间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究

杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。

基于QuEChERS样品前处理的间接竞争酶联免疫分析法快速检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)

目的解决间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)检测薏苡仁中黄曲霉毒素B_(1)(Aflatoxin B_(1),AFB_(1))的基质干扰问题,建立一种简便的高通量检测方法,用于薏苡仁中AFB_(1)的快速筛查。方法以ic-ELISA的显色值和抑制率为评价指标优化样品前处理过程,重点考察QuEChERS萃取净化技术、不同稀释溶剂和稀释方式消除基质效应的效果,并对建立的方法进行方法学考察,最后应用于薏苡仁实际样品检测,检测结果用液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)进行确证。结果建立了一种无需任何校正,可用溶剂标准曲线进行定量分析的ic-ELISA。方法的半数抑制浓度为0.074 ng/mL,线性范围为1.37~20.0μg/kg,加标回收率在75.12%~84.46%之间,RSD小于6%。122批薏苡仁及其相关样品中AFB_(1)的阳性率为20.5%,阳性样品的超标率为24.0%,污染水平为1.76~27.56μg/kg。ic-ELISA与LC-MS/MS检测结果的相关系数(r)为0.98。结论QuEChERS萃取净化技术能够有效去除薏苡仁中的干扰成分,对快速样品前处理方法的建立具有重要应用价值,结合本研究所建立的ic-ELISA,为薏苡仁中AFB_(1)的检测和监测提供简便有效的技术手段。

间接竞争酶联免疫分析法快速检测决明子中黄曲霉毒素B_(1)的研究

目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑制曲线,然后以显色值和灵敏度为评价指标筛选样品的提取和稀释方法。对所建立的方法进行方法学考察,最后用于实际样品检测。结果:经过优化,确定样品的最佳提取溶剂为乙腈-甲醇溶液(90∶10,v/v),稀释溶液为甲醇-PBS溶液(10∶90,v/v),稀释倍数为20倍。方法的半数抑制浓度为0.078 ng/mL,线性范围为0.016~0.25 ng/mL,回收率为85.00%~109.2%,RSD为0.45%~9.08%。采用所建立的方法对25批决明子进行了检测,经液相色谱-串联质谱法确证,超过限量标准的样品的假阳性率小于5%。结论:本文所建立的ic-ELISA灵敏、简便,适用于决明子中AFB_(1)的快速筛查,但仍存在一定的假阳性率,后续还需要对产生干扰的基质因素进行研究并消除,进一步提高检测的准确度。

间接竞争酶联免疫分析方法检测花生中黄曲霉毒素B1

目的:针对花生中强毒性污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)建立了一种准确、灵敏的间接竞争酶联免疫分析方法(ic-ELISA)。方法:制备了AFB1包被抗原,包被量为0.1μg/孔;抗体稀释64000倍;选用0.1%脱脂乳粉为方法封闭液,0.01mol/L磷酸盐缓冲液(PBS,pH7.4)为样品稀释液;结果:在最优的试验条件下,建立的ic-ELISA对目标物AFB1的检测线性范围为0.0097~0.088μg/L(R2=0.999);灵敏度(IC50)和检出限(IC15)分别达到0.027μg/L和0.0066μg/L。板内变异系数(n=6)为0.29%~16.9%,板间变异系数(n=6)为0.22%~21.19%。在花生样品中AFB1的检测灵敏度(IC50)为1.04μg/kg,回收率为96.67%~106.51%。结论:本研究建立的ic-ELISA方法操作相对简便,检测灵敏度高、准确性好,可稳定地用于花生样品中AFB1污染物的定量分析检测。

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

目的制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60 min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r2=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%~110.35%,且相对标准偏差均小于10%。结论该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于茶叶样本中GLY残留的快速检测。

微囊藻毒素纳米抗体的制备及其间接竞争酶联免疫分析方法的建立

微囊藻毒素(MC)作为肝毒性最强的藻毒素之一,在受污染的水体中时常检出,严重威胁着人畜饮水安全,加强其检测十分重要。在前期研究中,已成功构建抗MC-LR噬菌体展示纳米抗体文库。本研究以MC-LR-OVA作为包被原,经4轮固相淘筛,获得纳米抗体M110。该抗体可识别MC-LR,且具有良好的稳定性。基于纳米抗体M110建立了检测MC-LR的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),检测的半抑制浓度IC50值为3.55 ng/mL,检测限0.65 ng/mL,线性范围1.28~9.88 ng/mL。与UPLC-MS/MS方法检测结果相关系数达0.998,提示本方法可用于水体中微囊藻毒素残留的检测。

间接竞争酶联免疫分析法测定葛根中葛根素的含量

目的利用间接竞争酶联免疫分析法（indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA）测定葛根中葛根素的含量。方法利用抗葛根素单克隆抗体,通过线性关系、精密度、回收率的考察,建立葛根素的ic-ELISA分析方法。结果该方法的线性范围为15.6～500ng/m L,孔间差和板间差均不大于3.5%,平均回收率为101.8%,并且该法检测结果与高效液相色谱法检测结果一致。结论本实验为葛根质量控制以及含葛根药材的中药复方中葛根素的含量测定提供了一种新技术方法。

基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株。再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性。采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性。【结果】成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应。对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留。

吡虫啉单克隆抗体的制备及其间接竞争化学发光酶联免疫分析方法的建立

以吡虫啉原药和3-巯基丙酸为原料,合成了吡虫啉半抗原,通过活泼酯法将其与载体蛋白钥孔血蓝蛋白(KLH)、牛血清白蛋白(BSA)偶联制备得到完全抗原,经免疫Balb/c雌性小鼠并与骨髓瘤细胞融合获得吡虫啉单克隆抗体,建立了用于吡虫啉检测的间接竞争化学发光酶联免疫分析方法(ic-CLEIA)。优化了方法的包被原稀释倍数、抗体稀释倍数、缓冲液种类、缓冲液的pH值、一抗竞争反应时间、酶标二抗稀释倍数等条件,最适条件为:包被原质量浓度62.50 ng/mL(稀释16000倍),抗体质量浓度103.12 ng/mL(稀释64000倍),缓冲液PBS(pH 7.4),抗原与抗体竞争反应时间30 min,酶标二抗稀释倍数1∶7000。结果表明,在最适条件下该方法的检出限(IC_(10))为0.03 ng/mL,IC_(50)为0.57 ng/mL,线性检测范围(IC_(20)~IC_(80))为0.083~3.99 ng/mL。与氯噻啉的交叉反应率为2.2%,与噻虫胺、呋虫胺、啶虫脒、噻虫啉、噻虫嗪5种吡虫啉结构类似物无明显交叉反应。对黄瓜和苹果样品的加标回收率为82.0%~112%,相对标准偏差小于15%。实际样品检测结果与HPLC仪器方法相关性良好(r^(2)=0.989)。结果表明,所建立的ic-CLEIA方法具有特异性强、灵敏度高的特点,可用于食品中吡虫啉残留的快速检测。

基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法的建立

为建立一种简便、快速、准确的双酚A检测方法,采用活性酯法将双酚酸与牛血清蛋白、卵清蛋白偶联制备人工抗原免疫BALB/c小鼠。选择抗血清效价和灵敏度高的BALB/c小鼠,采用聚乙二醇法制备杂交瘤细胞,获得一株可分泌双酚A单克隆抗体的杂交瘤细胞株。通过方阵滴定和反应条件优化,建立一种基于单克隆抗体的双酚A间接竞争酶联免疫分析法。该检测方法在0.5 ng/mL^50 ng/mL内有良好的线性关系,最低检测限IC10为0.5 ng/mL,半数抑制率IC50为16.65 ng/mL,水样中加标回收率为89.72%~105.25%。该单克隆抗体效价高、特异性强,该检测方法灵敏度高。

呋喃它酮代谢物单链抗体制备和酶联免疫分析方法

从呋喃它酮代谢物5-吗啉甲基-3-氨基-2-恶唑烷基酮(5-morpholinomethyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)衍生物单克隆抗体杂交瘤细胞中克隆抗体重链可变区和轻链可变区基因,通过(G1y4Ser)3连接肽采用重叠延伸聚合酶链式反应技术构建单链抗体基因,pET-22b(+)表达载体进行表达,Ni亲和柱进行纯化,制备得到抗AMOZ衍生物单链抗体,采用棋盘滴定实验优化包被原包被浓度和单链抗体稀释度,建立基于此单链抗体的AMOZ残留间接竞争酶联免疫分析方法并对方法进行评价。结果表明:最佳包被抗原质量浓度和单链抗体稀释度分别为0.0625μg/mL和20倍;建立的间接竞争酶联免疫分析方法半抑制浓度为8.65μg/L,线性范围为2.90~53.28μg/L,检测限为1.48μg/L;除与原药呋喃它酮有交叉反应外,此单链抗体与其他硝基呋喃类抗生素及其代谢物交叉反应率均小于0.1%,虾肉样品添加回收率为74.3%~86.6%;用高效液相色谱-串联质谱法对免疫测定结果进行确证实验,两种方法相关性良好(R^2=0.9992),说明建立的间接竞争酶联免疫分析方法可用于虾类等水产品中AMOZ残留的快速筛查。

DPPs类有机磷农药宽谱酶联免疫吸附分析方法的建立

【目的】制备识别二乙氧基硫代磷酸酯类有机磷农药(DPPs)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析法(ic-ELISA),为实现农产品有机磷农药残留快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酰氧基)-肉桂酸为半抗原,制备完全抗原。筛选免疫小鼠,制备稳定分泌可识别DPPs抗体的单克隆细胞株,筛选出抗原和抗体最佳工作浓度组合,建立该单抗的ic-ELISA标准曲线,并分析该单抗与6种DPPs的交叉反应率,评估ic-ELISA的广谱性。利用所得抗体与喹硫磷交叉反应最强的特性对采购的柑橘和鲜橙样品进行喹硫磷添加回收试验。【结果】成功合成识别DPPs的人工抗原,包括包被抗原DPPs-OVA和免疫抗原DPPs-BSA。通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、广谱性最强的单克隆细胞株5G_(8)。以0.5μg/mL包被抗原DPPs-OVA、1.0μg/mL抗体5G_(8)2D_(5)为最佳工作浓度组合,将细胞株筛选过程中抗体识别率较高的有机磷农药——对硫磷选定为抑制标准物,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC_(50))为41.78 ng/mL,检测范围(IC_(20)~IC_(80))为3.21~239.59 ng/mL;所建立的ic-ELISA与5种DPPs(蝇毒磷、喹硫磷、甲拌磷、甲基对硫磷和倍硫磷)均存在不同程度的交叉反应,其中以喹硫磷的交叉反应率最高,达19.79%。比较ic-ELISA和气相色谱法(GC)对柑橘和鲜橙样品中喹硫磷的添加回收结果发现,ic-ELISA的添加回收率为75.80%~116.12%,GC的添加回收率介于92.5%~115.00%,2种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA经GC交叉验证准确性较高,可用于快速检测农产品中的喹硫磷残留。

燕窝唾液酸糖蛋白间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的建立间接竞争酶联免疫(indirect competitive enzyme linked immunesorbent assay,IC-ELISA)检测燕窝中唾液酸糖蛋白的分析方法。方法以唾液酸糖蛋白为抗原,制备单克隆抗体,对IC-ELISA步骤中相关参数进行优化,确定最佳反应条件。结果最佳包被抗原为1:2000,抗体稀释倍数为1:5000;封闭液浓度为1%牛血清白蛋白(bovine serum albumin,BSA),封闭时间为150 min;竞争时间30 min;酶标二抗浓度稀释倍数为1:1000,孵育时间30 min;显色时间为10 min。建立的IC-ELISA检测方法半抑制浓度(50%inhibition concentration,IC_(50))为8.61μg/mL,线性范围为2.23~33.25μg/mL,回收率为82.7%~92.0%,相对标准偏差(relative standard deviation,RSDs)为1.7%~8.9%。结论该方法灵敏度较高、特异性强,可以有效地鉴别假冒伪劣燕窝产品,具有较好的实际应用价值。

氟乐灵抗体的制备及其酶联免疫分析方法的建立

该研究针对农(水)产品中氟乐灵农药残留的问题,建立了间接竞争酶联免疫分析方法,快速检测氟乐灵农药。利用3,5-二硝基-4-氯-三氟甲苯与仲胺侧链氨基反应合成半抗原2C,采用碳二亚胺法将半抗原2C与牛血清白蛋白/卵清蛋白偶联合成完全抗原。通过免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体Pc Ab-2C,基于间接竞争酶联免疫分析方法原理对包被原和抗体的稀释倍数、包被温度、抗体和标准品稀释液等7个因素进行系统优化,最终建立间接竞争酶联免疫分析方法。结果表明:该方法的IC_(50)为54.07 ng/mL,最低检测限为7.22 ng/mL,线性范围为12.56~282.62 ng/mL,与20种氟乐灵结构类似物进行交叉反应,只有2种药物的交叉反应率大于15%,方法特异性良好;对大豆、大豆油和鳗鱼等样品进行检测,添加回收率为89.8%~106.4%,变异系数小于10%。采用气相色谱法进行验证,添加回收率为89%~108.2%,变异系数小于10%,两种方法测定结果呈现良好的线性关系(R^(2)=0.99)。该研究所建立的方法具有灵敏度强、特异性强、准确度高等优点,适用于农(水)产品中氟乐灵农药残留的高通量快速检测。

恩诺沙星残留酶联免疫分析法的建立

不合理地使用喹诺酮类药物导致了市场上出现喹诺酮类抗生素残留严重的现象,危害消费者的健康,因此建立快速检测喹诺酮类药物的方法成为研究热点.选择恩诺沙星、达氟沙星、沙拉沙星3种药物为研究对象,通过碳化二亚胺法制备免疫原和包被原,使用紫外分光光度法鉴定,通过免疫BALB/c小鼠初步筛选可用的免疫原,然后免疫新西兰大白兔制备特异性多克隆抗体,建立icELISA方法.人工抗原ENR-OVA稀释1∶64000,在37℃恒温水浴条件下孵育12 h,一抗稀释1∶16000,一抗与抗原竞争反应60 min,酶标抗体稀释1∶5000时反应最佳.抗体对恩诺沙星的半数抑制浓度(IC50)为4.539μg·mL^-1,线性范围(IC20~IC80)为0.595~34.632μg·mL^-1,与诺氟沙星、环丙沙星、氧氟沙星有明显的交叉反应.

酶联免疫法检测动物组织及尿液中氟苯尼考与甲砜霉素的残留

针对食品中氟苯尼考及甲砜霉素多残留污染问题,基于新设计的半抗原制备了系列人工抗原,通过免疫动物获得了可同时特异性识别氟苯尼考与甲砜霉素的多克隆抗体,并在抗体-包被原组合的筛选及反应条件优化基础上,建立了动物组织及尿液中氟苯尼考和甲砜霉素残留同时检测的酶联免疫分析方法。本方法对于氟苯尼考的半数抑制浓度(IC_(50))为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31~5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC_(50)为2.13 ng/mL,线性检测范围为0.41~11.20 ng/mL,检出限为0.15 ng/mL,与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,动物组织及尿样中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77.2%~116.0%之间,相对标准偏差<15%,适用于实际样品中氟苯尼考和甲砜霉素的快速筛查检测。

牛奶及水样中泰乐菌素酶联免疫检测方法研究

针对环境及食品中泰乐菌素残留问题,本研究将泰乐菌素分子结构侧链醛基一步直接氧化为羧基,并将其作为新的半抗原,通过免疫新西兰大白兔制备了特异性的抗泰勒菌素多克隆抗体,优化的反应条件为:包被原稀释6000倍,抗体稀释2000倍,反应缓冲液为pH 7.4、吐温含量0.1%、离子浓度0.01 mol/L的PBST,二抗稀释倍数为4000倍,二抗反应时间30 min。在此优化条件下,建立了检测泰乐菌素的间接竞争酶联免疫分析法(icELISA),半数抑制浓度(IC_(50))为1.39 ng/mL,线性范围(IC_(20)~IC_(80))为0.17~11.0 ng/mL,检出限(IC_(10))为0.07 ng/mL,与结构功能类似物交叉反应率均小于0.1%。对纯牛奶、自来水、鱼塘水中泰乐菌素的添加回收率在78.4%~105.6%之间,RSD<15%,检测结果与HPLC-MS/MS方法具有良好的相关性(R^2=0.97)。本研究建立的icELISA方法适用于牛奶及水样中泰乐菌素残留的特异性快速筛查。

基于单克隆抗体的滴滴涕、硫丹和水胺硫磷酶联免疫检测方法研究

该研究制备了滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的单克隆抗体。利用商业化的辣根过氧化物酶标记羊抗鼠抗体作为检测二抗,分别建立了3种农药的间接竞争酶联免疫吸附分析方法(Indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。在最优条件下,ic-ELISA对滴滴涕、硫丹和水胺硫磷检测的半数抑制浓度和检出限分别为10.72 ng·mL^(-1)和1.85 ng·mL^(-1)、9.69 ng·mL^(-1)和2.19 ng·mL^(-1)及13.26 ng·mL^(-1)和3.04 ng·mL^(-1)。特异性评价结果显示,滴滴涕对o,p-滴滴伊、p,p-滴滴伊和o,p-滴滴涕的交叉反应率(CR)为9.0%~33.4%;硫丹对艾氏剂、氯丹、狄氏剂、β-硫丹和α-硫丹的交叉反应率为17.4%~84.3%;水胺硫磷对其6种结构类似物均无明显交叉反应(CR<0.1%)。所建立的方法对稻田水、土壤、苹果和香蕉样品中滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的平均加标回收率和相对标准偏差分别为71.4%~93.3%和3.8%~9.6%、74.0%~97.4%和3.0%~11%及70.8%~97.0%和4.2%~12%。同时,ic-ELISA对滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的检测结果与色谱仪器具有较好的一致性。上述结果表明,该研究制备的滴滴涕、硫丹和水胺硫磷的单克隆抗体可用于建立ic-ELISA,且具有较好的灵敏度和准确性。

间接竞争ELISA法检测谷物中T-2毒素

T-2毒素是单端孢霉烯族毒素的重要代表，在单端孢霉烯族毒素中毒性最强，是主要的食品污染源之一，用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA）对谷物中的T-2毒素进行了测定。从样品的处理、T-2毒素的添加回收及ELISA的实验检测等方面进行试验，最终结果用分析软件分析相关数据得到相关系数为0．998，IC5。为1．3μg/kg，标准品浓度为0-16．2μg／kg，灵敏度为0．2μg／kg，添加回收率均大于90％。该法测定T-2毒素方法简便，特异性高，灵敏度高，重复性好，适合用于检测谷物中的T－2毒素。

新型抗植物病毒剂毒氟磷的酶联免疫分析方法

[目的]以新型抗病毒剂创制品种毒氟磷为研究对象,通过杂交瘤技术建立抗毒氟磷及其类似物的高特异性杂交瘤细胞系,应用体内诱生腹水制备单克隆抗体,开发出检测毒氟磷及其类似物的酶联免疫分析方法。[方法]利用2-甲酰苯氧乙酸、氨基酸合成半抗原,通过碳二亚胺法合成人工抗原,免疫动物并通过杂交瘤技术得到一株杂交瘤细胞株DHS3A2。[结果]在制备的单克隆抗体mAb-DHS3A2的基础上,通过对有机溶剂、pH值、离子强度等因素的筛选比较,优化了毒氟磷间接竞争ic-ELISA,方法的IC50值为(9.62±0.59)μg/L,检出限为(0.3±0.05)μg/L。[结论]该方法快速、准确,适用于不同基质中毒氟磷农药残留快速检测。