三抗体间接法Dot—ELISA检测牛副结核病IgG_1抗体的研究

本试验建立了检测副结核病牛血清中特异性抗体的一种新的免疫学诊断方法——三抗体间接法斑点酶联免疫吸附试验(Dot一ELISA)。并与粪便培养法,常规 ELISA,补体结合反应(CFT)及二抗体间接法 Dot一ELISA 进行了比较,试验结果表明,三抗体间接法Dot——ELISA 比常规 ELISA、CFT 和二抗体间接法 Dot——ELISA 显著敏感,而且快速、简易、经济,适用于大规模的现场检疫。

三种Dot-ELISA法检测Bt杀虫蛋白的研究

运用3种Dot—ELISA法对提纯的Bt杀虫蛋白进行检测，结果表明：直接法Dot—ELISA的最低可检测值为4．06～8．13ng，夹心法Dot—ELISA的最低可检测值为8．13ng，间接法Dot—ELISA（AKP—IgG）的最低可检测值为2．03ng，间接法Dot—ELISA（HRP—IgG）的最低可检测值为2．03～4．06ng。三者相比，以间接法Dot—ELISA的效果较好。

间接竞争ELISA法测定稻田土壤中除草剂毒莠定的残留量

通过对反应体系中酶标二抗（辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG）和抗体的最佳稀释浓度等条件的筛选和确定,最终建立了一种快速灵敏地测定污染稻田土壤中毒莠定残留量的方法--间接竞争ELISA分析方法.结果表明,酶标二抗和抗体的最佳稀释度均为1：500（体积比）,毒莠定的检出下限达到5 ng·mL^-1,在0.07～0.7μg·mL^-1浓度范围内有良好的线性;土壤浸出液加样的平均回收率为104.11%,变异系数在3.13%～11.13%之间,符合农药残留分析的要求;样品基质对检测结果没有干扰.

间接ELISA法检测羊促乳素抗体方法的建立

【目的】建立促乳素单克隆抗体制备中筛选阳性分泌细胞的间接ELISA检测方法。【方法】用促乳素纯品与Freund佐剂免疫6--8周龄雌性BALB／c小鼠，初次免疫采用抗原与完全Freund佐剂，每2周免疫1次，从第2次开始采用抗原与不完全Freund佐剂，免疫4次后尾静脉采血，收集血清制备阳性对照抗体，以未免疫的BALB／c小鼠血清为阴性对照，筛选间接ELISA法检测促乳素抗体的最佳反应条件，并对单克隆抗体制备中的阳性细胞进行筛选。【结果】间接ELISA法的最佳反应条件：血清稀释倍数为1：200，抗原包被质量浓度为100ng／mL，封闭液为1％牛血清白蛋白，酶标抗体的工作浓度为1：10000，酶标抗体作用时间为37℃90min，底物作用时间37℃30min。用该方法检测融合的杂交瘤细胞，最终获得OD450为0．875和0．460的阳性细胞株。

间接竞争ELISA法检测牛乳中β-乳球蛋白含量的准确性评价

研究建立了以β-乳球蛋白标准品为包被抗原、自制抗体为一抗、辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG:HRP为二抗、邻苯二胺为底物的间接竞争酶联免疫检测法(indirect competitive enzyme-linked immu nosorbent,ELISA)。同时以反相高效液相色谱法定量检测相同样品中β-乳球蛋白含量,采用t检验方法来评价间接竞争ELISA的方法定量检测β-乳球蛋白的准确性。t检验方法结果显示:在显著水平α=0.05下,该间接竞争ELISA法检测β-乳球蛋白的测量值较为准确。

己烯雌酚单克隆抗体细胞株的筛选及间接ELISA法的建立

以自行合成的己烯雌酚 (DES)免疫原免疫BALB/c小鼠 ,采用细胞融合、显微克隆等单克隆抗体技术 ,制备了 5株抗DES单克隆抗体分泌杂交瘤细胞株 (7B6、4B10、1G10、4E4、2C7) ;选择其中的 7B6株抗体 ,建立了间接竞争ELISA法 (indirectcompetitiveinhibitionELISA) ,通过初步优化 ,其检测限为 10 pg/孔 ,与同类二苯乙烯类雌激素的交叉反应高 ,而与天然雌激素雌二醇几乎无交叉反应性。这项研究为DES残留检测试剂盒的开发打下了基础。

间接ELISA测定GRF方法的建立

建立了间接 ELISA定量测定生长激素释放因子 ( GRF)的方法。其基本程序为 ,抗原包被、5%牛血清白蛋白和 5%猪血清封闭、一抗反应 (山羊抗人 GRF1～ 2 9抗体 )、二抗反应 (生物素化兔抗山羊 Ig G)、链霉卵白素 -HRP反应、DAB显色。最佳工作条件为 ,一抗 1∶ 1 6 0 0、二抗 1∶ 32 0 0、链霉卵白素 -HRP0 .5mg/L。在上述条件下 ,绘制了标准曲线 ( 2～ 4 0 ng) ,并测定了中国仓鼠肾细胞 ( CHO)表达

新布尼亚病毒IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

目的:建立基于间接ELISA法检测新布尼亚病毒Ig G抗体的血清学检测方法。方法:应用基因工程原核表达的新布尼亚病毒核蛋白,初步建立用于新布尼亚病毒Ig G抗体检测的间接ELISA法,用该方法对267例发热伴血小板减少综合征患者急性期和恢复期双份血清和198份标本进行检测,并与间接免疫荧光法的结果进行对比。结果:所建立的新布尼亚病毒Ig G抗体间接ELISA检测方法重复性好,与其他病毒无交叉反应。与间接免疫法对267例发热伴血小板减少综合征病例的实验室诊断结果有较好的一致性(Kappa=0.69),健康人血清检测阳性率为5.56%。结论:建立的间接ELISA方法适用于新布尼亚病毒感染的实验室诊断及流行病学调查。

胸腺素α1间接ELISA测定方法的建立及其在转基因蓝藻中的应用

利用胸腺素α1(Tα1)_小牛血清白蛋白融合蛋白免疫新西兰兔获得的抗体 ,建立了Tα1间接酶联免疫吸附测定法 (ELISA) ,以定量检测转Tα1基因聚球藻7942外源基因表达产物胸腺素α1 ,实验结果表明该方法灵敏度高、专一性强、重复性好 ,可用于转基因微藻Tα1表达量的定量检测 ,同时表明Tα1基因能在聚球藻7942中稳定表达。

间接Dot-PPA-ELISA检测猪细小病毒血清抗体

猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)是引起妊娠母猪繁殖障碍的主要病原之一.PPV还可引起仔猪的皮炎[3]和腹泻[2].我国各省市猪场猪细小病毒血清阳性率也很高.目前对该病的诊断准确率高的方法有间接荧光抗体技术、银加强胶体金技术、聚合酶链式反应法等,这些方法技术条件要求高,难在基层推广应用.血清中和试验、血凝和血凝抑制试验等操作较为简便,但准确率不高.

用间接ELISA法检测鸡痘病毒抗体的研究

建立了检测鸡痘病毒抗体的间接ELISA方法 ,用该法检测 2 0份人工感染鸡血清样品 ,抗体阳性率为 10 0 % ,康复期鸡群血清抗体阳性率为 4 3% ,人工接种弱毒疫苗 6 5d和 170d鸡群血清抗体的阳性率分别为 6 0 %、70 %。经反复试验 ,确定了诊断抗原的制备方法和间接ELISA检测鸡痘抗体的最佳反应条件 ,即抗原包被浓度 10 .8μg/孔 ,待测血清最佳稀释度为 1∶10 0。

利用酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法检测抗SSB抗体的初步研究

目的:利用纯化的酵母重组SSB抗原建立间接ELISA法,用于检测抗SSB抗体。方法:将毕赤酵母菌重组表达的SSB抗原包被于聚苯乙烯微量反应板,与待检血清中抗SSB抗体反应后,经洗涤,再加入辣根过氧化物酶标记羊抗人IgG与之结合,然后用TMB作用显色。结果:本法的敏感性和特异性分别为93.33%和100%,与欧蒙斑点酶免疫法检测结果之间的符合率为94.87%。结论:本法敏感性和特异性均较高,具有很好的临床诊断应用前景。

S-CLPT和Dot-ELISA法检测旋毛虫病抗体的研究

目的 探索检测旋毛虫病抗体的简便易行方法。方法 采用玻片法环蚴沉淀试验(S-CLPT)和斑点-ELISA(Dot-ELISA)法检测感染旋毛虫病豚鼠血清。结果 二种方法阳性率分别为97.5％和100％。用此二种血清学方法检测正常豚鼠、血吸虫病兔、蛔虫病人和鞭虫病人血清,除1例蛔虫病人血清Dot-ELISA法出现阳性反应外,其它血清二种方法均为阴性反应。结论 二种方法对旋毛虫病特异性抗体的检测均有较好的敏感性和特异性。

ELISA法间接检测囊虫患者血清特异抗原的探讨

目的 探讨简便的检测囊虫抗原的方法。方法 囊液抗原包被酶标板 ,ELISA法检测待检血清与含ELISA法 1∶8(+)的囊虫抗体兔血清的混合液的抗体 ,滴度低于 1∶2 (# )为阳性。结果 囊虫患者阳性率在 82 6 9% - 85 37%之间。讨论囊液抗原间接检测囊虫患者血清特异抗原结果稳定 ,方法简便 ,临床符合率较高。

ELISA双抗夹心法间接法检测血清抗-HIV结果比较

目的通过ELISA双抗夹心法和间接法检测血清抗-HIV,选择临床检测抗-HIV实验方法。方法用两种实验方法对阴性和阳性标本进行对照,并用蛋白印迹法确证。结果 ELISA双抗夹心法检测抗-HIV是大量标本初筛实验时的首选方法。

间接ELISA法测定猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的含量

目的建立猕猴血清中重组人源化抗EGFR单克隆抗体的测定方法,为药代动力学研究提供简单快速的方法。方法采用EGFR包外区包被酶标板、HRP标记的IgG-Fc段为标记抗体,建立定量检测抗EGFR单克隆抗体的间接ELISA法,并对其特异性、精密度、准确度、稳定性和稀释效应进行确证。结果在0.46～14.56ng·mL-1浓度范围内,测定方法具有较好的logistic曲线拟合关系,最低检测限为0.46ng·mL-1,组内及组间精密度的RSD分别为6.10%～9.81%,10.17%～11.93%。结论该方法简便、准确、特异性强,精密度及准确度均符合药代动力学要求,可用于猕猴及人血清中抗EGFR单克隆抗体的检测。

新城疫病毒融合蛋白抗体间接ELISA检测方法的建立

用新城疫病毒(NDV)F48E8株作为包被抗原,建立了检测由鸡痘病毒载体介导表达的NDV融合蛋白(F)抗体的间接ELISA方法。通过对20份阳性血清的P/N值与ELISA抗体效价(ET)的自然对数值(InET)的线性回归分析,获得了回归方程InET=0.201×P/N+4.632。应用该ELISA方法对表达NDVF基因的重组鸡痘病毒免疫鸡群进行了血清抗体检验,结果表明,血清的ELISA抗体效价与相应血清中和试验的抗体效价高度相关。攻毒保护试验结果显示,ELISA抗体效价与机体的保护力表现一定程度的相关性。

ELISA间接法检测肾综合征出血热病人抗体的影响因素探讨

以亲和层析提取的肾综合征出血热(HFRS)病毒结构蛋白为特异性抗原,建立了检测HFRS病人血清中特异性抗体的ELISA间接法。在此基础上,用正交设计法及方阵法对影响ELISA间接法特异性的主要因素(封闭因素、包被时间、抗原保存时间、血清浓度及抗原浓度)进行探讨。结果表明,封闭因素及抗原保存时间对ELISA反应的特异性没有显著性影响;抗原包被时间在24h结果最佳;最适抗原浓度及血清浓度分别为25μg/ml及1:8000。