双参通冠方对急性心肌缺血再灌注模型核因子-κB信号途径及细胞间隙连接通讯的影响

目的观察双参通冠方 (SSTG)对急性心肌缺血再灌注损伤动物模型心肌梗死面积及重量 ,心肌核因子 κB(nuclearfactor- kappaB ,NF-κB)信号途径及心肌细胞间隙连接蛋白Cx4 3的影响。方法用冠状动脉结扎 /放松法复制大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 ,N-BT染色法测量心肌梗死范围 ;免疫组织化学法检测心肌组织NF-κBp6 5表达 ;双抗体夹心ABC-ELISA法测定各组血清肿瘤坏死因子 (TNF α)和细胞间黏附分子- 1(ICAM-1)含量 ;免疫组织化学法测定心肌细胞通讯间隙连接蛋白Cx4 3表达。结果模型组大鼠心肌梗死面积及梗死区重量、NF-κBp6 5表达、血清中TNF-α及ICAM-1含量明显升高 (P <0.0 5 ) ;心肌连接蛋白Cx4 3大量降解。SSTG处理后心肌梗死面积及重量减轻 ;血清中TNF α、ICAM 1水平下调 (P <0 0 5 ) ;NF κBp6 5表达及Cx4 3降解抑制。 结论缺血再灌注时 ,心肌梗死严重 ,NF κB信号途径可被激活 ,Cx4 3降解严重。SSTG能抑制NF-κB的活化 ,抑制血清中TNF-α、ICAM-1的过量分泌和抑制Cx4 3的降解 。

茶多酚对高转移性人肺癌细胞间隙连接通讯功能的上调研究

应用MTT法体外观察不同浓度茶多酚对PG细胞的杀伤作用 ,激光共聚焦显微镜和流式细胞仪检测用药后PG细胞内Ca2 +浓度、细胞间隙连接通讯(GJIC)、Cx4 3表达和细胞增殖周期分布的变化。结果显示 ,4个浓度的茶多酚对PG细胞均有杀伤作用 ,呈剂量依赖关系。细胞增殖受到明显抑制 ,使细胞阻滞于G0 /G1期 ,不能进入S期及G2 /M期 ,细胞增殖指数明显下降。与对照组相比 ,随着茶多酚浓度的增加 ,细胞内Ca2 + 浓度、GJIC和Cx4 3表达水平逐渐上升。提示茶多酚对PG细胞具有生长抑制作用 。

可吸入颗粒物PM_(10)对细胞间隙连接通讯的抑制作用

[目的 ]研究直径≤ 1 0 μm的可吸入大气颗粒物 (PM1 0 )对细胞间隙连接通讯的影响 ,探讨PM1 0 的非遗传毒性作用。 [方法 ]用大流量采样器 ,采集城区交通干道旁约 1 8m高度处大气中的PM1 0 。超纯水超声提取、低温真空冷冻干燥制备PM1 0 悬液。采用细胞代谢协同试验和染料划痕试验观察PM1 0 对中国仓鼠肺成纤维V79细胞以及人肺成纤维细胞间隙连接通讯的影响。 [结果 ]PM1 0 抑制V79细胞的代谢协同作用 ,使V79- 细胞的存活率增高 ,在 1 0～ 1 0 0mg/L剂量范围内 ,与对照组比较 ,克隆形成数明显增高 ,有剂量 反应关系 (r=0 94,P <0 0 5)。细胞划痕实验结果显示 ,在PM1 01 0～ 1 0 0mg/L剂量范围内 ,在人肺成纤维细胞中荧光染料扩散距离随剂量的增加而减小 (7 5～ 2 1 61mm) ,与对照组(2 6 56mm)比较 ,差异显著。 [结论 ]PM1 0 能抑制细胞间隙连接通讯 ,提示可能在癌症的发生过程中起促进作用。

6种类胡萝卜素对人乳腺癌细胞株细胞间隙连接通讯功能影响的比较

目的:探讨类胡萝卜素对乳腺癌细胞MDA-MB-435S和MCF-7细胞的细胞间隙连接通讯功能的影响。方法:类胡萝卜素分别与乳腺癌细胞MDA-MB-435S、MCF-7共培养,划痕标记染料示踪技术检测类胡萝卜素对乳腺癌细胞间隙连接通讯功能的影响。结果:β-胡萝卜素、虾青素和番茄红素对MDA-MB-435S细胞的细胞间隙连接通讯功能具有较强的促进作用;角黄素、玉米黄素和玉米黄素双棕榈酸酯对MDA-MB-435S细胞的细胞间隙连接通讯功能的影响不明显;β-胡萝卜素、虾青素和角黄素对MCF-7细胞的细胞间隙连接通讯功能具有较强的促进作用;番茄红素、玉米黄素和玉米黄素双棕榈酸酯对MCF-7细胞间隙连接通讯功能的影响不明显。

细胞间隙连接通讯与肿瘤

由连接蛋白构成的细胞间隙连接通讯(GJIC)广泛存在于脊椎动物中,可以直接介导细胞间小分子物质的传递,而不需要通过细胞间质。GJIC与肿瘤密切相关,多数肿瘤GJIC能力降低或丧失,连接蛋白不表达或胞内定位,而恢复GJIC可以抑制肿瘤, GJIC已成为肿瘤预防与治疗研究的潜在靶点之一。

玉米赤霉烯酮对细胞间隙连接通讯的影响

目的 了解真菌性雌激素玉米赤霉烯酮 (ZEA)对细胞间隙连接通讯 (GJIC)的影响。方法 用荧光漂白后恢复 (fluorescenceredistributionafterphotobleaching ,FRAP)技术 ,在激光扫描共聚焦显微镜下观察ZEA对HaCaT细胞GJIC功能的影响。结果 ZEA在 0 1μmol/L对HaCaT细胞的GJIC没有明显影响 ,但在 1～ 10 0 μmol/L浓度下都有明显的抑制作用。ZEA不能有效地拮抗TPA引起的GJIC抑制。结论 ZEA在 1μmol/L以上就能抑制GJIC功能 ,提示它在一定条件下可能有促癌作用。

肝癌细胞中connexin32、connexin43的表达及其与间隙连接通讯功能的相关性

目的 :研究肝细胞肝癌和正常肝细胞间隙连接蛋白connexin 32 (Cx32 )、connexin 4 3(Cx4 3)的表达 ,及其对间隙连接通讯功能 (GJIC)的影响。方法 :应用细胞培养及流式细胞分析技术 (FCM) ,研究肝癌细胞系HHCC、SMMC 772 1和正常肝细胞系QZG细胞中Cx32和Cx4 3的表达。结合LuciferYellow划痕标记荧光传输技术 (SLDT) ,检测上述细胞的间隙连接通讯功能。结果 :流式细胞仪分析证实 ,Cx32蛋白在肝癌细胞系HHCC、SMMC 772 1和正常肝细胞系QZG细胞中表达的阳性率分别为 1 9%、0 7%和 99.0 % ;Cx4 3蛋白在HHCC、SMMC 772 1和QZG细胞中表达的阳性率分别为 7 3%、2 6 5 %和 99 1%。SLDT检测发现肝癌细胞HHCC ,SMMC - 772 1的间隙连接通讯功能较正常肝细胞QZG明显减弱。结论 :Cx32、Cx4 3蛋白在正常肝细胞中具有较高水平的表达 ,在肝癌细胞中表达水平显著降低 ;肝癌细胞的间隙连接通讯功能较正常肝细胞亦明显减弱。Cx32、Cx4 3表达调控异常引起的间隙连接通讯障碍可能与肝癌的发生密切相关。

细胞间隙连接通讯与肿瘤

细胞间隙连接通讯 (GJIC)在多细胞动物细胞的生长、分化和凋亡等生理过程中发挥着重要调节作用。研究表明大多数转化细胞和肿瘤细胞GJIC功能减弱或消失。阻止肿瘤促进剂对细胞GJIC功能的抑制或恢复癌细胞GJIC功能将对肿瘤的预防和治疗具有重要意义。

北京市大气PM_(10)和PM_(2．5)对人肺成纤维细胞间隙连接通讯及连接蛋白的影响

[目的]探讨北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)对人肺成纤维细胞(HLF)间隙连接通讯(GJIC)及间隙连接蛋白(Cx43)的影响。[方法]颗粒物样品采自北京市城区采暖期,实验细胞为HLF。采用划痕染料标记示踪法(SLDT)测定HLF的GJIC的水平;蛋白免疫印迹(weslen bloting)法观察HLF细胞膜上Cx43的表达。[结果]细胞划痕实验结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)均可抑制细胞间荧光扩散,抑制作用随剂量增高而增强;蛋白免疫印迹结果显示,PM_(10)和PM_(2.5)可使细胞膜Cx43表达减少,减少量随浓度的增高而增加。[结论]北京市大气颗粒物PM_(10)和PM_(2.5)能抑制HLF的GJIC,抑制的机制可能与Cx43表达抑制有关。

热疗上调细胞间隙连接通讯对胶质瘤侵袭性的影响及其机制

目的探讨热疗降低胶质瘤侵袭性的作用与细胞间隙连接通讯(gap junctional intercellular communication,GJIC)的关系。方法热疗处理C6胶质瘤细胞后,免疫组织化学法和Western blot法动态检测HSP70和Cx43的表达水平;划痕标记染料示踪技术检测胶质瘤GJIC功能变化;结晶紫染色法检测胶质瘤侵袭性的改变。结果 C6细胞经热疗后,HSP70表达增加,于30 min时含量最多。C6细胞内Cx43的表达水平也在热疗后明显增加,并于热疗后的120 min达高峰,后逐渐减少。热疗后GJIC功能的恢复与C6细胞内Cx43的表达相一致,且GJIC功能越强,胶质瘤侵袭性越低。结论胶质瘤细胞经热疗后HSP70表达增加,增加的HSP70可能是通过其分子伴侣作用提高Cx43的表达水平,进而上调GJIC功能而引起胶质瘤侵袭性的下降。

芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响

目的 研究芳维A酸乙酯对细胞间隙连接通讯的影响。方法 用划痕标记染料示踪技术检测黄色荧光素在培养细胞中的传递情况。结果 芳维A酸乙酯能够拮抗促癌剂TPA对GJIC的抑制作用 ,在一定范围内 ,芳维A酸乙酯浓度越大 ,其对NIH3T3细胞GJIC功能的恢复作用越强 ,因而具有抗促癌作用。结论 芳维A酸乙酯不仅具有抗增殖、诱导分化作用 ,同时还具有癌症的化学预防作用。

皮肤瘢痕癌与细胞间隙连接通讯的研究现状

皮肤瘢痕癌是指发生于各种原因所致的皮肤瘢痕基础上的癌变。皮肤瘢痕的癌变率为1%～2%,癌变潜伏期为3个月至数年,组织学类型以鳞状细胞癌为主,预后较差,发病机制目前还不甚明确。细胞间隙连接通讯(GJIC)是细胞间的一种重要连接方式,肿瘤和转化细胞普遍存在GJIC的缺陷。皮肤瘢痕癌变的分子机制研究以及它与GJIC的相关性目前是肿瘤研究领域的新课题。

激光扫描共聚焦显微镜监测细胞间隙连接通讯的方法

为建立肿瘤细胞学新的研究方法，本文应用培养的胰腺癌细胞通过细胞间隙连接通讯功能测定技术，将细胞以ＣＦＤＡ／ＡＭ染色后，在３７℃及５％ＣＯ２内孵育１０分钟，再经激光扫描共聚焦显微镜进行荧光测定。结果发现胰腺癌细胞的荧光恢复速率明显上升（０１５２±０１１７比９８±０２４７，Ｐ＜００１），表明细胞间隙连接通讯功能迅速增强，细胞增殖受到抑制。本研究提示新的监测方法为检测基因治疗效果提供一项重要指标，也为肿瘤细胞生物学的研究提供了新的手段。

双环醇拮抗DDT引起的细胞间隙连接通讯功能抑制研究

目的研究治肝炎药物双环醇对促癌剂滴滴涕(DDT)引起细胞间隙连接通讯(GJIC)功能抑制的拮抗作用及作用机制。方法划痕标记染料示踪技术直接观察DDT引起的大鼠肝上皮WB-F344细胞GJIC功能抑制并分析双环醇的作用。利用Western blot方法检测间隙连接蛋白43(Cx43)、磷酸化Cx43、E-cadherin及β-Catenin的表达和活性。细胞免疫荧光技术考察WB-F344细胞Cx43蛋白亚细胞定位、间隙连接的形成及E-cadherin和β-Catenin在细胞内的表达。结果 DDT能剂量依赖性的抑制WB-F344细胞GJIC功能,20μM浓度时小分子荧光染料Luciferyellow CH仅能从伤沿细胞向后传递1-2列细胞。双环醇能部分恢复DDT引起的GJIC功能抑制,且具有一定剂量依赖关系,其作用机制与抑制DDT引起的磷酸化Cx43蛋白表达量升高,进而恢复DDT损伤的间隙连接形成有关。DDT和双环醇对与Cx43蛋白功能密切相关的E-cadherin及β-Catenin的表达、活性及细胞内定位均无明显影响。结论双环醇能通过影响Cx43蛋白的磷酸化水平,部分恢复环境促癌剂DDT引起的WB-F344细胞间隙连接的形成,改善GJIC功能。对GJIC的功能抑制是多种促癌剂诱发肿瘤发生的重要原因,前期研究显示双环醇具预防二甲基亚硝胺/苯巴比妥诱发肝癌发生的作用,本文研究结果进一步提示,双环醇在预防杀虫剂DDT(一种主要的环境致癌物)诱发的肿瘤方面亦具有一定潜能。

发酵轮叶党参正丁醇萃取物对细胞间隙连接通讯的影响

[目的]探讨发酵轮叶党参正丁醇萃取物对细胞间隙连接通讯(GJIC)的影响.[方法]利用划痕染料示踪技术,在荧光倒置显微镜下观察细胞传递的距离,探讨发酵轮叶党参正丁醇萃取物对大鼠乳鼠肝细胞GJIC功能的影响.[结果]TPA组染料扩散距离明显低于正常对照组及4个不同质量浓度给药组(P<0.01);与正常对照组比较,400mg/L与250mg/L给药组染料扩散距离差异均有统计学意义(P<0.01).[结论]发酵轮叶党参正丁醇萃取物对GJIC功能有促进作用.

放线共生放线杆菌培养上清对成骨细胞分化及间隙连接通讯的影响

目的探讨放线共生放线杆菌(actinobacillus actinomycetemcom itans,A.a)培养上清对成骨细胞分化以及细胞间隙连接通讯的影响。方法在A.a培养上清中体外培养成骨细胞,中性红检测成骨细胞活性,RT-PCR检测成骨细胞分化标记,免疫组化观察Ⅰ型胶原蛋白表达,利用划痕标记荧光染料示踪(SLDT)法与Westernblot检测Connexin43的表达,研究成骨细胞间隙连接通讯的变化。结果20%以下浓度的A.a培养上清对成骨细胞无明显致死性。RT-PCR结果显示A.a培养上清中成骨细胞分化标记的表达降低。免疫组化结果显示A.a培养上清中成骨细胞Ⅰ型胶原蛋白表达降低。SLDT法结果显示A.a培养上清中成骨细胞荧光染料扩散低于对照组。Western blot检测结果显示A.a培养上清中成骨细胞Connexin43表达降低。结论A.a培养上清对成骨细胞分化及细胞间隙连接通讯有抑制作用。

葡萄糖酸锌和氯化锰对二氧化硅致CHL细胞间隙连接通讯功能下调的影响

目的观察葡萄糖酸锌(ZnG)、氯化锰(MnCl2)及其联合作用对二氧化硅(SiO2)致中国仓鼠肺成纤维细胞(CHL)间隙连接通讯(GJIC)功能下调的影响,并寻找两者的最佳剂量组合。方法常规培养CHL细胞,按实验分组:生理盐水对照组(阴性对照组);SiO2组(100 mg/L);ZnG组(2.25 mg/L);MnCl2组(1.00 mg/L);SiO2+ZnG组(培养液除含100 mg/L SiO2外,分别含1.00,1.50,2.25 mg/L ZnG);SiO2+MnCl2组(培养液除含100 mg/L SiO2外,分别含0.25,0.50,1.00 mg/L MnCl2);ZnG和MnCl2联合作用组(每组除含SiO2100 mg/L外,采用两因素三水平正交设计,ZnG+MnCl2共设9个浓度组)。培养6 h后通过划痕染料示踪技术(SLDT)观察成纤维细胞通讯连接功能。结果与SiO2组比较,ZnG和MnCl2在一定的浓度下可以减轻SiO2对中国仓鼠肺成纤维细胞通讯连接功能抑制作用(P<0.05);ZnG(1.50 mg/L)与MnCl2(0.50 mg/L)联合作用效果最好。结论ZnG,MnCl2及二者联合在体外可减轻SiO2粉尘对中国仓鼠肺成纤维细胞通讯连接功能的抑制作用。

缺氧复氧对内皮细胞间隙连接通讯功能的影响初探

目的 观察缺氧复氧刺激对内皮细胞间隙连接通讯功能的影响 ,初步探讨缺氧复氧引起内皮细胞损伤的机制。方法 将人脐静脉内皮细胞株 ECV30 4分为两组 ,常氧对照组在常氧状态下培养 12～ 18小时 ;缺氧复氧组先在氧浓度低于 1%状态下培养 12～ 14小时 ,再置于常氧状态复氧 0～ 6小时。应用荧光漂白回复技术对细胞间隙连接通讯功能进行分析 ,结果用荧光回复率表示。结果 常氧对照组内皮细胞荧光回复率为 34 .4%±16 .5 %;缺氧复氧组经缺氧处理以及复氧 4小时和复氧 6小时处理后 ,其内皮细胞荧光回复率分别为 42 .7%±2 2 .7%、37.8%± 13.2 %和 43.0 %± 16 .2 %,与常氧对照组相比差异无显著性 (P>0 .0 5 ) ;经复氧 2小时处理后 ,内皮细胞的荧光回复率为 2 5 .0± 7.4%,与常氧对照组和经缺氧、复氧 4小时、复氧 6小时处理组相比 ,差异十分显著(P<0 .0 1)。结论 在本实验条件下 ,单独缺氧 12～ 14小时不影响内皮细胞间隙连接通讯功能 ,而复氧 2小时则能显著抑制间隙连接通讯功能。由此提示 ,间隙连接通讯功能改变参与了内皮细胞缺氧复氧损伤的早期反应。