乳腺癌患者唾液中转铁蛋白、间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1、α2巨球蛋白及锌指同源框蛋白4水平测定及临床意义

目的探讨乳腺癌患者唾液蛋白内转铁蛋白(TF)、间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1(ITIH1)、α2巨球蛋白(α2M)及锌指同源框蛋白4(ZFHX4)等4个相关蛋白的水平变化规律。方法收集18例乳腺癌患者和18例健康女性作为研究对象,采集其唾液标本,采用酶联免疫吸附试验检测唾液中TF、ITIH1、α2M及ZFHX4等4个蛋白表达水平。通过STRING和KEGG数据库对上述4种蛋白进行生物信息学分析。结果乳腺癌患者唾液中TF、ZFHX4水平分别为(3.092±0.309)mg/L、(0.546±0.084)μg/L,均高于健康女性的(2.231±0.217)mg/L、(0.207±0.059)μg/L,差异均有统计学意义(t=2.281,P=0.030;t=3.310,P=0.003)。乳腺癌患者唾液中ITIH1、α2M水平分别为(0.162±0.105)μg/L、(2.448±0.218)mg/L,均低于健康女性的(1.709±0.384)μg/L、(3.568±0.258)mg/L,差异均有统计学意义(t=3.891,P=0.001;t=3.318,P=0.003)。蛋白相互作用分析发现TF和α2M具有相互作用,TF是一个核心蛋白,还与多个蛋白具有相互作用。TF存在于缺氧诱导因子-1信号通路上,该通路在细胞生长发育和生理应激以及肿瘤的发生发展过程中具有重要作用。结论唾液中TF、ITIH1、α2M及ZFHX4等4个蛋白的水平变化可能与乳腺癌的发生发展密切相关,为乳腺癌的临床诊断提供一种新的方式。

间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1、α-2抗纤溶酶、运甲状腺素蛋白对肝纤维化的诊断价值及复方汉防己对其影响

目的：探讨间-α胰蛋白酶抑制因子重链H1（ITIH1）、α-2抗纤溶酶（SERPINF2）、运甲状腺素蛋白（TTR）对大鼠肝纤维化的诊断价值；以及复方汉防己对肝纤维化ITIH1、SERPINF2、TTR的影响。方法；Fisher344大鼠随机分为对照组，造模组，低、中、高剂量复方汉防己干预组。采用RT-PCR和免疫组织化学检测大鼠肝组织ITIH1、SERPINF2、TTR的mRNA及蛋白表达，ELISA法检测其血清含量。H-E染色、Masson三色染色、网状纤维染色观察肝纤维化程度。结果：造模组大鼠血清及肝组织中ITIH1、SERPINF2、TTR蛋白和mRNA的表达较对照组显著减少。复方汉防己干预组大鼠血清及肝组织中3者的表达较造模组均有不同程度升高。病理结果也显示复方汉防己干预组大鼠肝纤维化程度均有不同程度减轻。结论：ITIH1、SERPINF2、TTR对肝纤维化的分级诊断及病情监测具有一定的价值；复方汉防己能明显降低CCl4诱导的大鼠肝纤维化程度并能升高ITIH1、SERPINF2、TTR蛋白和mRNA的表达。

血清ITIH4和MCL-1水平与急性缺血性脑卒中患者病情程度及预后的关系

目的探究急性缺血性脑卒中(AIS)患者血清间α胰蛋白酶抑制因子重链4(ITIH4)、髓样细胞白血病因子-1(MCL-1)表达与病情程度及预后的关系。方法纳入2019年7月—2022年7月河南科技大学附属黄河医院神经内科诊治AIS患者128例为AIS组。根据入院时美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分,分为轻度亚组(NIHSS<6分,n=42)、中度亚组(NIHSS 6~<14分,n=52)和重度亚组(NIHSS≥14分,n=34)。根据出院3个月时AIS患者改良Rankins评分,分为预后不良亚组(mRS评分>2分,30例)和预后良好亚组(mRS评分≤2分,98例)。另选取同期医院体检的健康人70例为健康对照组。酶联免疫吸附试验检测血清ITIH4、MCL-1水平。Pearson相关分析血清ITIH4、MCL-1水平与病情程度及预后的相关性;多因素Logistic回归分析影响AIS患者预后的因素;受试者工作特征曲线分析血清ITIH4、MCL-1对AIS患者预后的预测价值。结果AIS组患者血清ITIH4、MCL-1水平显著低于健康对照组(t/P=43.211/<0.001,43.191/<0.001);病情程度越重,AIS患者血清ITIH4/MCL-1水平越低(F/P=107.796/<0.001,297.976/<0.001);预后不良亚组梗死面积、入院24 h NIHSS评分高于预后良好亚组(t/P=9.637/<0.001,9.752/<0.001),血清ITIH4、MCL-1水平及出院3个月简易智能状态量表(MMSE)评分、蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分低于预后良好亚组(t/P=26.723/<0.001,11.709/<0.001,13.674/<0.001,10.782/<0.001);AIS患者血清ITIH4、MCL-1与梗死面积、入院24 h NIHSS评分呈负相关(r/P=-0.705/<0.001,-0.685/<0.001;-0.761/<0.001,-0.619/<0.001),与出院3个月MMSE评分、MoCA评分呈正相关(r/P=0.656/<0.001,0.632/<0.001;0.751/<0.001,0.789/<0.001);出院3个月MMSE评分高、出院3个月MoCA评分高是影响AIS患者预后不良的独立保护因素[0.622(0.446~0.868),0.606(0.427~0.861)],血清ITIH4低、MCL-1低、梗死面积大、入院24 h NIHSS评分高是危险因素[OR(95%CI)=1.467(1.150~1.870),1.415(1.094~1.829),1.605(1.168~2.205),1.765(1.233~2.526)];血清ITIH4、MCL-1及两项联合预测AIS预后不良的AUC分别为0.811、0.835、0.923,两项联合预测AIS预后不良的AUC大于单一指标,差异具有统计学意义(Z=4.258、4.119,P均<0.001)。结论AIS患者血清ITIH4、MCL-1表达下调,两者表达水平与病情严重程度有关,两者联合对AIS患者预后具有较高的预测价值。

ITIH4基因沉默对人肝癌细胞HepG2增殖、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默间-α-胰蛋白酶抑制剂重链H4(inter-alpha-trypsin inhibitor heavy chain H4,ITIH4)基因对人肝癌细胞系HepG2增殖、迁移及侵袭的影响。方法:将4个ITIH4基因沉默载体分别转染HepG2细胞,用2 mg/L嘌呤霉素筛选获得稳定表达细胞株。Western印迹评价沉默效率,并选择效率最高的细胞株(si-ITIH4)用于后续实验。转染无意义序列的细胞株(si-Control)作为对照组。分别用细胞计数及CCK-8细胞计数试剂盒评价两组细胞增殖。用Transwell小室评价两组细胞的迁移及侵袭。结果:成功获得ITIH4基因沉默的HepG2细胞株si-ITIH4,与si-Control组相比,si-ITIH4组沉默效率达到86%。与si-Control组相比,si-ITIH4组细胞增殖显著降低、细胞迁移及侵袭均显著减少,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ITIH4基因沉默可显著抑制HepG2的增殖、迁移及侵袭,提示其可能是参与肝细胞癌发生发展的重要基因之一。

复方汉防己对肝星状细胞的增殖和TTR,ITIH1,SERPINF2表达的影响

目的:观察并比较复方汉防己和干扰素γ对肝星状细胞中转甲状腺素蛋白(transthyretin,TTR)、间-α胰蛋白酶抑制因子家族的重链之一(inter-αinhibitor H1,ITIH1)、α-2抗纤溶酶(serpin peptidase inhibitor clade F member 2,SERPINF2)表达的影响。方法:不同浓度复方汉防己和干扰素γ作用于肝星状细胞(hepatic stellate cell-T6,HSC-T6)48 h,流式细胞仪检测复方汉防己和干扰素γ对HSC增殖的影响,RT-PCR法检测TTR,ITIH1,SERPINF2 mRNA水平的表达,用ELISA检测上清液中TTR,ITIH1,SERPINF2分泌,细胞免疫荧光检测HSC-T6细胞TTR,ITIH1,SERPINF2蛋白定位,Western blotting检测细胞中TTR,ITIH1蛋白的表达。结果:复方汉防己和干扰素γ作用于HSC-T6后,与对照组比较,细胞增殖被明显抑制(P<0.05),TTR,ITIH1,SERPINF2蛋白及mRNA表达升高,与复方汉防己的浓度呈一定相关性,复方汉防己2.5 g·L-1组的作用强于干扰素γ组(P<0.05)。结论:复方汉防己可以抑制HSC增殖,上调TTR,ITIH1,SERPINF2蛋白及mRNA的表达,这可能是该药抗肝纤维化的机制之一。