间质纤维母细胞的增殖活性在肺癌转移中的意义

目的 探讨纤维母细胞增殖活性与肺癌转移的关系。方法 采用免疫组织化学方法检测94例肺癌组织中纤维母细胞的增殖活性。结果(1)肿瘤中心区纤维母细胞增殖细胞核抗原(PCNA)LI高于周围区纤维母细胞(P＜0．05);癌旁肺组织中纤维母细胞PCNA LI明显低于肿瘤中心区和周围区纤维母细胞(P＜0．05)。(2)有转移组肿瘤中心区纤维母细胞和周围区纤维母细胞PC-NA LI高于无转移组(P＜0．05)。结论 肿瘤中心区纤维母细胞的增殖活性是判断肺癌淋巴结转移或远处转移的有价值的参考指标。

腺病毒介导AT2R基因转染表达抑制肾间质纤维母细胞增殖

目的 :探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)表达对人肾间质纤维母细胞 (hRIF)增殖的影响。方法 :构建携带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,转染体外培养hRIF并检测AT2RmRNA表达及细胞表达率 ,用细胞周期分析、分裂指数、MTT比色法和 5 -溴尿苷 (BrdU)掺入法检测hRIF增殖。结果 :构建的AdCMV -AT2R体外转染培养hRIF表达率为 90 .5 7%。AT2R峰值表达时 ,增殖期hRIF(S期和G2 -M期 )比率从 3 1.7%降低到 13 .9% (P <0 .0 5 ) ,分裂指数从 3 7.4%降低到 9.6% (P <0 .0 1) ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 60 .1%和 5 4.2 % (P <0 .0 1)。结论 :AT2R转染表达可显著抑制体外培养hRIF的增殖 。

腺病毒介导AT2R基因转染表达抑制肾间质纤维母细胞增殖

目的 探讨人肾间质纤维母细胞 (hRIF)转染表达血管紧张肽Ⅱ (AngII)受体 (AT2R)对其增殖的影响。方法 构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV AT2R) ,体外转染hRIF ,用RT PCR方法检测AT2RmRNA表达 ,流式细胞仪检测AT2R表达率 ,用细胞周期分析、分裂指数、MTT比色法和 5 溴尿苷 (BrdU)掺入法检测hRIF增殖。结果 构建的AdCMV AT2R体外转染培养hRIF表达率为 90 6 %。AT2R峰值表达时 ,其S期和G2 M期细胞比率从 31 7%降低到 13 9% (P <0 0 5 ) ,分裂指数从 37 4%降低到 9 6 % (P <0 0 1) ,MTT吸光度和BrdU掺入量分别降低 6 0 1%和 5 4 2 % (P <0 0 1)。结论 AT2R转染表达可显著抑制体外培养hRIF的增殖 。

碱性成纤维细胞生长因子和胰岛素样生长因子对大鼠外胚间充质干细胞增殖活性的影响

目的 探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对大鼠外胚间充质干细胞增殖活性的影响,为研究颅面与牙齿的发育机制及外胚间充质干细胞的诱导分化提供理论依据。方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)微量酶反应比色法检测经 10 ng/ml bFGF、100 ng/ml IGF-1刺激4 d后大鼠外胚间充质干细胞的吸光度值。结果 培养4 d后,bFGF处理组吸光度值高于对照组(P<0.05),而IGF-1组及bFGF+IGF-1组与对照组差异均无显著性(P>0.05)。结论 bFGF可促进大鼠外胚间充质于细胞的增殖,bFGF和IGF-1可能协同促进其分化。

川芎嗪对人肾间质成纤维细胞增殖和形态的影响

目的：观察川芎嗪（TMP）对肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞（hRIFs）体外增殖和形态的影响。方法：组织块培养法体外培养hRIFs；MTT比色法分别检测对照组及不同浓度TMP（0．25、0．50、1．00和2．00mg／m1）组hRIFs在培养的d1、3、5、7、9的增殖情况；用倒置相差显微镜观察TMP作用下bRIFs形态的改变。结果：与对照组相比，0．25mg／ml或0．50mg／ml的TMP作用于hRIFs后5～9d、1．0mg／ml的TMP作用于hRIFs后3～9d、2．00mg／ml的TMP作用于b．RIFs后1～9d对hRIFs体外增殖有显著的抑制作用，用药后FBS形态也发生明显变化。结论：TMP对hRIFs体外增殖具有明显抑制作用．且有时间、浓度依赖性：同时TMP可使体外培养hRIFs出现形态异常。

胃癌间质中肿瘤相关纤维母细胞CD34和SMA的表达及意义

目的探讨胃癌间质中肿瘤相关纤维母细胞CD34和SMA的表达及与胃癌侵袭性的关系。方法应用免疫组织化学PV6000通用型二步法检测75例胃癌组织及10例正常胃黏膜组织中间质纤维母细胞CD34和SMA的表达,并分析其与胃癌临床病理特征的关系。结果CD34在正常胃黏膜组织纤维母细胞中阳性表达率为80.0%（8/10）,而在胃癌组织纤维母细胞中仅6/75例呈阳性表达（8.0%）,两者比较差异有显著性（P〈0.01）。胃癌组织纤维母细胞中SMA阳性表达率为90.7%（68/75）,显著高于正常胃黏膜组（30.0%）（P〈0.01）。胃癌组织纤维母细胞中SMA表达与胃癌的Lauren分型及组织学分级无关（P〉0.05）,与临床分期和淋巴结转移有关（P〈0.05）,Ⅲ-Ⅳ期强阳性率（75.6%）明显高于Ⅰ-Ⅱ期（26.7%）（P〈0.01）,有淋巴结转移组的强阳性率（78.7%）明显高于无淋巴结转移组（17.9%）（P〈0.01）。结论与正常组织中纤维母细胞相比,胃癌中纤维母细胞表现为CD34（＋）表达的缺失,而转变为SMA（＋）的肌纤维母细胞的特征,两者的联合检测将可能作为肿瘤相关纤维母细胞较特异的标记;肿瘤相关纤维母细胞与胃癌的侵袭转移密切相关。

肾上腺髓质素在肾间质纤维化实验小鼠肾脏细胞增殖中的作用

目的探讨肾上腺髓质素(ADM)在梗阻性肾病中对细胞增殖的影响。方法采用单侧输尿管结扎(UUO)的方法制备梗阻性肾病模型,给予缬沙坦10mg·kg-1·d-1灌胃治疗,采用免疫组化及RT-PCR检测野生小鼠(WT)和肾上腺髓质素基因敲除小鼠(AMKO)肾脏增殖细胞核抗原(PCNA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)和转化生长因子β1(TGF-β1)的表达。结果野生UUO组小鼠与假手术组相比PCNA阳性细胞数增加,缬沙坦能减少PCNA阳性细胞数。与野生小鼠比较,AMKO假手术组PCNA阳性细胞明显增多,AMKO-UUO组尤为明显,缬沙坦能减少AMKO-UUO组的PCNA阳性细胞数,Ⅲ型胶原和TGF-β1的蛋白表达与mRNA在AM-KO-UUO组明显上调,可被缬沙坦拮抗。结论肾上腺髓质素在UUO介导的肾间质病变的细胞增殖过程中有着重要的作用。

丹参酮ⅡA磺酸钠对人肾间质成纤维细胞体外增殖和形态的影响

目的探讨丹参酮ⅡA磺酸钠(sodium tanshinoneⅡ-A sulfonate,DS-201)对肾间质纤维化来源的人肾间质成纤维细胞(human renal interstitial fibroblast,HRIF)体外增殖和形态的影响。方法组织块体外培养HRIF,MTT比色法分别检测对照组及不同浓度DS-201组(0.5mg/ml、1.00mg/ml和2.00mg/ml)HRIF,在体外培养第1、3、5、7、9d的吸光光度值,并计算各实验组抑制率的均值(average of inhibition rate,IRA);倒置相差显微镜观察对照组及DS-201作用下HRIF形态的改变。结果随培养时间的延长和DS-201药物浓度的升高,IRA值升高。用药后HRIF形态由均一的梭形变成圆形或细长不规则条状。结论DS-201对HRIF体外增殖具有时间和浓度依赖性的抑制作用,并使体外培养的HRIF出现形态异常。

HGF对高糖诱导肾间质成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对高糖诱导肾间质成纤维细胞损伤的修复作用。方法 将人肾脏间质成纤维细胞培养于不同浓度的葡萄糖中,其中25 mmol/L葡萄糖组培养液中加入不同浓度的rhHGF,分别于不同时间段收集细胞,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期。结果 高糖作用早期细胞增殖旺盛,随着高糖的持续刺激,细胞增殖发生停滞,同时细胞出现肥大。外源性加入HGF后,对高糖造成的细胞损伤具有修复作用。结论 高糖作用下的肾间质成纤维细胞早期出现自限性增殖后细胞增殖停滞,出现肥大。HGF可以通过促进细胞增殖,抑制由于高糖诱导的细胞肥大。

化瘀泄浊方对肾间质纤维化实验大鼠增殖细胞核抗原的影响

目的:观察化瘀泄浊方对实验大鼠肾间质纤维化的拮抗作用并探讨其部分作用机理。方法:选用健康、雌性SD大鼠50只,用单侧输尿管结扎方法复制大鼠肾间质纤维化模型,将其随机分为缬沙坦组[予缬沙坦5.3mg/(kg.d)经口灌服]、化瘀泄浊方组[化瘀泄浊方5.7g/(kg.d)经口灌服]、阿魏酸哌嗪分散片组[给予阿魏酸哌嗪分散片6.7mg/(kg.d)]与模型组[给予同等量生理盐水经口灌服],并设假手术组,每组10只大鼠。行HE、Masson染色观察实验大鼠梗阻侧肾脏组织形态学改变及Ⅲ型胶原(ColⅢ)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果:模型组及各治疗组与假手术组相比均呈现程度不同的病理损害,梗阻肾间质ColⅢ沉积明显增加,PCNA的表达也增加(P<0.05)。各治疗组与模型组比较,ColⅢ、PCNA表达明显减少。治疗各组间比较,化瘀泄浊方组优于阿魏酸哌嗪分散片组(P<0.05),其他各组间均无明显差异(P>0.05)。结论:输尿管梗阻后肾组织呈现程度不同的病理损害,肾间质ColⅢ沉积明显增加,这可能与PCNA的表达增加有关,化瘀泄浊方对其有一定的抑制作用。

癌相关纤维母细胞对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响

目的 探讨癌相关纤维母细胞（CAFs）对胃癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭活性的影响,为胃癌的合理有效治疗提供新的思路和作用靶点.方法 （1）原代培养正常纤维母细胞（NFs）和CAFs,用CCK8实验和流式细胞仪检测间接共培养后,NFs和CAFs对MGC-803细胞增殖和凋亡能力的影响;（2）通过transwell共培养小室建立MGC-803与CAFs相互作用的体外模型,分析CAFs对MGC-803迁移和侵袭能力的影响.结果 （1）与NFs相比,CAFs在体外传代培养过程中,仍高表达波形蛋白（Vimentin）、纤维母细胞活化蛋白（FAP）;（2）与NFs组相比,CAFs促进MGC-803细胞增殖、迁移和侵袭,但是抑制其凋亡.结论 CAFs在胃癌的生长、迁移和侵袭等过程中起着重要的作用,并且可能成为胃癌治疗的新靶点.

脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞增殖的影响及其机制

背景:脂肪间充质干细胞在体外长期培养过程中始终保持多向分化潜能,可通过分泌多种抗纤维化细胞因子或生长因子,参与调节成纤维细胞增殖、抑制胶原沉积而发挥抗纤维化作用。目的:观察脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨相关机制。方法:从硬皮病小鼠模型皮损组织分离、纯化出成纤维细胞,经传代培养后,根据处理方式分为5组:空白对照组(A组)、脂肪间充质干细胞干预组(B组)、Wnt抑制剂HY-15597处理组(C组)、Wnt激活剂SB-216763处理组(D组)、脂肪间充质干细胞+SB-216763处理组(E组)。MTT法和流式细胞仪检测各组成纤维细胞增殖率和凋亡率;蛋白免疫印迹法检测各组成纤维细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和Wnt信号通路相关蛋白表达水平。结果与结论:(1)与A组相比,B组和C组成纤维细胞增殖率均显著降低、凋亡率显著升高,D组增殖率显著增加、凋亡率降低,且呈时间依赖性(P <0.05)。与D组相比,E组成纤维细胞增殖率显著较低,凋亡率较高(P <0.05);(2)与A组相比,B组和C组成纤维细胞中羟脯氨酸含量以及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Wnt2、Wnt3a、β-catenin表达水平均显著降低,而D组均显著增加(P<0.05)。E组羟脯氨酸含量和Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Wnt2、Wnt3a、β-catenin水平均显著低于D组(P <0.05);(3)结果表明,脂肪间充质干细胞可以抑制硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞的增殖和胶原沉积,且这一过程与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用有关。

AT2R转染表达促进人肾间质纤维母细胞凋亡

目的 探讨血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体 (AT2R)基因表达对人肾间质纤维母细胞凋亡的影响。方法 构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,转染培养的人肾间质纤维母细胞 ,用流式细胞仪检测AT2R细胞表达率 ,RT -PCR方法检测AT2R ,bcl -2和baxmRNA表达 ,肾间质纤维母细胞凋亡用流式细胞仪、原位末端标记法检测。结果 构建的AdCMV -AT2R转染培养肾间质纤维母细胞表达率为 90 6 %。AT2R峰值表达时 ,其凋亡发生率较未转染组增加 3 2倍 (P <0 0 1) ,bax表达增加 76 3 % (P <0 0 5 ) ,bcl-2则无明显变化 ,TUNEL检测结果表明转染组出现大量凋亡细胞。结论 AT2R转染表达可显著增加体外培养肾间质纤维母细胞的凋亡 ,这对延缓肾间质纤维化是有益的。

田黄方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及细胞增殖与凋亡的影响

本研究在建立单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruc-tion,UUO)大鼠模型基础上,观察自拟田黄方对肾小管间质细胞增殖、凋亡的影响,以及对肾间质纤维化的防治作用。材料和方法1 药物田黄方由三七总皂甙和大黄粉组成,每毫升含三七总皂甙10mg,大黄粉0.5g;三七总皂甙和大黄粉由云南三七总甙厂提供,纯度>99％。2 动物模型建立及分组二级 SD 雌性大鼠,体重140～160g,由中山医科大学动物实验中心提供;48只随机分为模型组30只和对照组(假手术组)18只。动物模型的建立:SD 大鼠经戊巴比妥钠(按5mg/kg 体重)腹腔注射麻醉。

高浓度葡萄糖对人肾间质成纤维细胞增殖及PAI-1基因表达的影响

目的探讨高糖环境下成纤维细胞的增殖情况以及I型纤溶酶原激活物抑制物 (PAI - 1)在介导肾小管—间质损伤过程中的作用。 方法采用MTT方法分别检测正常糖浓度和高糖浓度下细胞的增殖 ,RT -PCR方法观察PAI- 1mRNA的表达。同时将细胞培养于 2 5mmol/L甘露醇中 ,观察高糖中渗透压所起的作用。 结果培养 2 4h后 ,高糖以剂量依赖形式抑制细胞增殖。与正常对照组相比 ,高糖可以增加PAI- 1的表达。甘露醇也抑制细胞增殖 ,同时对PAI- 1的表达产生作用。 结论高糖可抑制成纤维细胞增殖 ,刺激PAI- 1的表达。PAI- 1在糖尿病肾病肾小管—间质纤维化过程中 。

地塞米松对大鼠骨骼肌间质中成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨糖皮质激素局部注射治疗婴幼儿先天性斜颈的机理.方法:体外培养Wistar大鼠乳鼠骨骼肌间质成纤维细胞,采用3H-TdR掺入法,MTT比色法和流式细胞仪细胞周期分析技术,观察地塞米松对成纤维细胞DNA合成、细胞数目和细胞周期的影响.结果:在体外培养条件下,地塞米松可抑制成纤维细胞DNA合成,减少成纤维细胞增殖数目,降低成纤维细胞增殖指数,其作用随浓度增大而增强.结论:先天性斜颈婴幼儿期胸锁乳突肌局部注射糖皮质激素,可抑制胸锁乳突肌间质成纤维细胞的过度增生,减少肌肉纤维化.

人肾间质纤维母细胞培养及血管紧张素Ⅱ2型受体转染表达

目的 :体外培养人肾间质纤维母细胞 (hRIF)并用腺病毒介导转染表达血管紧张素Ⅱ (AngⅡ ) 2型受体(AT2R)。方法 :用肾穿刺活检法取慢性肾小球肾炎病人肾组织 ,以常规组织块贴壁法培养hRIF ;构建带AT2R基因的重组复制缺陷型腺病毒载体 (AdCMV -AT2R) ,体外转染hRIF ;用RT -PCR方法检测AT2RmRNA表达 ,免疫组织化学法及蛋白免疫印迹法检测AT2R蛋白表达 ,流式细胞仪检测AT2R表达率 ,同时检测AT1R的表达变化。结果 :用肾活检组织成功培养出hRIF。构建的AdCMV -AT2R体外转染培养hRIF表达率为 90 5 7%。以免疫组化、免疫印迹和RT -PCR检测AT2R表明 ,转染后AT2R表达明显增强 ,并随表达时间延长而增加 ,48h为表达峰值。AT2R转染表达不影响AT1R表达。结论 :腺病毒载体可较高效率介导AT2R在hRIF的转染表达 ,ATIR表达不受其影响。转染表达AT2R的hRIF可作为研究AngⅡ在肾间质纤维化中作用的良好细胞模型。