非肌肉肌球蛋白重链-9在骨肉瘤组织中的表达及其对细胞上皮间质转换和侵袭能力的影响

目的非肌肉肌球蛋白重链-9(MYH9)对肿瘤的发生发展具有重要的调控作用,文中旨在探讨MYH9在骨肉瘤组织中的表达及对骨肉瘤细胞上皮间质转换(EMT)和侵袭能力的影响。方法收集52例骨肉瘤癌组织及距肿瘤边缘5cm处的癌旁组织,RT-PCR和免疫组化检测骨肉瘤癌组织和癌旁组织中MYH9的mRNA和蛋白表达水平。脂质体法转染U2-OS细胞MYH9 shRNA表达质粒,沉默MYH9表达,转染后将细胞分成3组:以正常的U2-OS细胞为对照组、以转染空质粒的U2-OS细胞为空载组和以转染MYH9 shRNA的U2-OS细胞为干扰组。采用RT-PCR检测转染后U2-OS细胞MYH9的mRNA水平,Western blot检测U2-OS细胞转染后MYH9以及EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的蛋白水平变化,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力变化。结果 RT-PCR检测结果表明,癌旁组织中MYH9 mRNA的相对表达量(1.526±0.148)较癌组织(3.547±0.195)明显减少(P<0.05);免疫组化检测结果表明,MYH9蛋白在肿瘤组织中主要表达于细胞质中,且MYH9蛋白在癌组织中表达显著高于癌旁组织,其阳性表达率分别为59.6%(31/52)和26.9%(14/52),差异有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR和Western blot检测结果表明,沉默MYH9基因表达后,干扰组MYH9 mRMA相对表达量和蛋白水平较对照组和空载组明显降低(P<0.05)。与对照组相比较,干扰组骨肉瘤细胞U2-OS中E-cadherin蛋白明显上调,Vimentin蛋白出现下调。Transwell实验表明,48 h后各组均有穿出微孔滤膜的细胞,干扰组穿出微孔滤膜的细胞[(41.2±15.1)个]较对照组[(117.3±12.4)个]和空载组[(193.5±14.7)个]明显减少(P<0.05)。结论 MYH9蛋白在骨肉瘤组织中表达显著高于癌旁组织,沉默MYH9可以通过降低骨肉瘤细胞上皮间质转换来降低骨肉瘤的侵袭能力。

干扰ELK-3抑制人肝癌细胞的上皮-间质转换

目的研究转录因子ELK-3与人肝癌细胞系Hep G2和Hu H7上皮-间质转换(EMT)的关系及其作用机制。方法将Hep G2和Hu H7细胞分为小干扰RNA转染组和Ras-ELK-3信号通路抑制剂(XRP44X)处理组。用Western blot检测ELK-3、ELK-3靶基因EGR-1以及EMT相关分子钙黏附素E(E-cadherin)、波形蛋白(vimentin)的表达和MAPK信号通路蛋白p38的表达。结果 ELK-3干扰或Ras-ELK-3信号通路抑制剂(XRP44X)处理肝癌细胞后其ELK-3和ELK-3的靶基因EGR-1的蛋白表达均显著降低(P<0.01),E-cadherin表达水平升高(P<0.01),vimentin的表达及p38磷酸化水平均降低(P<0.01)。结论通过干扰ELK-3下调p38抑制EMT。

上皮-间质转换在乳腺癌新辅助化疗耐药中的作用

目的:探讨上皮-间质转换标记物E-cadherin和Vimentin在乳腺癌新辅助化疗耐药患者中的表达及与HER-2的关系。方法:收集我院行乳腺癌改良根治术患者75例,其中经临床和病理诊断为对新辅助化疗耐药的患者32例,所有患者均手术切除病灶并行病理检查,采用免疫组化二步法检测上皮-间质转换标记物E-cadherin和Vimentin的表达水平。结果:乳腺癌耐药组Vimentin表达水平增加,而E-cadherin表达下降,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);在43例HER-2阳性组织中,Vimentin表达水平增加,E-cadherin降低,与HER-2阴性表达组比较差异具有统计学意义(P<0.05);进一步采用spearman相关分析显示,HER-2与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.336,P=0.031),而与Vimentin表达呈正相关(r=0.587,P=0.004)。结论:在乳腺癌新辅助化疗耐药患者中,特别是HER-2阳性患者,可能存在上调Vimentin的表达、下调E-cadherin的表达促进上皮-间质转换而促使耐药的发生。

miR-489通过调控TWIST1的表达抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换

目的探讨miR-489在结肠癌干细胞表型和上皮间质转换中的作用和调控机制。方法 RT-q PCR检测多个人结肠癌细胞系(HT29、SW480、SW620和HCT116)和正常肠道上皮细胞HIEC中miR-489表达;采用基因转染技术提高结肠癌细胞中miR-489表达,Western blot检测过表达miR-489对结肠癌干细胞标志物CD133、CD44、Ep CAM、ALDH1和上皮细胞标志物E-cadherin、间质细胞标志物vimentin和N-cadherin的表达;RT-q PCR和Western blot检测TWIST1 mRNA和蛋白表达水平。结果 4个结肠癌细胞系中的miR-489相对表达量显著低于正常肠道上皮细胞HIEC中的表达(P<0.05)。在HT29和HCT116细胞中过表达miR-489,4个结肠癌干细胞标志物表达降低(P<0.05);上皮细胞标志物表达增加(P<0.05);间质细胞标志物表达减少(P<0.05)。TWIST1是miR-489潜在靶基因,在2个细胞系中过表达miR-489,TWIST1 mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。结论 miR-489在结肠癌细胞中低表达,过表达miR-489可能通过调控TWIST1抑制结肠癌干细胞表型和上皮间质转换。

BMP4沉默对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换及侵袭转移能力的影响

目的探讨沉默骨形成蛋白-4(BMP4)对骨肉瘤细胞系MG-63上皮间质转换(EMT)和侵袭迁移能力的影响。方法脂质体法转染MG-63细胞BMP4 shRNA表达质粒,将MG-63细胞分为MG-63对照组(正常培养对照)、空白对照组(转染空白质粒)和BMP4沉默组(转染BMP4 shRNA质粒)。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Western blot检测细胞E-cadherin、vimentin、twist和snail的mRNA及蛋白水平。Transwell侵袭实验和伤口愈合实验检测细胞侵袭和迁移能力。结果沉默BMP4后MG-63细胞的间质细胞标志物vimentin、twist1和snail水平降低,上皮细胞标志物E-cadherin表达增高(P<0.05)。BMP4沉默组细胞穿膜细胞数和迁移距离显著少于MG-63对照组和空白对照组(P<0.05)。结论沉默BMP4基因可以使间质型MG-63骨肉瘤细胞向上皮细胞表型转变,从而有效地降低肿瘤细胞的侵袭迁移能力。

小鼠肝纤维化肝脏细胞上皮-间质转换的研究

目的探讨小鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)时,肝细胞发生的上皮-间质转换(epithelialmesenchymal transitions,EM T)的变化。方法建立小鼠CCl4诱导HF模型,随机分为模型组与正常对照组,每周2次,分别于第2、4、6、8、10、12周分批处死大鼠。用密度梯度离心和贴壁培养相结合的方法分离培养小鼠肝细胞,免疫荧光方法对细胞表型进行鉴定,采用H-E及Massion染色等观察E-钙粘附素(E-cadherin,E-cad)、成纤维细胞特异性蛋白-1(fibroblast specific protein-1,FSP-1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SM A)的表达。用免疫荧光显微镜及激光共聚焦定位分析观察EM T蛋白[FSP-1、白蛋白(albumin)、α-SMA、波形蛋白(vimentin,VM)、胶原Ⅰ(collagen Ⅰ)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、N-钙粘附素(N-cadherin,N-cad)、E-cad]表达情况。结果小鼠HF时,肝细胞存在EMT现象。H-E、Massion染色及免疫荧光均显示,随着HF的程度加重,小鼠肝上皮细胞标志(E-cad、Albumin)逐渐减低,肝间质细胞标志(N-cad、FSP-1、VM、Collagen Ⅰ、FN及α-SMA)逐渐升高(P<0.05)。结论实验性小鼠HF的进程中,肝细胞发生EMT现象。

环氧合酶2通过上皮间质转换促进胃癌的侵袭与转移

目的:探讨环氧合酶2(COX-2)及Snail在胃癌组织中的表达及临床意义,研究COX-2转染对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响并探讨其机制。方法:免疫组化检测COX-2及Snail在100例胃癌组织中的表达情况,分析其与临床资料的关系;筛选构建COX-2稳定表达的MKN74、MKN45细胞系;观察转染前后细胞的形态、功能及相关蛋白的改变。结果:COX-2的表达与远处转移、淋巴结转移、不良预后密切相关(P<0.05);Snail的表达与分期、淋巴结转移、远处转移相关(P<0.05);COX-2的表达与Snail之间存在相关性(P<0.01)。与对照组相比,MKN74/COX-2细胞形态呈现EMT形态学改变,E-cadherin表达下调、Vimentin表达上调,迁移侵袭能力明显增强;MKN45/sh COX-2细胞形态由长梭形变为铺路石样,E-cadherin表达上调、Vimentin表达下调,迁移侵袭能力减弱。结论:COX-2可以通过EMT促进胃癌细胞的侵袭和转移。

不同区域氧浓度在结肠癌细胞上皮间质转换-间质上皮转换过程中的作用

目的探讨原发灶(低氧)及归巢部位(常氧或轻度高氧)氧浓度差异在上皮间质转换(EMT)-间质上皮转换(MET)过程的作用。方法首先用差异氧浓度培养肿瘤细胞,以光镜,激光共聚焦显微镜观察肿瘤细胞形态变化。Transwell小室和划痕实验分别检测结肠癌细胞侵袭能力及迁移能力。RT?PCR检测钙黏附蛋白E(E?cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达量情况。结果低氧环境下结COLO 205细胞较常氧及轻度高氧组明显发生EMT转换,降低E?cadherin表达,增强Vimentin表达;并相应伴随迁移、侵袭能力升高。结论原发灶(低氧)及归巢部位(常氧或轻度高氧)的氧浓度差异是介导EMT?MET过程的重要因素。

上皮间质转换标志物在胃癌中的表达及与Her-2的关系

目的:观察在胃癌中E-cadherin和Vimentin这两种上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标记物和Her-2的表达情况,分析EMT与胃癌临床病理特征的关系及与Her-2表达的关系。方法:采用免疫组化检测EMT标记物E-cadherin和Vimentin在198例胃癌中的表达情况;同时检测胃癌中Her-2的表达情况与EMT之间的关系。结果:胃癌中Vimentin表达高于癌旁组织,E-cadherin表达低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);E-cadherin和Vimentin的表达与年龄、性别无关(P>0.05);E-cadherin和Vimentin的表达与肿瘤分化程度、浸润深度及是否有淋巴结转移有关(P<0.05);Vimentin在Her-2阳性的胃癌组织中的表达高于Her-2阴性的组织,而E-cadherin在Her-2阳性的胃癌组织中的表达低于Her-2阴性的组织,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:EMT现象在胃癌的发生、发展过程中发挥作用;在胃癌中,Her-2的表达对EMT标志物表达有所影响。

AngⅡ通过刺激肝癌细胞发生上皮间质转换促进肝癌转移

目的探讨肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)在肝癌组织中的表达及血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)刺激肝癌细胞发生上皮间质转换现象.方法搜集56例肝癌手术标本,组织标本石蜡切片,免疫组织化学法测定血管紧张素转化酶1(angiotensin converting enzyme 1,ACE1)、ACE2、vimentin、ecadherin蛋白表达定量;将细胞分组,用AngⅡ刺激肝癌细胞系,比较不同分组细胞系vimentin、ecadherin蛋白表达差异.结果与正常组织相比,肝癌组织ACE1、AT1表达上升,上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)标志物vimentin蛋白表达均上升,ecadherin均下降.AngⅡ刺激下,SSMC7721细胞系的vimentin基因和蛋白表达均上升,ecadherin下降;加入AngⅡ的抑制剂Ang1-7后,这种变化受到抑制;加入Ang1-7的抑制剂A779后,再次出现vimentin上升,ecadherin表达下降.单独加入A779与对照组差别不大.结论 AngⅡ可能通过刺激肝癌细胞发生EMT对肝癌的转移起到促进作用.

沉默S100A4基因对乳腺癌上皮间质转换的影响

目的观察沉默人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞中钙结合蛋白S100A4基因对上皮间质转换(EMT)的影响。方法采用蛋白免疫印迹法(Western blot)和荧光实时定量(RT-PCR)检测S100A4在人乳腺癌组织中的表达情况。用RNA干扰技术将针对S100A4和非特异性阴性对照序列的siRNA转染至人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-231细胞,采用RT-PCR和Western blot方法检测EMT相关分子(E-cadherin, N-cadherin、Snail和Slug)的表达在沉默组和对照组中的表达水平。结果成功建立S100A4基因沉默的人乳腺癌MCF-7和MAD-231细胞模型;二者细胞中N-cadherin、Snail和Slug表达水平降低,而Ecadherin表达水平上调。结论 S100A4通过调节EMT过程,促进乳腺癌的侵袭和迁移,其可能成为乳腺癌治疗新的靶标分子。

GLI1与胃癌上皮间质转换的关系及临床研究

目的观察GLI1表达与胃癌上皮间质转换的关系。方法收集2006年1月~2011年12月诊断明确、资料完整的58例手术切除胃癌标本,做成组织芯片,采用免疫组化SP的方法检测组织芯片中胃癌组织及正常胃黏膜组织中GLI1、E-cadherin、N-cadherin的表达。结果 GLI1在胃癌中表达较正常组织高,与胃癌的淋巴转移、临床分期、Lauren分型、肿瘤分化明显有关,差异有统计学意义(P<0.05);E-cadherin在正常胃黏膜组织表达比胃癌组织高,与胃癌的淋巴转移、临床分期、Lauren分型、肿瘤分化明显有关,差异有统计学意义(P<0.05);N-cadherin在胃癌中表达高于正常胃黏膜组织,与胃癌的淋巴转移、临床分期、Lauren分型、肿瘤分化明显有关,差异有统计学意义(P<0.05);GLI1表达与上皮间质转换的状态有关,差异有统计学意义(P<0.01)。结论在胃癌组织中GLI1表达与E-cadherin、N-cadherin有关,提示GLI1可能参与了EMT过程。

MicroRNAs调控细胞“上皮-间质转换”的靶基因及相关信号途径的研究进展

MicroRNAs(miRNAs)作为转录后调节因子参与多种生物学过程的基因表达调控。其中,miRNAs是调控细胞"上皮-间质转换"(EMT)过程的重要因子,与肿瘤细胞迁移、侵袭和转移过程密切相关,并参与众多疾病的发生和发展。研究表明,受miRNAs调控的靶基因较广泛,均通过影响特定的信号通路对EMT发挥促进或抑制的效应。研究miRNAs对EMT的调控作用和机制对于肿瘤等相关疾病的防治具有重要价值。本文综合分析了近年来报道的从正向和负向调控细胞EMT发生的miRNAs的靶基因及其信号途径。

Her2在介导乳腺癌细胞上皮间质转换中的作用研究

目的探讨人类表皮生长因子受体2(Her2)在介导乳腺癌细胞上皮间质转换中的作用。方法采用免疫组化方法检测156例乳腺癌组织标本中Her2、上皮样细胞标志E-钙黏素(E-cadherin)、间质样细胞标志N-钙黏素(N-cadherin)表达,根据Her2表达情况将患者分为Her2阳性组与Her2阴性组,比较两组患者E-cadherin N-cadherin表达情况。结果与Her2阴性组比较,Her2阳性组E-cadherin阳性表达率明显降低(75%VS39.47%),N-cadherin明显升高(30%VS61.84%),两组比较差异均具有统计学意义(P<0.05);E-cadherin、N-cadherin两者表达与TNM分期、淋巴结转移有关(P<0.05),表现为TNM分期和淋巴结转移程度越严重,E-cadherin阳性表达越低,N-cadherin阳性表达越高;Her2、N-cadherin阳性表达患者的病死率更高,而E-cadherin阴性表达患者的病死率更高,阴性组与阳性组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。结论Her2阳性表达促进乳腺癌细胞上皮间质转换过程,同时增强乳腺癌的浸润转移能力,严重影响患者的预后情况。

Coronin 1c过表达促进宫颈癌细胞系SiHa的上皮间质转换

目的基于Notch1/LOX/Snail1通路探索冠蛋白1c(Coronin 1c)过表达对宫颈癌细胞系SiHa的上皮间质转换(EMT)过程的影响。方法构建针对Coronin 1c基因的RNA干扰重组腺病毒(Ad-Cor-siRNA)及含对照序列的重组腺病毒(Ad-control),并感染SiHa细胞沉默Coronin 1c基因表达;并分组为H8组:H8细胞;空白对照(blank)组:未用任何病毒处理的SiHa细胞;Ad-control组:感染空载体腺病毒Ad-control的SiHa细胞;Ad-Cor-siRNA组:感染重组腺病毒Ad-Cor-siRNA的SiHa细胞。Western blot检测细胞中Coronin 1c、E-cadherin、vimentin、LOX及Snail1蛋白表达;qPCR检测细胞E-cadherin和vimentin mRNA表达;免疫荧光实验检测细胞MMP-2、MMP-9和Notch1蛋白表达。结果与正常宫颈上皮细胞H8相比,SiHa细胞中Coronin 1c、vimentin、MMP-2、MMP-9、Notch1、LOX及Snail1蛋白表达均升高,E-cadherin表达下降。Coronin 1c沉默后,可促使vimentin、MMP-2、MMP-9、Notch1、LOX及Snail1蛋白表达下降,E-cadherin表达升高。结论Coronin 1c蛋白过表达与SiHa细胞EMT密切联系,其能激活Notch1/LOX/Snail1通路,促进SiHa细胞EMT。

TGFβ1诱导的肝脏前体细胞上皮-间质转换在逆转过程中可影响星状细胞活化

目的通过收集TGFβ1刺激过的前体细胞条件培养基,观察其对HSC的影响。方法收集TGFβ1预处理的前体细胞条件培养基,培养HSC细胞48 h,观察HSC活化程度及细胞外基质相关指标的变化。结果经TGFβ1刺激后的前体细胞形态明显变大变圆,胞质比例明显增加,核质比减少。去除TGFβ1刺激后,发现TGFβ1刺激超过24 h,前体细胞的上皮-间质转换发生逆转,表现为α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)蛋白表达量下降,24 h、36 h及48h分别为对照组的1.31倍(P>0.05)、0.97倍(P=0.027)、1.08倍(P=0.058)。与对照组相比,TGFβ1刺激后前体细胞的条件培养基对HSCs的细胞形态无明显差别。进一步分析发现,TGFβ1刺激前体细胞6h后,其条件培养基促使星状细胞α-SMA及细胞外基质标志物金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP-1)在蛋白及基因水平上(分别为对照组的4.12倍及2.64倍)的表达;然而刺激超过24h上述作用相反,在蛋白水平表现为α-SMA表达降低而TIMP-1的表达无明显变化,在基因水平α-SMA及TIMP-1均呈降低趋势(24 h、36 h、48 h分别为对照组0.81倍及0.98倍、0.96倍及0.61倍、0.63倍及0.76倍)。结论去除TGFβ1的刺激后,其诱导的上皮-间质转换可发生逆转,并在逆转过程中可影响星状细胞的活化。

GATA-3在乳腺癌组织中的表达及其与上皮间质转换的关系

目的:检测乳腺癌组织标本中GATA-3、E钙黏蛋白和波形蛋白的表达并分析其与临床病理特征的相关性。方法:收集乳腺癌组织标本52例及正常乳腺组织15例,用免疫组化检测GATA-3、E钙黏蛋白和波形蛋白的表达。结果:GATA-3在正常乳腺上皮细胞中均高表达,在乳腺癌中的阳性率约73.1%;GATA-3与E钙黏蛋白表达正相关(r=0.548,P<0.005),与波形蛋白负相关(r=-0.456,P<0.005),GATA-3表达高低与雌、孕激素受体正相关,与淋巴结转移负相关(P<0.05),与年龄、肿瘤大小、月经情况、临床分期、组织学分级、脉管浸润、人表皮生长因子受体2等无关联。结论:GATA-3在Luminal型乳腺癌高表达;GATA-3在乳腺癌中表达的缺失,可能与肿瘤上皮间质转换和远处转移有关。

烯醇化酶ENO1抑制非小细胞肺癌细胞上皮间质转换

背景与目的已有的研究表明:上皮间质转换(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是非小细胞肺癌发展和转移的一个重要过程,受到众多信号通路的精细调节。经典的丝裂原活化激酶(mitogen activatedprotein kinase,MAPK)信号通路是转化生长因子(transforming growth factor β,TGFβ)诱导EMT发生的必要条件。本研究以非小细胞肺癌细胞系A549为模型,对烯醇化酶(enolase-1,ENO1)影响细胞EMT过程的分子机制进行了初步研究。方法建立稳定过表达ENO1的A549细胞,用划痕实验检测细胞运动能力;用Western blot技术检测EMT过程相关分子标志物的变化;通过TGFβ-1诱导实验检测ENO1过表达对EMT的影响;通过上皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)诱导实验和Western blot检测ENO1过表达引起胞外信号调节激酶(extracellular signal regulated protein kinase,ERK)磷酸化的改变。结果 ENO1过表达抑制A549细胞侧向迁移能力。ENO1过表达还会引起上皮样标志物E-cad-herin表达上调,同时间质样标志物N-cadherin和Vimentin表达下降;TGFβ-1诱导实验也证实了ENO1对EMT进程的抑制作用。EGF活化实验显示ENO1对ERK磷酸化的抑制作用。结论在非小细胞肺癌细胞中,ENO1具有抑制细胞EMT的作用,且很可能是通过抑制MAPK通路来实现。

趋化因子CXCL11激活NF-κB信号通路促进胰腺癌的侵袭转移及上皮间质转换

目的探讨NF-κB信号通路在趋化因子CXCL11诱导胰腺癌Panc-1细胞侵袭及上皮间质转换(EMT)中的作用。方法通过外源性CXCL11干预胰腺癌Panc-1细胞,以未干预组作为对照,Transwell小室侵袭实验检测各组Panc-1细胞的侵袭能力,Westernblot检测p65、P-p65、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的蛋白表达,免疫荧光检测p65的细胞内定位。使用NF-κB抑制剂BAY11-7082联合外源性CXCL11干预Panc-1细胞,再次通过Transwell小室侵袭实验检测各组Panc-1细胞的侵袭能力。结果外源性CXCL11可明显诱导Panc-1细胞侵袭(t=12.424,P<0.01),促进p65入核,并上调P-p65、N-cadherin和Vimentin,下调E-cadherin蛋白。抑制NF-κB通路后,外源性CXCL11失去了对胰腺癌细胞侵袭(P<0.01)和EMT的诱导作用。结论趋化因子CXCL11通过激活NF-κB信号通路,诱导胰腺癌细胞侵袭和EMT过程。

TGF-β1诱导大鼠肝星状细胞系HSC-T6活化及上皮间质转换

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)活化及上皮间质转换(EMT)中的作用。方法体外培养HSC-T6,用MTT法筛选TGF-β1对HSC-T6作用的最佳浓度;用10μg/L TGF-β1处理HSC-T6 24 h,相差倒置显微镜下观察细胞形态改变,免疫荧光染色法检测细胞骨架结构F-actin蛋白的表达,RT-q PCR法检测肌动蛋白α-SMA及代表上皮间质转换的神经黏附素(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)和上皮黏附素(E-cadherin)基因表达;用不同浓度(0、5和10μg/L)的TGF-β1处理HSC-T6 24 h,Western blot检测α-SMA、N-cadherin、vimentin和E-cadherin蛋白表达。结果 10μg/L TGF-β1干预HSC-T6 24 h有最好的细胞存活率;TGF-β1刺激HSC-T6后,细胞拉伸,伪足增多呈星形,细胞间连接疏松,呈显著活化状态;F-actin聚集形成应力纤维丝,沿细胞长轴分布;实验组α-SMA mRNA及vimentin mRNA的表达量明显高于对照组(P<0.05),而E-cadherin mRNA的表达量明显降低(P<0.05);在不同浓度的TGF-β1呈剂量依赖性致α-SMA及N-cadherin和vimentin的蛋白表达量增多,而E-cadherin的蛋白表达量减少。结论 TGF-β1可诱导HSC-T6活化及上皮间质转换。