早期静脉注射葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响

目的观察预先静脉注射葡萄糖酸钙溶液,对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学的影响;评估葡萄糖酸钙溶液对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法将雄性SD大鼠80只随机分为葡萄糖酸钙治疗组与致痛组,治疗组大鼠预先尾部静脉注射葡萄糖酸钙溶液,两组大鼠随机分为5组,分别以低剂量(10μL/kg)、中低剂量(40μL/kg)、中剂量(100μL/kg)、高剂量(300μL/kg)的间斑寇蛛毒素及福尔马林(10%甲醛溶液)进行足底注射,观察记录两组大鼠注射后2、15、30min及2h缩足、舔足次数。结果 (1)中低剂量组和高剂量组的蛛毒致痛大鼠缩足次数在15min内均高于福尔马林致痛组,然而30min却低于福尔马林致痛组(P<0.05);(2)15min时致痛组及治疗组大鼠缩足次数均与毒素浓度呈显著的正相关(r2=0.597,P<0.05;r2=0.426,P<0.05);(3)葡萄糖酸钙治疗组与各毒素致痛组相比,大鼠缩足次数均减少(P<0.05)。结论间斑寇蛛毒素致痛大鼠的作用相对于福尔马林在30min内更为强烈,但是30min后则较福尔马林组有所减轻,预先静脉注射葡萄糖酸钙的方法对间斑寇蛛毒致痛有明显的镇痛作用。

钙剂对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响

目的:观察预先注射葡萄糖酸钙、吗啡、安痛定对间斑寇蛛毒致痛大鼠行为学及致痛因子表达的影响,评估葡萄糖酸钙对抑制间斑寇蛛毒致痛作用的疗效。方法:将雄性SD大鼠120只随机分为钙剂实验组、吗啡对照组和安痛定对照组,实验组大鼠预先尾静脉注射葡萄糖酸钙溶液,吗啡和安痛定对照组大鼠分别预先皮下注射吗啡和安痛定溶液,随后三组大鼠分别足底注射4种浓度的间斑寇蛛毒素,记录三组大鼠不同时间缩足次数,并应用免疫组织化学分析大鼠脊髓致痛因子P2X3受体、P物质、CGRP的表达水平。结果:(1)当毒素浓度为10μl/kg,15 min时,吗啡的镇痛作用优于安痛定,而钙剂镇痛效果最差;1 h时,吗啡及安痛定的镇痛效果较15 min时明显,钙剂的作用更优于吗啡及安痛定(P<0.05)。毒素浓度为300μl/kg,15 min、30 min时钙剂的镇痛作用优于吗啡和安痛定(P<0.05)。(2)钙剂组大鼠脊髓背角神经元中P2X3受体的表达显著低于吗啡及安痛定组;P物质在三组实验大鼠脊髓背角神经元、神经胶质细胞的表达均为阴性;钙剂和安痛定相比于吗啡抑制CGRP表达的作用更强。结论:在不同毒素浓度和不同时间下,钙剂和吗啡、安痛定的镇痛效果各有优劣,钙剂通过抑制P2X3受体及CGRP的表达进而抑制疼痛的作用较吗啡及安痛定更强,三种镇痛药物均可抑制P物质的表达。

间斑寇蛛毒致大鼠肾损伤的组织病理及超微结构观察

目的:观察间斑寇蛛毒对肾脏损伤的作用方式,为今后间斑寇蛛毒致肾损伤干预措施提供理论依据。方法:将雄性SD大鼠36只,随机分为对照组、(10μl/kg、40μl/kg、100μl/kg、300μl/kg)剂量毒素组,并以间斑寇蛛毒素进行足底注射,24h后处死后,对肾脏组织病理行光镜(HE、PAS、PASM、Masson染色、银染)和电镜检查。结果:①各剂量的毒素组均表现出肾小囊内出血,肾小管水肿的急性肾损伤特征。②100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到肾小囊内大量出血,部分肾单位内血球管萎缩消失,肾小管管壁正常结构消失,肾小管上皮细胞脱落,细胞核溶解消失。③各组肾单位内基膜、系膜及胶原纤维结构未观察到异常变化,无新月体的形成。④各剂量毒素组细胞超微结构均显示内皮细胞、系膜内有团块状电子致密物的沉积,肾单位内毛细血管腔阻塞。⑤100μl/kg、300μl/kg毒素剂量组观察到上皮细胞足突的消失,内质网吞噬体大量增加,滤过膜间隙增大,基膜及内皮细胞的脱落。结论:间斑寇蛛毒素可致大鼠的肾损伤,这种损伤作用是直接的,且损伤具有浓度依赖性。

间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道蛋白表达

目的分析不同浓度间斑寇蛛毒致痛大鼠脊髓灰质神经元细胞中钙离子激活的内向整流钾通道（IK1）的蛋白表达变化。方法选取36只雄性sD大鼠，采用分层随机抽样法分为对照组（4只）和毒素组（32只），毒素组分别于右后足趾部皮下注射10、40、100、300μl／kg间斑寇蛛粗毒液，每种浓度各8只。观察毒素组大鼠注射毒液后的缩足反应。对照组不做处理。24h后将所有大鼠断颈处死，取样第4—5腰椎脊髓样本，采用苏木精一伊红（HE）染色法观察脊髓神经元细胞结构，采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶连结（SP）法观察神经元细胞中IKl蛋白的表达情况，采用实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测IK1 mRNA的表达水平。分析不同浓度下IK1 mRNA及蛋白表达的变化。采用Pearson相关性检验分析大鼠缩足次数与毒液浓度的相关性。结果注射间斑寇蛛毒15min后毒素组大鼠1h内的缩足次数分别为（44±16）、（64±9）、（69±19）、（91±35）次，Pearson相关性分析显示不同浓度下的1h缩足次数与毒液浓度呈正相关（F2=0．548，P〈0．05）。对照组及10、40、100、300μl／kg毒素组大鼠脊髓神经元细胞中平均IK1蛋白阳性细胞数分别为（2．0±1．0）、（5．0±2．0）、（6．0±1．0）、（6．0±2．0）、（7．0±1．0）个；各毒素组平均阳性细胞数均明显高于对照组，40、100、300μl／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。对照组及10、40、100、300bd／kg毒素组大鼠脊髓中IK1 mRNA的相对表达量分别为（0．56±0．16）、（0．62±0．27）、（1．27±0．10）、（1．53±0．29）、（1．61±0．86）；各毒素组IK1 mRNA表达水平均明显高于对照组，40、100、300bd／kg毒素组明显高于10μl／kg毒素组（均P〈0．05），40、100、300μl／kg毒素组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论问斑寇蛛毒具有急性致痛作用，与毒素呈浓度依赖性；其疼痛传递机制依赖于钙离子激活的IK1 mRNA及蛋白在脊髓神经元细胞中的表达。

葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓致痛因子表达的影响

目的探讨葡萄糖酸钙对间斑寇蛛毒液致痛大鼠脊髓中致痛因子依赖于钙离子的钾离子通道蛋白（IK1）、降钙素基因相关肽（CGRP）、环氧合酶2（COX-2）、嘌呤能受体（P2X3）相对表达量的影响,研究葡萄糖酸钙在疼痛中的作用。方法将雄性SD大鼠80只随机分为福尔马林、10、40、100、300μL/kg毒液致痛组（40只）和钙剂治疗组（40只）,其中治疗组大鼠预先尾部静脉注射10%葡萄糖酸钙2 m L,然后两组大鼠均以5%福尔马林溶液150μL和4种剂量（10、40、100、300μL/kg）的间斑寇蛛毒液进行足底皮下注射,24 h后处死后,取L4~5脊髓标本,采用免疫组化、Western blot和荧光实时定量PCR技术分别从组织学、蛋白以及分子水平分析两组P2X3、CGRP、COX-2和IK1相对表达量。结果 （1）免疫组化结果显示300μL/kg毒液剂量时,治疗组P2X3和CGRP的表达显著低于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）,COX-2和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（2）Western blotting结果显示,与致痛组各剂量相比,10μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3和IK1表达量明显升高,CGRP和COX-2表达量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg剂量治疗组COX-2表达量降低,CGRP、P2X3和IK1的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg剂量治疗组P2X3、CGRP和IK1表达量明显降低,COX-2的表达量升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg剂量治疗组大鼠脊髓中P2X3、CGRP、COX-2、IK1表达量明显降低,差异具有统计学意义（P〈0.05）。（3）荧光实时定量PCR结果显示：10μL/kg治疗组大鼠脊髓中P2X3和CGRP mRNA的表达高于致痛组,COX-2和IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;40μL/kg治疗组P2X3和IK1 mRNA的表达高于致痛组,CGRP mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）,COX-2 mRNA的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;100μL/kg治疗组P2X3、CGRP、和COX-2mRNA的表达均高于致痛组,IK1 mRNA的表达低于致痛组,差异有统计学意义（P〈0.05）;300μL/kg治疗组P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA的表达均高于致痛组,差异具有统计学意义（P〈0.05）。各致痛组间P2X3、CGRP、COX-2和IK1 mRNA表达差异无统计学意义（P〉0.05）。（4）3种方法结果显示福尔马林致痛组与治疗组致痛因子的表达差异无统计学意义（P〉0.05）。结论新疆间斑寇蛛毒的致痛机制可能与大鼠脊髓中致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的高表达有关,葡萄糖酸钙能显著抑制部分高浓度毒素组致痛因子CGRP、P2X3、COX-2和IK1蛋白的表达量,缓解疼痛的传递。