异位和正常子宫内膜间质细胞对上皮细胞间隙连接细胞间通讯的影响

目的研究体外异位和正常子宫内膜间质细胞对内膜上皮细胞间隙连接细胞间通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)功能的不同影响。方法取24例卵巢处子宫内膜异位灶以及10例正常子宫内膜,分离、纯化上皮细胞和间质细胞,建立体外上皮细胞单独培养、上皮细胞与间质细胞共培养模型。在激光共聚焦显微镜下采用荧光漂白后恢复技术分别检测各组上皮细胞的GJIC功能。结果①异位内膜上皮、间质细胞纯度分别为92%、95%,对照组内膜上皮、间质细胞纯度分别为95%、98%;②单独培养的异位内膜上皮细胞与单独培养的正常内膜上皮细胞的GJIC功能无显著性差异(P>0.05);③与正常间质细胞共培养后,上皮细胞中GJIC功能明显上调,而与异位内膜间质细胞共培养的上皮细胞中GJIC功能未见明显变化。结论异位间质细胞丧失了调节上皮细胞GJIC的能力,这种调节能力的异常可能与子宫内膜异位症发生有关。

间隙连接细胞间通讯与胸苷激酶系统“旁观者效应”的关系及其调控

增强“旁观者效应”是提高单纯疱疹胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)基因系统治疗效果的关键手段。旨在探讨间隙连接细胞间通讯(GJIC)在HSV-TK/GCV系统“旁观者效应”中的作用及其化学调控。通过采用划痕标记染料示踪技术(SLDT)比较ACHN、HeLa、NIH-3T3、Cos-7及L-02等五种不同细胞系GJIC功能状况,四甲基偶氮唑盐酶反应比色法(MTT法)检测HSV-TK/GCV对其杀伤效应和“旁观者效应”,并比较GJIC上调剂apigenin和抑制剂18-α-glycyrrhetinic acid(AGA)对GJIC和“旁观者效应”的影响。结果表明,GJIC功能强大的NIH-3T3、Cos-7及L-02细胞对HSV-TK/GCV敏感性及“旁观者效应”程度远较GJIC功能低下的ACHN和HeLa细胞高(P<0.001)。Apigenin可显著提高ACHN细胞GJIC功能,对HeLa细胞则无影响;相反,AGA可显著抑制NIH-3T3、Cos-7和L-02等三种靶细胞的GJIC功能。相应地,apigenin可明显提高ACHN细胞的“旁观者效应”而对HeLa细胞的“旁观者效应”则无影响,AGA则可明显降低上述三种细胞的“旁观者效应”。因此认为,细胞内在的GJIC功能与靶细胞对HSV-TK/GCV的敏感性和“旁观者效应”程度有正向关系,人为调控细胞GJIC后,“旁观者效应”程度亦发生相应改变。

间隙连接细胞间通讯在造血调控中的作用

间隙连接是相邻细胞间允许细胞间离子，代谢产物和其他信号分子交换的通道。这些细胞间通道由独特的结构单位间隙连接蛋白（Cx）组成。在脊椎动物中，Cx由多基因家族编码而成至少20种成员，在造血组织中主要是Cx43。Cx43在很多造血器官中均有表达，但主要表达在骨髓、胸腺、脾脏和其他淋巴组织。胸腺和骨髓上的基质细胞中Cx43蛋白组装成有功能的间隙连接已经得到证实。

Cx43介导的间隙连接细胞间通讯与造血调控

间隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular communication，GJIC）是相邻细胞间普遍存在的直接通讯方式，参与细胞间的物质交换和电信号传递。自胚胎发育起，细胞间就存在有功能的间隙连接，通过传递小分子递质（如cAMP、ATP、Ca^2＋等）对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用。GJIC的物质基础是分布于细胞膜上的连接蛋白（connexon，Cx），人类Cx是一个具有同源性的膜蛋白家族，拥有约20个不同的异构体，它们广泛分布于哺乳动物组织，并在不同的细胞类型、组织和种族中有不同的表达，家族成员依其相对分子质量不同而命名。GJIC在造血组织中广泛存在，而Cx43是其主要的连接蛋白。现就Cx43介导的间隙连接细胞间通讯在造血调控中的作用进行综述。

Cx43介导的间隙连接细胞间通讯与造血调控

间隙连接细胞间通讯（gap junction intercellular commu- nication,GJIC）是相邻细胞间普遍存在的直接通讯方式,参与细胞间的物质交换和电信号传递。自胚胎发育起,细胞间就存在有功能的间隙连接,通过传递小分子递质(如cAMP、ATP、Ca2+等)对细胞的新陈代谢、内环境稳定、增殖和分化等生理过程起着重要的调控作用。GJIC

细胞间隙连接与肿瘤

介绍细胞间隙连接的结构、功能和调节,着重阐述间隙连接介导的细胞间通讯在肿瘤中的变化、影响因素以及在肿瘤治疗中的作用。

左旋炔诺孕酮对人子宫内膜细胞体外增殖及细胞间通讯的影响

【目的】探讨左旋炔诺孕酮对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞增殖、间隙连接细胞间通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)及连接蛋白(connexin,Cx)43、32表达的影响。【方法】采用MTT法观察LNG对人子宫内膜细胞的增殖调节作用,采用划痕染料标记示踪技术,观察左旋炔诺酮(levonorgestrel,LNG)对原代培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察LNG对Cx43、Cx32表达的影响。【结果】LNG浓度为5×10-5mol/L时,对子宫内膜间质和上皮细胞均有抑制生长作用(P<0.05),体外培养的人子宫内膜间质细胞的GJIC功能较腺上皮细胞强(P<0.05),LNG可显著提高人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间荧光黄染料的扩散(P<0.05);同种Cx腺上皮细胞表达较间质细胞强(P<0.05),LNG对两种细胞Cx的表达没有影响(P>0.05)。【结论】LNG可抑制人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞体外增殖,显著促进细胞GJIC功能,提示其在逆转子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;LNG未影响子宫内膜细胞Cx43、Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能。

EMs异位及在位内膜间质细胞Cx43的表达及GJIC功能的体外研究

目的:研究子宫内膜异位症(EMs)的异位与在位内膜间质细胞中Cx43的表达及间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能,探讨间质细胞GJIC功能异常对EMs发病的影响。方法:取24例卵巢处子宫内膜异位灶、41例EMs在位内膜以及30例正常子宫内膜,分离出间质细胞,加入雌、孕激素培养,建立体外间质细胞培养模型。利用激光共聚焦显微镜(LSCM)分别检测三组间质细胞的Cx43表达及GJIC功能。结果:间质细胞成功培养率分别为:异位内膜组45.8%(11/24)、EMs在位内膜组92.7%(38/41)、对照组93.3%(28/30),异位内膜间质细胞纯度为95%,在位内膜间质细胞纯度达98%。EMs异位内膜间质细胞中Cx43表达水平及GJIC功能明显比其他两组低,正常对照组的Cx43表达水平及GJIC功能最高,且差异均有显著性(P﹤0.01)。结论:(1)同时建立EMs异位内膜、在位内膜及正常内膜间质细胞的体外模型,有助于研究EMs的发病机制;(2)间质细胞中Cx43蛋白表达下调及其GJIC功能异常与EMs发生有关,调节Cx43表达或GJIC功能可能是潜在的治疗策略。

ATRA调节人异位子宫内膜间质细胞GJIC Connexin基因、蛋白的作用及意义

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)、connexin基因、蛋白的调节作用及意义。方法:取24例子宫内膜异位症患者卵巢处异位内膜标本,分离纯化得到间质细胞,分别用0.1mmol/L、1mmol/L、10mmol/LATRA处理24h、48h、72h、96h、120h,同时设置空白对照组,采用荧光漂白后恢复技术检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43、Cx26、Cx32的基因及蛋白表达。结果:ATRA处理72h内,1mmol/L、10mmol/L组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1mmol/LATRA组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化。未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43、Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达;经1mmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43mRNA和蛋白表达,但未见Cx26、Cx32的mRNA及蛋白表达。结论:ATRA能选择性地诱导Cx43基因及蛋白表达,从而有效上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA可能是治疗子宫内膜异位症的潜在药物。

雌二醇及雌酮对人子宫内膜细胞GJIC及连接蛋白的影响

【目的】探讨雌二醇(E2)及雌酮(E1)对体外培养的人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)及连接蛋白(Cx)43、32表达的影响。【方法】采用划痕染料标记示踪技术及激光共聚焦显微镜扫描技术(LSCM),观察E2及E1对原代培养的20例人子宫内膜腺上皮细胞及间质细胞GJIC的影响,采用激光共聚焦显微镜扫描技术,观察E2及E1对Cx 43、Cx 32表达的影响。【结果】5×10-5mol/L雌二醇作用48 h后间质细胞及腺上皮细胞GJIC功能没有明显变化(P>0.05),2.5×10-5mol/L雌酮作用间质及腺上皮细胞48 h后,细胞GJIC功能有所下降(P<0.01),同种Cx腺上皮细胞表达较间质细胞强(P<0.05),5×10-5mol/L E2、2.5×10-5mol/L E1对两种细胞Cx的表达没有影响(P>0.05)。【结论】E1抑制细胞GJIC功能,提示其在子宫内膜增殖性病变的阶段扮演重要角色;E1及E2均未影响子宫内膜细胞Cx43、Cx32的表达,提示Cx表达量不能完全反映GJIC功能。

全反式维甲酸上调异位子宫内膜间质细胞GJIC功能的机制

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对人异位子宫内膜间质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的调节作用及其机制.方法:取人子宫内膜异位症(EMs)患者的间质细胞,采用0.1,1,10μmol/L ATRA于24,48,72,96和120 h分别进行处理,同时设置空白对照组.采用激光共聚焦显微镜检测异位内膜间质细胞的GJIC功能,并检测与GJIC功能密切相关的Cx43,Cx26和Cx32的基因及蛋白表达.结果:经ATRA处理后,1μmol/L与10μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能明显增强;0.1μmol/L处理组的异位内膜间质细胞荧光恢复功能无明显变化.未经ATRA处理的异位内膜间质细胞中无Cx43,Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达;经1,10μmol/LATRA处理后,异位内膜间质细胞中检测到Cx43 mRNA和蛋白表达,但未见Cx26和Cx32的mRNA及蛋白表达.间质细胞的GJIC功能与去磷酸化Cx43蛋白的表达有关.结论:ATRA能选择性的诱导Cx43基因及其去磷酸化蛋白的表达,从而上调异位内膜间质细胞的GJIC功能;ATRA酸可能是治疗EMs的潜在药物.

ASODNs下调Cx43表达对正常子宫内膜间质细胞生长、黏附及侵袭能力的影响

目的通过下调正常子宫内膜间质细胞Cx43蛋白表达，了解内膜间质细胞生物学行为的变化。方法取5例手术患者的正常子宫内膜组织，分离、纯化内膜间质细胞，并分组培养。采用反义寡聚核苷酸（ASODNs）＋Lipo共转染正常内膜间质细胞48h；westernblot法检测间质细胞Cx43蛋白表达；荧光漂白后恢复技术（FRAP）定量分析间质细胞的间隙连接细胞间通讯（GJIC）功能；MTT法检测间质细胞的生长及黏附能力；Transwell小室检测间质细胞的侵袭能力。结果ASODNs＋Lipo处理48h后，间质细胞转染率达65％；ASODNs＋Lipo能有效抑制Cx43蛋白表达，且抑制效果可持续48h以上；ASODNs＋Lipo处理48h后，间质细胞GJIC功能被明显抑制；96～120h，ASODNs＋Lipo组间质细胞的吸光度值高于其余3组；ASODNs＋Lipo处理组间质细胞的黏附及侵袭能力均较其余3组增强。结论ASODNs能有效下调子宫内膜间质细胞Cx43蛋白表达并抑制其GJIC功能，导致细胞增殖速度加快，黏附侵袭能力增强。

全反式维甲酸对急性白血病骨髓基质细胞GJIC功能的影响

目的观察在全反式维甲酸(ATRA)作用下急性白血病骨髓基质细胞间连接蛋白43(Cx43)表达的变化及通讯功能的改变。方法体外培养急性白血病骨髓基质细胞,传代后加入ATRA(1×10^(-5)mol/L),采用细胞免疫化学及流式细胞术检测加药前后Cx43表达的变化;采用细胞划痕染料传输技术比较二者间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能的差异。结果急性白血病骨髓基质细胞加药前后,细胞免疫化学方法检测Cx43表达的阳性率分别为47.2%±2.04%和54.5%±5.66%,流式细胞术检测Cx43的含量为38.75%±23.95%和49.5%±5.46%;加药后染料可传输至4～5列细胞,明显高于加药前(P<0.01)。结论加入ATRA后,急性白血病骨髓基质细胞间通讯功能较加药前明显增强。

上调白血病骨髓基质细胞GJIC功能对Jurkat细胞药物敏感性的影响

目的观察上调白血病骨髓基质细胞间隙连接细胞间通讯(GJIC)功能对共培养的人急性淋巴细胞白血病细胞株(Jurkat)细胞药物敏感性的影响。方法体外培养白血病骨髓基质细胞,转染Cx43基因,罗氏黄染料传输法检测转染后骨髓基质细胞的GJIC功能变化;将Jurkat细胞与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养,观察共培养的Jurkat细胞对化疗药物甲氨蝶呤(MTX)药物敏感性的改变。结果转染Cx43基因的白血病骨髓基质细胞的GJIC功能明显增加;与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞在MTX作用下的存活率(61.3±3.24)%较未转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞(82.4±3.12)%明显下降;与转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞在MTX作用下的凋亡率(48.1±3.78)%较与未转染Cx43基因的骨髓基质细胞共培养的Jurkat细胞(18.5±3.43)%明显增加,差异有统计学意义(P<0.01)。结论上调白血病骨髓基质细胞GJIC功能能够增加共培养的Jurkat细胞对化疗药物的敏感性。

辐射旁效应与间隙连接

辐射旁效应是近几年来放射生物学领域研究的热点,它是指直接受照细胞周围细胞的反应,这些反应包括DNA损伤[1]、基因突变[2]、姐妹染色单体互换[3]和细胞死亡[4]以及保护性反应[5]、凋亡[6]、适应性反应[7]等.目前对辐射旁效应的研究主要集中在分子及细胞水平旁效应的机制、活体旁效应及旁效应在放射治疗肿瘤中的作用等方面.本文主要就间隙连接细胞间通讯在辐射旁效应产生中的作用展开讨论.

Survivin microRNA对人肝癌细胞间通讯功能影响的实验观察

目的 观察survivin的microRNA对HepG2细胞间通讯功能主要环节的影响作用.方法 人工设计合成特异性靶向survivin的microRNA的序列.肝癌细胞株HepG2接种于细胞培养板内并分为5组.作用后收集各组细胞.流式细胞术检测各组细胞增殖率和凋亡指数.划痕染料示踪技术检测转染前后HepG2的细胞间隙连接通讯功能变化,放射性免疫法定量测定细胞内cAMP含量的变化,钙离子指示剂Fura-2双波长荧光检测技术检测转染前后胞内Ca2＋水平的变化.结果 流式细胞术检测各浓度miRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组（P＜0.05）,高浓度转染组最明显（P＜0.05）;各浓度microRNA转染组细胞增殖指数明显低于对照组（P＜0.05）,高浓度转染组最明显（P＜0.05）;Survivin microRNA转染组HepG2细胞间隙连接通讯功能较两个对照组有不同程度的恢复和增强;不同浓度Survivin microRNA转染组细胞内cAMP浓度明显高于对照组;Survivin microRNA转染组HepG2细胞内[Ca2＋]与两个对照组相比有升高趋势.结论 Survivin microRNA能显著抑制HepG2细胞的增殖,促进GJIC功能恢复和增强,并能直接影响细胞内的第二信使传递系统.

Cx43介导的GJIC功能在白血病的研究进展

间隙连接细胞间通讯（GJIC）是相邻细胞间普遍存在的直接通讯方式,参与细胞间的物质交换和信号的传递.GJIC是1种高效、快速的传递方式,对细胞的新陈代谢、内环境的稳定及许多生理过程（如增殖、分化、凋亡等）发挥着重要的调节作用.GJIC的物质基础是相邻细胞膜上连接子耦联形成的通讯通道,每个连接子含6个连接蛋白（Connexon,Cx）.Cx是1个较保守的蛋白家族,至今在人类中已经发现21种,依据相对分子质量命名,如Cx26、Cx32、Cx43等.

应用hprt和CD59基因研究辐射旁效应的产生及机理

本研究将辐射后的hprt-AL细胞与未辐射的hprt+AL细胞共培养,通过加有次黄嘌呤氨甲基喋呤胸腺嘧啶(HAT)的培养基选择性杀死被辐射的hprt-AL细胞,探讨了损伤信号在辐射与未辐射细胞间的传导及其机理.研究发现受辐射的hprt-AL细胞能将损伤信号传导给未辐射的hprt+AL细胞,导致其CD59基因位点突变率显著性增加.通过观察DMSO和Lindane对α粒子照射诱发的细胞旁效应的抑制作用发现,在受辐射的共培养实验组中,Lindane能显著提高未辐射细胞的存活率,降低其突变率;DMSO仅能提高其存活率,但对其突变无明显影响,显示细胞间通讯在α粒子照射诱发细胞存活及基因突变旁效应中起重要作用.