非小细胞肺癌组织中lncRNA GAS5、LHPP表达与上皮间质化相关性及临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者癌组织中长链非编码核糖核酸生长抑制特异性基因5(lncRNA GAS5)、磷酸赖氨酸磷酸组氨酸无机焦磷酸盐磷酸酶(LHPP)表达与上皮间质化(EMT)相关性及临床意义。方法收集2018年6月至2020年1月在河北北方学院附属第一医院行手术切除的NSCLC 90例患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应检测lncRNA GAS5、LHPP和EMT相关蛋白[E-钙黏蛋白(E-Cad)、N-钙黏蛋白(N-Cad)和波形蛋白(VIM)]表达。分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与临床病理特征的关系,并通过Pearson相关性分析NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA与EMT相关蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法绘制不同lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达的NSCLC患者生存曲线,多因素Cox回归分析NSCLC患者预后的影响因素。结果NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA、E-Cad mRNA表达低于癌旁组织,N-Cad mRNA、VIM mRNA表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5与E-Cad mRNA表达呈正相关(r=0.724,P<0.001),与N-Cad mRNA、VIM mRNA表达呈负相关(r=-0.699、-0.689,P<0.001);lncRNA GAS5与LHPP mRNA表达呈正相关(r=0.651,P<0.001)。不同分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移的NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA表达比较差异有统计学意义(P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析显示,lncRNA GAS5高表达组的3年总生存率[68.18%(30/44)]高于lncRNA GAS5低表达组的3年总生存率[36.96%(17/46)];LHPP mRNA高表达组的3年总生存率[67.39%(31/46)]高于LHPP mRNA低表达组的3年总生存率[36.36%(16/44)],差异有统计学意义(χ^(2)=10.274、10.322,P<0.05)。低分化、肿瘤TNM分期Ⅲ期、有淋巴结转移为NSCLC患者死亡的独立危险因素,lncRNA GAS5≥1.32、LHPP mRNA≥1.12为独立保护因素(P<0.05)。结论NSCLC患者癌组织中lncRNA GAS5、LHPP mRNA低表达,与EMT相关蛋白表达、分化程度、肿瘤TNM分期、淋巴结转移和预后有关,可能成为NSCLC诊治的新靶点。

白细胞介素-6对胰腺癌小鼠癌组织的细胞增殖及上皮间质转化的影响

目的 探讨白细胞介素-6(IL-6)在胰腺癌裸鼠模型癌组织增殖与上皮间质化中的作用,并分析其分子机制。方法 将18只成功构建胰腺癌细胞荷瘤的BALB/c裸鼠模型随机分为模型对照组、IL-6过表达组和免疫球蛋白G(IgG)抗体组,每组6只。模型对照组于肿瘤部位注射生理盐水进行干预,IL-6过表达组于肿瘤部位注射IL-6过表达质粒进行干预,IgG抗体组予肿瘤部位注射IgG抗体进行干预。3组均于末次给药24 h后处死小鼠,并收集胰腺肿瘤组织。对各组肿瘤组织进行离体称重并计算抑瘤率。通过苏木精-伊红(HE)染色观察胰腺组织的病理学改变。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组裸鼠肿瘤组织中IL-6、p-STAT3、NF-κB p65和VEGF蛋白的表达水平。采用蛋白质印迹法(Western blot)检测各组肿瘤组织中E-cadherin、Vimentin、MMP-9蛋白的表达水平。采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测各组IL-6、p-STAT3、SOCS3基因的表达水平。结果 3组裸鼠胰腺肿瘤组织的平均瘤重及抑瘤率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果显示,模型对照组肿瘤组织细胞体积增大,癌细胞排列呈巢状;IL-6过表达组可见肿瘤组织轻度纤维化,少量炎症浸润;IgG抗体组可见核分裂象,大量肿瘤细胞坏死,局灶组织纤维化。IL-6过表达组E-cadherin蛋白、SOCS3基因表达水平低于模型对照组和IgG抗体组,而Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平高于模型对照组和IgG抗体组,差异均有统计学意义(P<0.05);IgG抗体组Vimentin、MMP-9、IL-6、p-STAT3、NF-κB p65、VEGF蛋白的表达水平及IL-6、NF-κB p65基因的表达水平低于模型对照组,而E-cadherin和SOCS3基因水平高于模型对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 IL-6可以通过p-STAT3和(或)NF-κB p65信号通路调节胰腺癌裸鼠模型肿瘤组织中的相关细胞因子,影响肿瘤组织的增殖及上皮间质化。

TNF-α通过CXCL10/CXCR3信号通路促进结肠癌细胞上皮间质化的相关分子机制

目的 探讨TNF-α通过调控结肠癌SW480细胞CXCL10/CXCR3轴的表达影响上皮间质化(EMT)及其分子机制。方法 培养人结肠癌SW480细胞,分别通过TNF-α、siRNA-CXCR3处理细胞,将细胞分为对照组(NC组)、TNF-α刺激组(TNF-α组)及TNF-α刺激+siRNA-CXCR3沉默组(TNF-α+si-CXCR3组)。通过Real-time PCR检测各组细胞CXCL10、CXCR3及上皮间质化相关基因的mRNA表达量;Western Blot检测各组细胞CXCL10/CXCR3通路蛋白及上皮间质化相关蛋白表达量的影响;免疫组化检测细胞中上EMT上皮标志物上皮细胞钙粘蛋白(E-cad)与EMT间质标志物波形蛋白(Vimentin)的变化情况;划痕实验检测各组细胞的迁移能力;Transwell实验检测各组细胞的侵袭能力。结果 TNF-ɑ组细胞中通路基因CXCL10、CXCR3的m RNA水平高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞中CXCR3水平低于TNF-α组,差异有统计学意义(P<0.05);TNF-ɑ组细胞中CXCL10、CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量高于NC组,E-cad的蛋白表达量低于NC组,差异有统计学意义;TNF-α+si-CXCR3组细胞CXCR3、Vimentin与Fibronectin的蛋白表达量低于TNF-ɑ组,E-cad的蛋白水平高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组中Vimentin的表达量高于NC组,E-cad的表达量低于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+siCXCR3组中Vimentin的表达量低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05),E-cad的表达量高于TNF-ɑ组;TNF-ɑ组迁移能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞迁移能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05)。TNF-ɑ组细胞的侵袭能力高于NC组,差异有统计学意义(P<0.05),TNF-α+si-CXCR3组细胞侵袭能力低于TNF-ɑ组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 TNF-α能够诱导结肠癌SW480细胞发生上皮间质化,并促进其迁移、侵袭水平,这一过程可能与激活CXCL10/CXCR3信号通路有关。

基于NLRP3通路研究金樱子抑制肾小管上皮细胞间质化治疗糖尿病肾病的作用机制

[目的]研究金樱子对糖尿病肾病(DN)模型小鼠的治疗效果及基于核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)信号通路抑制肾小管上皮细胞间质化(EMT)的作用机制。[方法]通过链脲佐菌素(STZ)联合高脂饮食诱导建立DN小鼠模型,并灌胃不同剂量的金樱子。通过检测各组小鼠体肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、24 h尿蛋白,肾石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色及过碘酸-Schiff(PAS)染色评估金樱子对DN模型小鼠的治疗作用;通过检测上皮性钙黏附蛋白(E-CDH)、波形蛋白(VIM)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMΑ)和转化生长因子β(TGF-β)mRNA和蛋白表达水平研究金樱子对DN小鼠EMT的影响;通过检测NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(cleaved Caspase-1)、成熟的白细胞介素-1β(mature IL-1β)、成熟的白细胞介素-18(mature IL-18)的蛋白水平评估金樱子对DN小鼠NLRP3信号通路的影响。[结果]金樱子可明显降低DN小鼠Cr、BUN及24 h尿蛋白水平;同时改善DN模型小鼠肾组织病理学变化,提示金樱子对DN模型小鼠具有治疗作用;进一步研究发现金樱子提升了E-CDH,降低了VIM、α-SMΑ和TGF-βmRNA和蛋白水平,改善了DN小鼠的EMT;降低了NLRP3、ASC、cleaved-Caspase-1、mature IL-1β、mature IL-18蛋白水平,提示金樱子干预降低了DN小鼠NLRP3信号通路的活化程度。[结论]金樱子对DN模型小鼠具有治疗作用,其作用机制可能与通过降低NLRP3信号通路活化抑制EMT有关。

夏枯草抑制人胃癌细胞上皮间质化的机制

目的探讨夏枯草对胃癌细胞上皮间质化(epithelial mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用及其可能的作用机制。方法选取人胃癌细胞株HGC-27,将细胞随机分为对照组及夏枯草低、中、高剂量组(20、40、80μg·mL^(−1)夏枯草提取物)。用四甲基偶氮唑盐[3-(4,5)-dimethylthiahiazo(-z-y1)-3,5-di-phenytetrazolium bromide,MTT]法检测细胞增殖抑制率;划痕实验检测细胞迁移率;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力;反转录·聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)检测miR-155、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)和β连环蛋白(β-catenin)mRNA表达情况;蛋白质印迹法(Western blotting)检测GSK-3β、β-catenin、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、神经性钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和锌指蛋白(Snail)表达情况。结果与对照组比较,夏枯草3组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05)。与夏枯草低剂量组比较,夏枯草中剂量组、夏枯草高剂量组胃癌细胞增殖抑制率、GSK-3βmRNA、GSK-3β和E-cadherin蛋白的表达水平升高,细胞迁移率、细胞侵袭数量、miR-155、β-catenin mRNA水平、β-catenin、N-cadherin、Vimentin和Snail蛋白的表达水平降低(P<0.05),夏枯草高剂量组诸项指数变化尤其明显(P<0.05)。结论夏枯草对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭有一定的抑制作用,并能有效阻断胃癌细胞发生EMT,可能是通过降低miRNA-155表达水平、抑制Wnt/β-catenin信号通路发挥作用。

胃肠安丸通过抑制上皮间质化抑制TNBS诱导的大鼠溃疡性结肠炎

[目的]探讨胃肠安丸对大鼠溃疡性结肠炎(UC)的抑制作用及其作用机制。[方法]建立2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)诱导的大鼠UC模型,灌胃给予胃肠安(WCA)1周;记录大鼠体重和结肠长度,进行疾病活动指数(DAI)评分和结肠黏膜损伤指数(CMDI)评分;用免疫组织化学法检测结肠病理变化。细胞水平上,考察WCA对脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞炎症因子表达的影响。通过免疫荧光法分别考察WCA对UC大鼠结肠组织和LPS刺激的THP-1细胞条件培养基(CM)处理的结肠上皮Caco-2细胞的上皮-间质化(EMT)标志物E-钙粘蛋白和波形蛋白的表达。[结果]WCA可以显著抑制UC大鼠体重的减轻和结肠长度的缩短,降低疾病相关的DAI和CMDI评分,改善结肠病理损伤;UC结肠组织髓过氧化物酶(MPO)活性和细胞因子表达的上升已被明显抑制。在THP-1细胞中,WCA及其活性成分可以显著抑制LPS诱导的干扰素诱导蛋白10(IP-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和NF-κB抑制剂(IkBα)mRNA水平的表达。在UC大鼠和CM刺激的Caco-2细胞中E-钙粘蛋白表达下调,波形蛋白表达上调,给予WCA治疗处理后,上述EMT现象被明显抑制。[结论]本研究表明,WCA可以通过抑制炎症诱导的结肠EMT减轻大鼠UC的发展。

肝再生磷酸酶-3上调缝隙连接蛋白26诱导结肠癌LoVo细胞间质上皮化

目的探讨在结肠癌肝转移的肿瘤微环境中肝再生磷酸酶-3（PRL-3）对缝隙连接蛋白26（Cx26）的影响及促进结肠癌细胞间质上皮化（MET）的机制。方法将稳定转染PRL-3的LoVo细胞（LoVo-P）、对照组（LoVo-c）分别和肝细胞（1．02）模拟肿瘤微环境进行体外共培养0～3d后，Westernblot检测Cx26、上皮标志物E-钙黏蛋白（E—cadherin）和间质标志物N-钙黏蛋白（N—cadherin）的蛋白表达。Transwell侵袭小室法检测LoVo细胞侵袭能力变化。采用链霉菌抗生物素蛋白一过氧化物酶（sP）法检测20例Ⅳ期结肠癌及肝转移灶中Cx26和E-cadherin的表达。结果Westernblot检测结果显示，LoVo-P细胞经共培养后Cx26的蛋白表达分别上升31．03％、58．39％、93．95％（P〈0．05），E—cadherin蛋白表达明显上升，N．cadherin蛋白表达受到抑制（P〈0．05），对照组中蛋白表达变化不明显。经过共培养后LoVo-P细胞侵袭能力明显降低（P〈0．05）。免疫组织化学结果显示，Cx26和E-cadherin在肝转移灶中的阳性表达率（65％和75％）高于原发灶（40％和45％），差异有统计学意义（P〈0．05）。在结肠癌肝转移灶中Cx26和E．cadherin呈正相关（r：0．545，P〈0．05）。结论在共培养环境中PRL-3能通过上调Cx26诱导LoVo细胞MET并降低其侵袭能力。

肝细胞生长因子诱导人肝癌细胞上皮间质转化

上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)与肿瘤侵袭转移密切相关.虽然肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)已被证实为肿瘤EMT的主要诱导剂,但是HGF诱导肿瘤EMT发生的分子机制尚不完全清楚.本研究旨在探讨Snail在HGF诱导肝癌细胞上皮间质转化中的作用.用HGF处理肝癌Hep G2和Hep3B细胞,显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移能力,Western印迹检测Met,AKT的磷酸化及蛋白质表达的变化,Western印迹与real-time RT-PCR检测上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志NCadherin、Fibronectin的表达变化,以及EMT相关转录因子的表达变化.经HGF处理的Hep G2、Hep3B细胞,Met和AKT的磷酸化水平显著增强;相差倒置显微镜下观察细胞形态向间质型细胞形态转化;细胞划痕和Transwell试验检测细胞的迁移能力较对照组显著增强;Real-time RT-PCR和Western印迹实验显示HGF的诱导能上调间质标记蛋白的表达及下调上皮型标志蛋白的表达.进一步发现,HGF能上调转录因子Snail的表达,干扰Snail能逆转HGF对Hep G2和Hep 3B细胞EMT发生的诱导作用.由此可见,HGF可能通过诱导Snail的表达促进肝癌细胞EMT的发生.这为阐明肝癌细胞侵袭转移机制,以及肝癌的防治提供新线索.

Vimentin及E-Cadherin在子宫颈癌中的表达及其与上皮细胞间质化的相关性

目的探讨子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimen-tin的表达及其与上皮细胞间质化(EMT)的相关性。方法采用免疫组化SP法检测42例子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimentin的表达,并分析两者与EMT之间的相关性。结果子宫颈鳞癌组织中E-Cadherin和Vimentin的表达率分别为52.2%和24.4%;在转移淋巴结组织中E-Cadherin的表达率为28.2%,而Vimentin的表达率为39.6%;在指状侵袭中,E-Cadherin的阳性表达率为88.3%,而在播散状侵袭中,E-Cadherin的阳性表达率为36.1%;而在指状侵袭中,Vimentin的阳性表达率为26.3%,而在播散状侵袭中,Vim-entin的阳性表达率为68.2%。在E-Cadherin表达阳性的子宫颈鳞癌组织中,Vimentin的阳性率为10.9%,在E-Cadher-in表达阴性的子宫颈鳞癌组织中,Vimentin的阳性率为78.5%,两者呈负相关。结论 E-Cadherin的表达降低和Vimentin的表达升高与子宫颈鳞癌的侵袭方式密切相关,E-Cadherin和Vimentin参与了EMT过程,在子宫颈鳞癌转移中具有重要作用。

逆转肿瘤上皮间质化药理研究进展

上皮间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是上皮细胞来源的恶性肿瘤细胞获得迁移和侵袭能力的重要生物学过程,是肿瘤侵袭和转移过程的重要启动步骤,与恶性肿瘤的进展和预后密切相关,EMT已经成为抗肿瘤药理研究的重要靶点。该文从药理筛选模型、靶向药物、细胞毒类药物、天然药物几个方面综述近几年来有关逆转肿瘤EMT药理方面的研究,对于研发能够逆转恶性肿瘤EMT的抗肿瘤药物具有重要指导意义。

上皮细胞间质化与肿瘤的转移

恶性肿瘤的转移是指肿瘤从原发部位转移到远隔器官,是恶性肿瘤患者致死的常见原因。肿瘤细胞侵润周围组织,侵润血管,在转移部位侵出血管并形成新的转移灶,这一过程需要很多的分子机制参与。上皮细胞间质化在胚胎发育以及成人的损伤修复、组织再生、器官纤维化以及肿瘤进展等方面发挥重要作用。上皮细胞间质化是恶性肿瘤侵润转移的首要步骤。随着我们对于上皮细胞间质化分子机制了解的深入,使得我们更好地知晓肿瘤及其进展的过程,并为恶性肿瘤的治疗干预提供有效的方法。

姜黄素对肝细胞生长因子诱导的前列腺癌细胞上皮细胞间质化的逆转作用

目的:探讨姜黄素对肝细胞生长因子诱导前列腺癌DU145细胞上皮细胞间质化的影响及可能机制。方法:将DU145细胞分为3组:正常对照组、HGF组、HGF联合姜黄素组。分组干预48小时后,显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志Vimentin的变化,以及HGF/c-Met信号通路分子的表达情况。Real time RT-PCR检测c-Met mRNA的表达变化。结果:分组处理48h,HGF处理组细胞较正常对照组细胞迁移能力显著增强,HGF联合姜黄素处理组细胞迁移能力与HGF处理组相比明显下降;Western blot结果发现,相对于正常对照组,HGF处理组E-cadherin表达水平下降而Vimentin表达水平上升,而姜黄素能明显逆转HGF诱导的EMT相关蛋白表达的改变。进一步研究发现姜黄素能显著下调c-Met mRNA和蛋白水平,进而抑制HGF/c-Met信号下游p-AKT和p-ERK信号以及Snail的表达。结论:姜黄素可逆转HGF诱导的前列腺癌细胞DU145迁移能力,可能与其抑制c-Met的表达和上皮细胞间质化有关。

DLX4在子痫前期胎盘组织的表达及与上皮细胞间质化相关性的研究

目的:探讨DLX4在妊娠期高血压疾病中的作用及其对滋养细胞EMT的影响。方法:采用Western blot法分别检测子痫前期胎盘组织及缺氧培养的滋养细胞系JEG-3中DLX4蛋白表达的变化;通过实时PCR技术,比较缺氧条件下滋养细胞中DLX4、HIF-1α和E-cad表达变化的差异。结果:滋养细胞缺氧培养后DLX4蛋白表达明显下降(P<0.05),与其在子痫前期胎盘组织的表达变化一致;缺氧抑制滋养细胞中DLX4 mR-NA表达,同时伴有HIF-1α和E-cad mRNA表达增加。结论:缺氧引起滋养细胞DLX4表达下调,伴随EMT相关因子表达的改变。子痫前期滋养细胞侵袭力异常可能与缺氧引起DLX4表达下调及滋养细胞EMT异常有关。

上皮细胞间质化在胃癌发生发展中的作用

胃癌是世界范围内最常见的肿瘤之一。因为其复杂的发生发展机制,早期发现与有效治疗尤为困难。上皮细胞间质化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是胚胎发育、伤口愈合、纤维疾病发展中的重要过程。最近有研究表明,胃癌的发生与EMT的异常激活有密切关系。EMT的激活使得胃癌上皮细胞具有间质细胞的特征,上皮极性减少,而且间质细胞获得干细胞侵袭、转移、抗凋亡、耐药等特征。至今发现多种分子与EMT有关,如E-钙黏蛋白等。也有研究发现EMT可能与表观遗传机制有关。现已发现的与EMT有关分子可以作为胃癌早期诊断的标志,而EMT的发现也会为胃癌靶向治疗提供新的思路。本文就其研究进展做一综述。

姜黄素通过调控上皮间质转化抑制乳腺癌侵袭转移的体外研究

目的:探讨上皮间质转化(EMT)是否参与姜黄素抑制乳腺癌细胞侵袭转移过程。方法:利用不同浓度姜黄素干预脂多糖(LPS)诱导的乳腺癌细胞MCF-7,MTT法检测细胞增殖能力,普通光学显微镜及透射电子显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR和Western blot方法分别检测vimentin,E-cadherin表达变化。结果:姜黄素可抑制LPS诱导的乳腺癌细胞MCF-7 EMT的发生,降低LPS诱导的EMT标志物vimentin蛋白的表达,增强E-cadherin的表达,最终导致乳腺癌细胞运动及侵袭能力的降低。结论:姜黄素可以抑制肿瘤细胞侵袭能力,提示EMT程序参与其中,具体分子机制仍需进一步研究。

阿司匹林逆转肝癌上皮细胞间质化改变的实验研究

目的探讨阿司匹林能否抑制肝癌增殖过程中发生的上皮细胞间质化改变。方法构建12只裸鼠人肝癌原位生长模型,平均分为实验组和对照组。实验组连续5周灌胃阿司匹林(0.3g/kg),对照组灌胃等量生理盐水,治疗结束后取肺脏和肝脏,连续切片检测2组肺转移结节数目,免疫组化检测2组肝癌组织中上皮细胞间质化改变(EMT)相关标志物E-cadherin、vimentin及N-cadherin的表达。结果阿司匹林治疗后肝癌大小无明显变化,而肺转移结节数却明显降低,即对照组(26.33±5.43)个与治疗组(11.43±2.56)个,差异有统计学意义(P=0.0161),且E-cadherin在阿司匹林治疗后的肝癌组织中表达明显增加(P=0.0116),而代表间质特点的Vi-mentin和N-cadherin则在阿司匹林治疗后表达明显降低。结论阿司匹林能够抑制肝癌发生上皮细胞间质化改变,减少肺转移的发生。

HMGA2与胃癌上皮细胞间质转化的相关性及临床意义

探讨HMGA2、E-cadherin及N-cadherin在胃癌组织中差异性表达的临床意义及其与上皮细胞间质转化的关系.应用RT-PCR方法检测20例胃癌组织及对应的正常胃粘膜组织HMGA2 mRNA的表达,应用免疫组织化学法检测71例胃癌组织及癌旁组织中HMGA2、E-cadherin及N-cadherin的表达情况,与临床资料做统计学分析.HMGA2 mRNA在胃癌组织和癌旁组织中的表达存在显著性差异(P<0.01),在胃癌组织中HMGA2、E-cadherin及N-cadherin的阳性表达率分别为64.7%、29.6%和43.7%,HMGA2和E-cadherin的表达成负相关(P<0.05),和N-cadherin的表达成正相关(P<0.05),HMGA2表达和胃癌患者淋巴结转移及临床分期有显著相关性(P<0.05).HMGA2高表达的胃癌组织中有明显的上皮细胞间质转化表型,其表达与胃癌侵润转移有一定的相关性.

肝素结合细胞因子影响乳腺癌细胞的增殖、侵袭和上皮细胞间质化的功能研究

目的探讨肝素结合细胞因子(Midkine)的表达对乳腺癌细胞的增殖和侵袭的作用。方法采用慢病毒介导的shRNA干扰技术在乳腺癌细胞中沉默Midkine的表达,及利用慢病毒高表达Midkine基因在正常乳腺表皮细胞中。利用蛋白质印迹(Western blot)法检测shRNA干扰或高表达后的正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞中Midkine蛋白的表达情况。利用流式细胞仪技术、Transwell小室实验、及细胞划痕实验,分析Midkine基因高低表达对正常乳腺表皮细胞和乳腺癌细胞生长、增殖、侵袭及转移的影响。结果首先观察了不同乳腺癌细胞中Midkine的表达情况。其中Midkine只有在BT549、MDA-MB157和MDA-MB436间充质乳腺癌细胞(Mesenchymal cell)中表达,而正常细胞和上皮细胞乳腺癌细胞(Epithelial cell)中不表达。BT549细胞中两种不同shRNA降低Mdikine蛋白表达的效率分别达到100%和90%。HMLE正常乳腺上皮细胞中Midkine高表达效率非常高。结晶紫染色法检测细胞增殖实验结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的生长速度较阴性对照组降低(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Midkine-shRNAs转染组BT549细胞的增殖指数为(36.06±2.12)%和(32.06±3.46)%,明显低于对照组53.06±3.68%。同时观察到EMT标识物B连环蛋白(β-catenin)、N钙粘蛋白(N-cadherin)在Midkine-shRNAs转染组BT549细胞中表达上调。Transwell小室实验显示两个Midkine-shRNA转染组BT549细胞迁移(Migration)细胞数为零和(7±4.4)个/高倍视野,它们的侵袭(Invasion)细胞数为(38±7)和(46±8)个/高倍视野,明显低于对照组的迁移(Migration)细胞数(178±14)个/高倍视野,侵袭(Invasion)细胞数(232±35)个/高倍视野。同时也观察到高表达Midkine正常乳腺上皮细胞表现出间质化(EMT)的表型,EMT标识物E钙粘蛋白(E-cadherin)、连环蛋白(β-catenin)在Midkine高表达HMLE细胞中表达下调的现象。细胞划痕实验显示Midkine高表达HMLE细胞组的迁移距离明显高于对照组。结论在BT549细胞中降低Midkine的表达,可抑制BT549细胞的迁移和侵袭,同时可明显上调对上皮细胞间质化标志蛋白β-catenin和N-cadherin表达,提示在Midkine高表达的肿瘤患者中,通过抑制其蛋白表达可能抑制肿瘤的转移和侵袭。

shRNA干扰TTF-1基因对肺腺癌细胞EGFR-TKI敏感性及细胞上皮间质化的影响

目的探讨甲状腺转录因子(TTF-1)对肺腺癌细胞表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)药物敏感性及细胞上皮间质化的影响。方法将培养后的肺腺癌HCC827细胞分为空载体组、阴性质粒转染(NC-sh RNA)组和阳性质粒转染(TTF-1-sh RNA)组,通过sh RNA干扰技术抑制细胞中的TTF-1基因表达,用流式细胞仪测定转染前后细胞凋亡率和细胞周期变化。不同浓度的吉非替尼(10、20、40、60μmol/ml)作用各组细胞72h,CCK-8法检测细胞生长抑制率。5ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)作用各组细胞48h,细胞出现上皮间质化,Western blot法测定TTF-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达。结果与NC-sh RNA组、空载体组比较,TTF-1-sh RNA组细胞凋亡率明显增加,G0/G1相百分比升高,S相和G2/M相百分比降低(均P<0.05);不同浓度吉非替尼作用后,每组细胞的生长抑制率均随药物浓度的增加而升高,不同浓度比较差异有统计学意义(P<0.05)。同一浓度时,3组细胞生长抑制率之间的差异有统计学意义(P<0.05);TTF-1-sh RNA组较NC-sh RNA组、空载体组均明显为高,差异均有统计学意义(均P<0.05);而空载体组与NC-sh RNA组比较,仅在吉非替尼20μmol/ml差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1作用前后,与空载体组和NC-sh RNA组比较,TTF-1-sh RNA组细胞TTF-1、α-SMA蛋白表达水平均为低,E-cadherin蛋白表达水平均为高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与TGF-β1作用前比较,TGF-β1作用后NC-sh RNA组和空载体组TTF-1蛋白表达水平均下降,E-cadherin蛋白表达水平均下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与NC-sh RNA组、空载体组比较,TTF-1-sh RNA组TGF-β1作用前后细胞E-cadherin、α-SMA蛋白变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。结论sh RNA干扰TTF-1基因可增加肺腺癌HCC827细胞对EGFR-TKI药物敏感性,并部分抑制细胞上皮间质化。

PKM2对肝内胆管癌细胞增殖及上皮间质化的影响

目的检测M2-型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)在肝内胆管细胞癌(intrahepatic cholangiocarcinoma,ICC)组织中的表达情况,探讨PKM2对ICC细胞增殖及上皮间质化(EMT)的影响。方法RT-PCR和免疫组化法检测ICC组织中PKM2的表达,慢病毒载体介导的RNA干扰PKM2的表达,观察其对ICC细胞增殖、侵袭能力及EMT相关生物学特性的影响。结果RT-PCR结果显示,PKM2在ICC组织中高表达(P<0.05)。体外实验显示,PKM2基因沉默在体外抑制了ICC细胞的增殖和侵袭能力,PKM2-RNAi转染组细胞克隆形成数(152±9.63)显著低于空白组(351.5±17.6)及对照组(333.1±21.3)(P<0.05)。转染组的侵袭能力明显低于空载(Mock)及对照组(Control)组,发生迁移的细胞数分别为(96.0±7.1)、(185.5±11.3)、(197.1±17.2)(P<0.05)。其具体机制是通过抑制Wnt/β-catenin信号传导,进而抑制EMT相关通路。结论胆管癌组织中PKM2表达明显高于癌旁组织,PKM2可通过Wnt/β-catenin信号调节EMT,进而调控ICC细胞侵袭的能力。