猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体间接酶联免疫吸附测定方法的建立与应用

【目的】建立一种检测猪圆环病毒3型抗体的血清学方法。【方法】以猪圆环病毒3型衣壳蛋白为包被抗原,通过筛选和优化反应条件建立一种检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,并进行特异性试验与重复性试验以及初步临床应用。【结果】确定检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法的各项最佳反应条件;仅有猪圆环病毒3型阳性血清的检测结果为阳性,显示出良好的特异性;批内变异系数和批间变异系数都小于5%,显示出良好的可重复性。在来源于北京地区与河北地区的318份猪的血清中检出猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体阳性率为32.70%,表明这两个地区存在较多的猪圆环病毒3型感染。【结论】建立了一种具有良好特异性和可重复性的检测猪圆环病毒3型衣壳蛋白抗体的间接酶联免疫吸附测定方法,可用于猪圆环病毒3型抗体的检测。

GA_4间接酶联免疫吸附测定方法的建立

利用 GA_4-17-BSA 作为免疫抗原,GA_4-16-OA 作为包被抗原,建立了检测自由态 GA_4的间接ELISA。检测极限为4.1ng/mL,抗血清与 GA_7,GA_3,GA_4-ME 的交叉反应率分别为68.51%,9.10%。1.90%,与 IAA,ABA,ZR 交叉反应率极小。

伪狂犬病毒重组gG抗原片段的原核表达及其间接酶联免疫吸附测定方法的建立

【目的】建立方便可行的伪狂犬病毒血清抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异性鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株。【方法】利用原核表达系统表达伪狂犬病毒gG抗原片段,蛋白纯化后包被,优化反应条件,建立一种用于检测伪狂犬病毒gG抗体的间接酶联免疫吸附测定方法。【结果】通过不同血清样品的检测试验,该酶联免疫吸附测定方法可以鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫猪和感染野毒的血清学阳性猪。【结论】成功建立了检测伪狂犬病毒gG抗体的酶联免疫吸附测定方法,并可特异鉴别伪狂犬病毒TK-/gG-基因缺失疫苗免疫株和野毒株,此方法敏感性强,特异性高,操作简便,适合于临床大量检测。

间接抑制酶联免疫吸附法测定大豆凝集素方法的建立

本研究用标准抗原、纯化抗体和辣根过氧化物酶标记羊抗兔IgG ,建立间接抑制酶联免疫吸附法 ,测定了几种不同品种生大豆和豆粕产品的凝集素含量。结果表明 ,间接抑制ELISA检测大豆制品中的凝集素含量变异系数小于 15 % ,样品回收率误差在 15 %以内 ;抑制率在 2 0 %～ 70 %范围内 ,曲线呈现良好的线性关系 ,提取液中的大豆凝集素检测下限为 10mg mL。

组织蛋白酶B酶联免疫吸附测定方法的建立

背景:组织蛋白酶B(CB)与恶性肿瘤的分期、转移和预后关系密切。目的:建立CB酶联免疫吸附测定(ELISA)方法,以便评价肿瘤患者血清CB含量与预后的关系。方法:将含有CB cDNA的重组痘苗病毒转染Hela细胞,表达目的蛋白重组CB;经Western blot分析和制备型电泳纯化后,免疫新西兰大白兔,获得CB多克隆抗体。纯化后的抗体一部分作为固化抗体,另一部分用辣根过氧化物酶标记:棋盘滴定法确定工作浓度。结果:痘苗病毒真核表达系统可以高效表达目的蛋白。制备型电泳能简单、有效地纯化蛋白。重组CB免疫动物后,可获得高效价的CB多克隆抗体,用以制备相应的固化抗体和酶标抗体检测CB。结论:用重组CB免疫动物后可获得相应抗体,以建立CB检测的ELISA方法。

基于免疫磁珠净化间接竞争酶联免疫吸附试验检测氟喹诺酮类药物

本研究旨在建立一种基于免疫磁珠进行分离、富集和净化前处理,检测鸡肉、鸡肝和鱼肉中氟喹诺酮类药物残留的间接竞争酶免疫吸附试验(indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay,icELISA)的研究方法。通过对合成免疫磁珠及免疫磁珠净化过程中单克隆抗体添加量、偶联时间、缓冲液pH、抗原添加量、抗原捕获时间、温度及包被条件等进行优化,初步建立了基于免疫磁珠净化的icELISA检测方法。结果显示:1)在1 mg的磁珠中,沙拉沙星(sarafloxacin,SAR)单克隆抗体最佳偶联量为15μg,偶联时间60 min,pH为4.4;2)最佳抗原添加量为1 ng·mL^(-1),捕获时间40 min,缓冲液为0.01 mol·L^(-1)PBS,IC50为0.73 ng·mL^(-1),线性范围为1.0~3.2 ng·mL^(-1);3)氟喹诺酮类药物在鸡肉、鸡肝、鱼肉的检测限均不超过1.33、2.17、2.31μg·kg^(-1),回收率为76.83%~98.70%,批内变异系数批间变异系数均不超过15%,经验证,鸡肉样本检测结果与高效液相色谱法(HPLC)结果一致。结果表明,与传统仪器检测方法相比,该方法提高了检测氟喹诺酮类药物的简便性、选择性以及检测效率,为氟喹诺酮类药物的残留检测提供了新思路。

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较

目的比较酶联免疫吸附法（ELISA）和间接免疫荧光法（IIF）检测抗dsDNA抗体的检出情况及符合率。方法用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法同时检测286份临床疑为系统性红斑狼疮（SLE）的病人血清。结果286份样本中ELISA法捡出31例抗dsDNA抗体阳性，255例抗dsDNA抗体阴性，而在ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性中IIF法检测仅有13例阳性，阳性符合率仅为41．94％。ELISA法检出的255例抗dsDNA抗体阴性标本中IIF法检测有255例阴性，职性符合率100％。ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率有显著性差异。结论ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率差异有统计学显著性意义（P〈0．05），ELISA法检测抗dsDNA抗体简便、快速、设备要求不高，可以用于大批量的抗dsDNA筛壹，但因为特异性不高，假阳性较多，因此有条件的实验室最好采用IIF法对阳性结果进行复检确认。

间接酶联免疫吸附试验测定恶性肿瘤血清中核糖核酸酶抑制因子表达的研究

目的:探讨间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测核糖核酸酶抑制因子(RI)在恶性肿瘤患者血清中的表达。方法:建立检测血清RI含量的间接ELISA法,检测和比较正常人、恶性肿瘤患者(乳腺癌、胃癌、肺癌、肝癌)、乳腺良性肿瘤患者血清中RI的表达水平。结果:所建立的间接ELISA法特异性高;恶性肿瘤患者血清中RI表达均明显低于正常人(P<0.05),乳腺癌亦明显低于乳腺良性肿瘤(P<0.05)。结论:RI表达的降低可以作为肿瘤良、恶性鉴别的指标之一。

布鲁菌omp19原核表达和间接酶联免疫吸附试验检测布鲁菌方法的建立

本研究原核表达并纯化了布鲁菌脂蛋白Omp19,并通过蛋白免疫印迹法对其免疫原性进行验证。采用Omp19作为包被抗原,建立检测羊种布鲁菌的间接酶联免疫吸附试验(iELISA),检测90份羊血清样本,并与标准血清凝集试验(SAT)比较,用SPSS软件进行数据分析。结果显示,iELISA与SAT的阳性符合率为95.12%,阴性符合率为67.35%,Kappa值为0.607 7。对2种方法进行McNemar卡方检验,结果有显著性差异(P<0.05)。本研究建立的iELISA与SAT的总符合率达80%,可作为羊种布鲁菌病血清学诊断的备用方法。

间接酶联免疫吸附测定河豚鱼中河豚毒素

为有效确保食用河豚鱼的安全性,进一步监测河豚鱼中河豚毒素,本方法应用间接酶联免疫吸附测定河豚鱼中河豚毒素的含量,评估河豚鱼的安全风险程度。实验结果表明,间接酶联免疫吸附法测定河豚毒素灵敏度高,方法的在线性范围为2-135μg/L内有良好的线性关系,且方法的回收率达到82.4%-92.5%,检出限能达到2μg/kg。本方法快速、简单,完全满足实际工作的需要。

结合态GA_3的间接酶联免疫吸附测定研究

利用GA3-7免疫家兔得到的抗血清,建立了检测结合态GA3的间接酶联免疫吸附测定方法（ELISA）。免疫抗原与包被抗原用最常见的DCC活化羧基与蛋白质相联。检测极限为12.3 ng/mL,线性范围12.3~1 000 ng/mL。抗血清与GA3的交叉反应率为2.3%,与GA4、IAA、ABA和ZR的交叉反应率均很小。

生猪尿液中盐酸克伦特罗残留测定方法——酶联免疫吸附测定法

通过酶联免疫反应测定尿液中盐酸克伦特罗的含量,该方法适用于猪尿中盐酸克伦特罗残留的常规快速筛选检测。

基于特异性对硫磷单克隆抗体的间接竞争酶联免疫吸附分析方法建立

【目的】制备特异性识别对硫磷(PA)的单克隆抗体,建立其间接竞争酶联免疫吸附分析方法(ic-ELISA),为实现对硫磷的农残快检提供技术支持。【方法】以化合物4-(二乙氧基硫代磷酸酯基)苯甲酸为半抗原,分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联制备人工抗原,免疫7周龄Balb/c雌性小鼠,取抗血清效价最高、特异性最优小鼠的脾脏细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,采用间接酶联免疫方法(i-ELISA)及ic-ELISA分别评价融合细胞株的阳性和特异性,通过有限稀释法筛选稳定分泌对硫磷抗体的单克隆细胞株。再通过棋盘格试验筛选出抗原抗体最佳工作浓度组合建立对硫磷ic-ELISA标准曲线,并基于对硫磷单克隆抗体与各结构类似物的交叉反应率,评估ic-ELISA的特异性。采购西红柿样品进行对硫磷的添加回收试验,运用气相色谱法(GC)验证ic-ELISA的准确性。【结果】成功合成对硫磷人工抗原PA-BSA和PA-OVA,经5次免疫后融合小鼠的血清效价为8×103;通过有限稀释法筛选获得灵敏度高、特异性最强的对硫磷单克隆细胞株4F11A10。以2μg/mL包被抗原PA-OVA、0.25μg/mL细胞株4F11A10分泌抗体为最佳抗原抗体工作浓度组合,建立对硫磷ic-ELISA及其标准曲线,其半抑制浓度(IC50)为50 ng/mL,检测范围(IC20~IC80)为2.34~300 ng/mL;所建立的对硫磷ic-ELISA与5种有机磷农药(丙溴磷、杀扑磷、倍硫磷、水胺硫磷和甲拌磷)均无交叉反应。对比ic-ELISA和GC测定西红柿样品中对硫磷的添加回收试验结果,发现ic-ELISA的添加回收率为84.86%~100.27%,GC的添加回收率为97.60%~106.40%,两种方法的检测结果一致性较好。【结论】建立的ic-ELISA可用于快速检测蔬菜、水果等农产品中的对硫磷残留。

间接酶联免疫吸附检测己烯雌酚条件优化

以制备好的抗血清为基础优化间接酶联免疫吸附法的测定条件。采用间接酶联免疫吸附法测定己烯雌酚抗血清效价,用方阵滴定法确定包被浓度和抗血清工作浓度,进而优化稀释缓冲液﹑pH﹑竞争时间等实验条件。选择与DES结构类似的四种药物进行交叉反应,计算交叉反应率。结果表明产生的抗血清的稀释度可以达到1:102400。方阵滴定法确定最佳包被浓度和抗血清工作浓度分别为1:200和1:4000。通过间接ELISA方法建立了标准曲线,抑制曲线表明,兔抗血清中抗体特异性很好,呈现线性关系,其IC50为1.89ng/ml,最低检测限为0.08ng/ml。四种DES结构类似物的交叉反应率除双烯雌酚3.1%外,其余均小于0.1%。从而优化了间接酶联免疫检测条件,建立了己烯雌酚实用的检测方法,为最终组装试剂盒奠定了基础。

间接酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清4型鸭疫里默氏杆菌抗体的研究

应用超声波裂解法制备的血清4型鸭疫里默氏杆菌(RA)裂解物作为抗原包被酶标板,成功建立了4型RA抗体检测的间接ELISA法。

玉米中伏马毒素B1、B2间接竞争酶联免疫吸附方法的建立

基于伏马毒素B1(fumonisin B1,FB1)单克隆抗体建立了间接竞争酶联免疫吸附法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA),用于玉米中伏马毒素的初步筛查。该方法优化了抗原包被浓度和单抗体稀释倍数、抗原包被条件、酶标二抗稀释倍数、底物作用时间。结果显示,线性检测范围为1.41~54.2ng/m L,最低检测限为24.5μg/kg,实测玉米样品加标回收率为89.36%~108.54%。交叉反应结果显示,与伏马毒素B2(fumonisin B2,FB2)交叉反应率为129.88%,与其他真菌毒素交叉反应均小于10%,该ic-ELISA方法可对玉米样品中的FB1与FB2总量进行初筛。

间接酶联免疫吸附技术检测活的非可培养状态的大肠杆菌O157:H7

大肠杆菌 O157:H7在低温贫营养的条件下可进入活的非可培养状态 (Viable butnonculturable state,VBNC) ,用常规的培养法无法将其检出。作者利用间接酶联免疫吸附技术(Indirect Enzyme- L inked Immunosorbent Assay,EL ISA)检测 VBNC的大肠杆菌 O157:H7,发现此方法可以快速有效地将其检出 ,最小检测浓度为 10 5个 / m L。

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析。方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18U/mL为阳性,12～18U/mL为可疑,≤12U/mL为阴性。结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%。经卡方检验P<0.01。其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499。结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法。同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性。

改良凝集试验(MAT)与间接血凝试验(IHAT)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测弓形虫抗体的比较分析

为了评价用于检测弓形虫抗体的改良凝集试验 (MAT)、用MAT、间接血凝试验 (IHAT)、酶联免疫吸附试验 (ELISA)对动物和人的血清进行检测 ,比较阳性检出率与符合率 ,并对检测的结果进行统计分析。结果显示 :MAT和IHAT、MAT与ELISA检测动物和人血清的阳性检出率都无显著差异 (P >0 0 5 )。MAT与IHAT检测动物血清的总符合率为 78 7% (5 9 75 ) ,检测人血清的总符合率为 81 6 % (71 87) ;MAT与ELISA检测动物血清的总符合率为 74 0 % (5 4 73) ,检测人血清的总符合率为 79 3 % (6 9 87)。应用配对资料卡方检验分析显示 :MAT与IHAT、MAT与ELISA检测的结果一致。因此 ,检测弓形虫抗体的MAT与IHAT和ELISA具有良好的符合性 ,这 3种方法都能用于弓形虫抗体的常规普筛和血清流行病学研究。