川芎嗪诱导大鼠骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞的研究

目的 用川芎嗪 (ligustrazinhydrochloride)在体外定向诱导SD青年鼠骨髓间质干细胞 (mesenchymalstemcells ,rMSCs)分化为神经元样细胞。 方法 用低糖DMEM冲洗骨髓腔 ,收集骨髓细胞悬液 ,接种在塑料培养瓶中。经体外扩增、纯化 ,选用第 5代后的骨髓间质干细胞进行诱导分化。用 10 μg LbFGF预诱导 2 4h ,更换成含川芎嗪的无血清培养基DMEM诱导间质干细胞分化为神经元样细胞。用免疫组织化学SABC法鉴定神经丝蛋白 (NF M)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、巢蛋白 (nestin)、微管联合蛋白 2 (MAP 2 )、生长相关蛋白 4 3(GAP 4 3)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)的表达。 结果 第 5代间质干细胞形态达到均一 ,呈梭形。用川芎嗪诱导 15min到 3h ,间质干细胞胞体逐渐增大 ,并伸出细长突起形似神经元样细胞。免疫组织化学显示NF M、NSE、nestin、MAP 2和GAP 4 3表达阳性 ,而GFAP阴性。对照组上述染色均为阴性。 结论 川芎嗪可诱导骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞。

成人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞前后基因表达的研究

目的探讨成人骨髓间质干细胞(MSC)分化为神经元样细胞前后基因表达的变化。方法从成人骨髓分离MSC,培养扩增。用参芪液诱导hMSC分化为神经元,并用免疫组化法检测神经元烯醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达来鉴定是否为神经元样细胞。采用半定量RTPCR方法检测10个基因(包括内胚层基因Ceruloplasmin;中胚层基因SM22;外胚层基因Amyloidprecursorprotein、syntaxin;生殖系基因protamine;神经元特异性基因NeuroD、NF、NSE、GFAP、Tau)在诱导分化前后的变化。结果hMSC经参芪液诱导后,可见神经元样细胞。免疫组化结果显示诱导出的神经元样细胞表达NSE、NF阳性,GFAP阴性。hMSC在分化前表达内胚层、中胚层、外胚层和生殖系基因,随着分化时间的延长,生殖系基因不表达,内胚层和中胚层基因表达减弱,外胚层基因表达基本不变。而在分化过程中外胚层基因和神经元特异性标记基因表达明显增强。结论hMSC分化为神经元样细胞的过程并不是简单的神经特异性基因的“开”和“关”,而是与神经细胞分化成熟过程中相关基因表达的量相关。

人骨髓间质干细胞分化为神经元样细胞及运动神经元生存蛋白表达的研究

目的 定向诱导人骨髓间质干细胞(hMSC)分化为神经元样细胞,并检测诱导前后细胞的运动神经元生存(SMN)基因mRNA及蛋白质的表达。方法 分离和纯化hMSC;在体外用碱性成纤维细胞生长子预诱导hMSC,再用二甲基亚砜和丁化羟基苯甲醚诱导hMSC分化为神经元样细胞;用免疫细胞化学方法鉴定诱导前后的细胞是否表达神经元特异性标志物神经元稀醇化酶(NSE)、神经丝蛋白(NF)以及SMN蛋白;用RT- PCR检测诱导前hMSC及诱导后神经元样细胞SMN基因mRNA的表达。结果 hMSC诱导3h后,大多数细胞转变为类似于神经元的形态,有长的突起,相互之间连接呈网状。NSE、NF进行鉴定,结果显示NSE、NF呈阳性。诱导前的hMSC及诱导后的神经元样细胞均可见SMN基因mRNA表达,但诱导后表达增加,差异有统计学意义(P<0 .01),且诱导后神经元样细胞SMN蛋白表达为阳性。结论 hMSC能分化为神经元样细胞,并表达神经元的特异性标志物。hMSC分化的神经元样细胞既能高表达SMN基因的mRNA,也表达SMN蛋白。

诱导骨髓间质干细胞分化为神经样细胞的体内外调控机制

近年来研究表明骨髓间质干细胞是一种具有多向分化潜能的种子细胞。它不仅可以向中胚层来源的细胞分化,还能打破胚层起源的局限性向外胚层的神经细胞转分化(transdifferentiation)。本文主要综述了骨髓间质干细胞分化为神经样细胞可能的体内、体外调控机制。骨髓间质干细胞在体内受其所处微环境的变化、相邻或相近或相接触的细胞可能的诱导趋化作用,可能还与细胞融合有关;骨髓间质干细胞在体外分化为神经样细胞主要是在抗氧化剂、钙离子通道阻断剂、细胞因子等的作用下进行诱导分化的,而且可能还与PKA或p38、ERK1/2等信号途径的激活、RNAi的作用有关。

首个间质干细胞治疗成骨不全症的直接证据

据Li F[Bone,2010,47（3）：546-555]报道,美国宾州州立大学医学院的研究人员发现,直接将骨髓间质干细胞和作为细胞外基质的Ⅰ型胶原混合后注射到患有成骨不全症（osteogenesis imperfecta）的小鼠（OIM）股骨的骨髓腔中,骨髓间质干细胞分化成为成骨细胞和骨细胞并在体内合成高密度新骨,显著改善了小鼠长骨的强度。这说明了用这种策略治疗成骨不全症及其他间叶干细胞疾病的可行性。