雌二醇间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

建立食品中雌二醇免疫分析方法。将雌二醇进行结构改造合成半抗原并经过核磁氢谱和红外光谱验证,再采用活泼酯法与载体BSA和OVA偶联制备人工抗原,免疫兔子制备多克隆抗体,经过反应条件优化建立间接竞争酶联免疫吸附检测方法。结果表明:IC50为3.9ng/mL,检测限为0.3ng/mL,交叉反应率均小于1.21%。检测方法具有高灵敏度和特异性,可应用于食品中雌二醇检测试剂盒的研制。

莫米松糠酸酯高特异性抗体制备及酶联免疫分析方法

莫米松糠酸酯(mometasone furoate,MF)是一种常见的糖皮质激素。为快速、便捷地监控MF的滥用情况,制备了MF单克隆抗体并建立了其竞争酶联免疫检测方法。将氨氧乙酸分别连接至MF和莫米松二糠酸酯(mometasone difuroate,MDF),合成了免疫半抗原和包被半抗原。免疫半抗原以活泼脂法连接钥孔血蓝蛋白获得全抗原,通过免疫小鼠、细胞融合及筛选获得能够稳定分泌抗MF单克隆抗体的细胞株,制备并纯化了抗体。该抗体的主要识别区域为MF的五元环区域,因此不和常见的64种糖皮质激素发生交叉反应。建立了基于异源包被的MF间接竞争酶联免疫检测法,其半抑制浓度(IC_(50))为1.2 ng/mL,对肌肉和肝脏的最低检出限分别为0.52μg/kg和0.59μg/kg。灵敏度相比于同源包被提升了20倍。使用60%甲醇水溶液提取动物组织的添加回收率为70%~82%。该方法能有效应用于动物组织中MF的快速筛查。

同时检测动物样品中四种磺胺药物残留的膜基质免疫分析法

建立了一种简便、快速、可靠的膜免疫芯片检测牛奶和猪肝样品中磺胺类药物总量的方法。以PVDF膜作为固相基质,通过优化包被抗原浓度和抗体的工作浓度,研究出了检测磺胺药物膜免疫分析法。结果表明,该法检测牛奶和猪肝样品中四种磺胺药物(磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶和磺胺对甲氧嘧啶)总量的检测阈值为50μg/kg,可以用于磺胺药物总量的筛查。此外,分别采用本方法、Ic-ELISA和HPLC测定了市场上随机购买的20份牛奶和8份猪肝样品,三者结果基本一致。本法结果可靠、简便直观、无需特殊的检测仪器,适合于在线监测和收购现场的快速检测。

绿豆过敏原多克隆抗体制备及间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的:建立绿豆过敏原间接竞争ELISA检测方法。方法:用碱溶酸沉的方法从绿豆中提取总蛋白,考马斯亮蓝G-250法定量蛋白,SDS-PAGE分析总蛋白的分子质量。采用总蛋白免疫新西兰大耳白兔,初次免疫采用弗氏完全佐剂乳化,免疫剂量为1 mg/只;分别在初免后第14、28、32和46天加强免疫,共4次,以弗氏不完全佐剂乳化,免疫剂量为0.5 mg/只。采用Protein A-Sepharose 4B亲和层析纯化抗血清。通过优化绿豆蛋白的包被量和抗体的稀释倍数,建立间接竞争酶联免疫检测方法。结果:经SDS-PAGE分析得到主要的绿豆蛋白分子质量为50、38、34和25 ku。免疫制备的抗绿豆过敏原多克隆抗体效价达到32 000。包被绿豆蛋白0.1μg/孔,抗体稀释1∶32 000,建立了间接竞争酶联免疫检测方法,灵敏度IC50=(0.72±0.035)μg/mL,检出限IC15=(0.72±0.035)μg/mL。结论:成功建立了绿豆过敏原间接竞争酶联免疫检测方法。

基于蓝光光盘技术的黄曲霉毒素B1快速定量检测

提出了基于蓝光光盘BD(Blu-ray Disc)技术和间接竞争免疫反应原理的黄曲霉毒素B1(Aflatoxin B1,AFB1)的定量检测方法。文中采用Na OH溶液活化水解BD表面使生物分子固定在其表面,并结合二甲基硅氧烷(PDMS)微流控通道制备间接竞争免疫检测结构,通过纳米金标记/银染技术增强信号,利用标准光驱结合光盘数据质量诊断软件(PlexUtilities)分析光盘上反应条带的错误数与AFB1浓度之间的关系,实现了对AFB1的定量检测。同ELISA的检测结果进行对比,二者结果基本一致。该方法检测限达到0.5 ng/mL,检测范围为0.5 ng/mL^200 ng/mL,满足我国国标对食品中AFB1的限定标准。

酶联免疫生物测定纸质玩具中丙烯酰胺的迁移

目的建立纸质玩具中丙烯酰胺(acrylamide,AA)衍生化后酶联免疫生物的测定方法,对比分析在啃咬和舔舐暴露模式下AA的迁移规律,评估低龄儿童(3~36月龄)接触纸质玩具的AA日均摄入量和致癌风险。方法模拟不同温度(4,37,60℃)、盐浓度(0.001,0.01,0.1 mol/L)、pH(2,7,9)口腔暴露条件,研究AA的迁移规律,基于迁移曲线和Fick第二定律拟合相应的迁移模型,应用其预测实际样本的迁移情况。结果建立的酶联免疫生物检测方法的回收率为84.45%~92.31%,对比分析了啃咬和舔舐暴露模式下AA的迁移差别,迁移量与唾液模拟液的温度和盐离子的浓度呈正相关,pH的改变会影响AA的溶出;评估了低龄儿童接触儿童纸质玩具的AA日均摄入量和致癌风险,该值低于风险阈值。结论啃咬模式下纸质玩具中AA的迁移风险更大,基于温度37℃、离子强度0.01 mol/L和pH=7作为基线的接触条件,扩散系数(Dp)为2.20μm^(2)/s,拟合得到的迁移模型相关系数R2为0.90~0.98,应用于预测儿童纸质玩具中AA的线性曲线的相关系数R2为0.97,表明该模型可用于预测儿童纸质玩具中AA的迁移情况,此项工作对儿童接触纸质玩具的风险性评估具有重要意义。

基于洛美沙星免疫原的喹诺酮药物广谱特异性抗体制备的研究

以洛美沙星为半抗原,采用碳二亚胺法和活泼脂法将洛美沙星分别偶联于牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)制备出免疫原和包被抗原,免疫新西兰大白兔获得了抗体。经间接竞争酶联免疫吸附分析方法(icELISA)鉴定,首次基于洛美沙星一种半抗原获得了能够识别至少11种喹诺酮药物的抗体,且检测限低于10ng/mL,灵敏度满足相关标准检测要求。这对进一步开发喹诺酮类药物多残留检测试剂盒具有重要意义。