间断高浓度葡萄糖对胰岛β细胞的损伤机制研究

目的探讨间断高浓度葡萄糖对培养的胰岛β细胞(HIT-T15细胞)的损伤机制。方法实验分为对照组(葡萄糖5.5mmol/L)、持续高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L)、间断高浓度葡萄糖组(葡萄糖16.7mmol/L培养2h后更换为5.5mmol/L的葡萄糖3h,每天重复共3次,夜间9h维持在5.5mmol/L的培养基中)、抗氧化剂(NAC1.0mmol/L)+持续高糖组和NAC+间断高糖组。放免法测定胰岛素分泌水平;罗丹明123染色线粒体,激光共聚焦显微镜测量线粒体膜电位(MMP);荧光素酶方法检测细胞内ATP含量;硫代巴比妥酸法测量脂质过氧化物丙二醛(MDA)水平;流式细胞仪测定活性氧簇(ROS)的水平。结果高糖刺激后胰岛素分泌量在间断高糖组〔(3.13±1.11)μIU/mL〕和持续高糖组〔(5.18±0.95)μIU/mL〕分别较对照组〔(9.33±0.62)μIU/mL〕均明显减少(P<0.05);MDA水平、ROS水平明显升高(P均<0.05),并且间断高糖组较持续高糖组产生更多的ROS(P<0.05);间断高糖组和持续高糖组细胞内ATP含量、MMP水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。结论间断高浓度葡萄糖与持续高糖均使培养的β细胞线粒体氧化应激水平增高,且间断高糖组较持续高糖组产生更严重的氧化应激,从而使β细胞分泌胰岛素功能受损,其机制可能是由于氧化应激使线粒体的膜电位下降,细胞ATP含量减少所致。

间断高浓度葡萄糖对雪旺细胞的损伤机制及丹参酚酸B的保护作用

目的:研究间断高浓度葡萄糖对体外培养大鼠雪旺细胞(SCs)损伤机制及丹参酚酸B(Sal B)干预作用。方法:原代培养大鼠SCs,将其分为正常组、稳定性高糖组、间断高浓度葡萄糖组、渗透压对照组及间断高浓度葡萄糖加不同浓度Sal B(25,50,100μmol·L-1)处理组。流式细胞仪检测细胞凋亡,DHE探针检测细胞内活性氧(ROS)含量,JC-1探针检测线粒体膜电位(MMP)变化,ELISA法检测8-羟基脱氧鸟苷(8-OHd G)含量。实时荧光定量PCR检测B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)及Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;Western blot(蛋白印迹)法检测Bcl-2,Bax,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)及多聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶(PARP)表达。结果:与正常组及稳定性高糖组相比,间断高浓度葡萄糖明显提高了SCs内ROS水平(P<0.01),增加了8-OHd G的生成(P<0.01),降低了MMP(P<0.05,P<0.01),下调SCs内Bcl-2蛋白及mRNA的表达(P<0.01),上调Bax蛋白及mRNA的表达(P<0.01),促进了Caspase-3及PARP的活化(P<0.01),并增加了SCs的凋亡(P<0.01)。不同浓度的Sal B可以降低间断高浓度葡萄糖所导致的SCs内ROS及8-OHd G浓度的增高(P<0.01),提高MMP(P<0.01),上调Bcl-2蛋白及mRNA的表达(P<0.05,P<0.01),下调Bax蛋白及其mRNA的表达(P<0.01),降低了PARP及caspase-3的活化(P<0.01),抑制了SCs凋亡(P<0.01)。结论:间断高浓度葡萄糖对SCs的损伤作用比稳定性高糖更为明显,Sal B可以抑制间断高浓度葡萄糖所致的SCs损伤。