｖｉｓ的免疫状态方面可加以利用。

甲状腺过氧化物酶抗体光激化学发光间接检测法的建立

目的:利用抗免疫复合物IgG多抗体在光激化学发光(Lica)平台上建立间接法检测甲状腺过氧化物酶抗体(Anti-TPO)。方法:以人体IgG对兔子进行免疫耐受,以兔红细胞和人体血清构建免疫复合物IgG并免疫兔子。用纯化的抗免疫复合物IgG多抗和甲状腺过氧化物酶组成一步间接法,检测甲状腺过氧化物酶抗体浓度,并评估其最低检测限、回收率和批内精密度,与传统两步化学发光法(贝克曼)进行比较。结果:甲状腺过氧化物酶的检测方法的最低检测限为0.09 U/ml,平均回收率为96.26%,重复性变异系数(CV)为1.58%~1.97%,与贝克曼方法的结果的相关性r=0.989。结论:成功建立了光激化学发光定量检测Anti-TPO的方法(间接法)。该方法与传统两步间接化学发光法的相关性较好,弥补了光激化学发光平台无法使用间接法进行检测的缺陷。

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解法制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12～18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。

改良凝集试验(MAT)与间接血凝试验(IHAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫抗体的比较分析

为了评价用于检测弓形虫抗体的改良凝集试验 (MAT)、用MAT、间接血凝试验 (IHAT)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)对动物和人的血清进行检测 ,比较阳性检出率与符合率 ,并对检测的结果进行统计分析。结果显示 :MAT和IHAT、MAT与ELISA检测动物和人血清的阳性检出率都无显著差异 (P >0 0 5 )。MAT与IHAT检测动物血清的总符合率为 78 7% (5 9 75 ) ,检测人血清的总符合率为 81 6 % (71 87) ;MAT与ELISA检测动物血清的总符合率为 74 0 % (5 4 73) ,检测人血清的总符合率为 79 3 % (6 9 87)。应用配对资料卡方检验分析显示 :MAT与IHAT、MAT与ELISA检测的结果一致。因此 ,检测弓形虫抗体的MAT与IHAT和ELISA具有良好的符合性 ,这 3种方法都能用于弓形虫抗体的常规普筛和血清流行病学研究。

血清抗甲状腺过氧化物酶抗体ELISA定量方法的建立

目的建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶(TPO)抗体(TPOAb)。方法用生物素化牛血清清蛋白(BSA)和链霉亲合素包被微孔板,同时加入生物素化TPO抗原和待检血清,再加入酶标记抗人IgG,建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度,优化反应条件,并进行方法学评价。结果本法抗原包被量为0.083μg/mL,检测灵敏度为0.165 IU/mL;高、低浓度混合血清批间变异系数(CV)为9.2%、9.0%,批内CV为4.6%、5.6%;回收率为96.0%～104.0%;包被板37℃放置5 d保持稳定;与抗甲状腺球蛋白抗体(TGAb)交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人,将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数(r)为0.985(P<0.01)。结论间接包被模式适合TPOAb测定,包被抗原用量少,方法灵敏度高,特异性强;操作简单,成本较低,适合基层医院。

化学发光法检测抗髓过氧化物酶抗体和抗蛋白酶3抗体

目的研究全自动、定量和随机上样化学发光法(chemiluminescent immunoassay,CLIA)检测抗髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)抗体和抗蛋白酶3(proteinase 3,PR3)抗体的临床应用价值,为临床抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法的选择提供参考。方法对临床242例常规申请抗中性粒细胞胞浆抗体(anti-neutrophil cytoplasmic autoantibodies,ANCA)检测的样本采用间接免疫荧光法(immunofluorescent assay,IFA)筛查的同时,应用CLIA和酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)平行检测抗MPO抗体和抗PR3抗体。对上述检测结果进行统计学分析。结果 CLIA与ELISA针对抗MPO抗体的检测表现出良好的一致性和符合率,其中总符合率为93.8%,阳性符合率81.9%,阴性符合率98.8%,一致性结果显示kappa=0.845,受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve,ROC曲线)以下面积(area under the curve,AUC)为0.966。两种方法学在检测抗PR3抗体时一致性和符合率表现较低,其中总符合率为86.8%,阳性符合率为35.1%,阴性符合率为96.1%。ROC曲线分析显示AUC为0.839;抗PR3抗体两种方法检测结果不一致的样本经第三方试剂验证结果显示,CLIA检测结果与第三方试剂验证结果差异无统计学意义(P>0.05),而ELISA检测结果与第三方试剂验证结果差异存在统计学意义(P<0.05)。CLIA检测结果与IFA检测结果阳性符合率为60.8%、阴性符合率为94.8%、总符合率为79.8%。而ELISA检测结果与IFA检测结果阳性符合率、阴性符合率和总符合率则分别为73.6%、77.2%和75.6%。结论与ELISA比较,CLIA检测抗MPO抗体具有良好的一致性和符合率,而检测抗PR3抗体时一致性和符合率偏低。在检测抗PR3抗体和抗MPO抗体时,CLIA的特异性均优于ELISA。建议实验室开展抗MPO抗体和抗PR3抗体检测方法选择时,应同时结合IFA抗体筛查试验、样本临床信息以及方法学自身特点等因素进行严格的判断和评价。

应用间接酶联免疫吸附试验检测鸡传染性鼻炎抗体

应用间接酶联免疫吸附试验对来自哈尔滨市Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ４个种禽场鸡群１８４份血清进行了鸡传染性鼻炎血清学调查，共检出阳性血清３３份，血清阳性率达１７．９％。４个种禽场都检出血清阳性，说明鸡传染性鼻炎在哈尔滨市感染率较高。