剑叶龙血树树脂中的植物防卫素

１引言剑叶龙血树（Ｄｒａｃａｅｎａｃｏｃｈｉｎｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）系龙舌兰科龙血树属，常绿乔木或灌木，在云南主要分布于勐连、勐腊、思茅、普洱、沧源、景东等县．在广西也有分布．剑叶龙血树现已成为我国传统中药血竭的主要基源植物之一［３］．近几年，对血竭化...

油菜防卫素和草酸氧化酶基因的克隆与诱导表达水平研究

基于拟南芥、甘蓝及油菜等的植物防卫素(PDF)相关基因序列和已克隆的油菜草酸氧化酶(OXO)基因序列设计PCR引物,对甘蓝型油菜基因组DNA进行扩增,获得了序列大小分别为470bp和629bp的PDF1.2和OXO。生物信息学分析表明,该PDF1.2和GenBank中的相关基因同源性在42%～71%,OXO和GenBank中的相关基因同源性在70%以上。在油菜苗期,油菜黑胫病病原接种后基因PDF1.2表达量增加3倍以上,基因OXO也有不同程度的增强表达;诱导剂acibenzolar-s-methyl诱导基因OXO增强表达,但不能诱导PDF1.2增强表达。诱导的系统表达(非处理叶)高于局部表达(处理叶)。这是首次报道油菜PDF1.2克隆和诱导表达结果。

贻贝防卫素的研究进展

防卫素是贻贝等海洋软体动物的重要抗微生物肽 ,迄今发现的贻贝防卫素根据其初级结构、性质和共有的半胱氨酸列阵分成 :贻贝防卫素 ( MDA和 MDB)、地中海贻贝防卫素 ( MGD1和 MGD2 )、Myticins( MyticinA和 Myticin B)、Mytilins( Mytilin A,Mytilin B,Mytilin C,Mytilin D和 Mytilin G1)和 Mytim ycin。阐述它们的化学性质、结构、产生和生物活性等。不同环境中的贻贝不易为重病所折磨 ,能抵御各类微生物的入侵和保卫自身 ,对贻贝防卫素的研究有助于人们理解贻贝及其他海洋软体动物的先天免疫并提高海水养殖的水平。

桑树植物防卫素研究：抗桑黄化型萎缩病品种育2号枝皮的分析

以Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉｆ．ｓｐ．ｍｏｒｉ菌接种诱导的育２号桑枝皮经丙酮提取，抗菌活性追踪溶剂萃取得乙酸乙酯提取物活性部位，进一步反复柱层析和制备薄层层析得到Ｍ１、Ｍ２、Ｍ３和Ｍ４４个植物防卫素成分。其中Ｍ２、Ｍ３；和Ｍ４经波谱解析和文献对照，证明为ＭｏｒａｃｉｎＣ，Ｇ和Ｎ。

魁蚶防卫素分离纯化及其抑菌作用的研究

以魁蚶血浆为原料,经磷酸缓冲液抽提、75%饱和度硫酸铵沉淀、DE52纤维素离子交换层析和Sephadex G-100分子筛层析等步骤,获得了魁蚶防卫素。经SDS-PAGE检测,魁蚶防卫素分子量为76·2kDa。对魁蚶防卫素进行抗菌活性检测发现,魁蚶防卫素对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、变形杆菌和产气杆菌均有较强的抑制作用。

防卫素——先天免疫的一种中枢组分

从先天免疫角度 ,简述防卫素研究的发展历程 ,阐述防卫素的性质、分类、合成、作用和应用前景 .特别关注防卫素在先天免疫中的功能 ,并强调海水养殖对象等海洋无脊椎动物防卫素的研究状况及与先天免疫的关系 .指出海洋生物作为包括防卫素在内的抗生肽资源库的巨大开发利用价值和研制抗菌新药的诱人潜力 .

桑树防卫素体外抗菌作用的初步研究

人工诱导产生桑防卫素 ,经过有机溶剂的提取、进一步柱层析、制备性 TL C及生物显影检查 ,得到 San- 1、M1 、M2 、M3、M4等 5个组分 ,经化学研究已确证 San- 1是多酚类化合物 ,M2 、M3、M4分别为 MoracinG、C、N。采用微量液体稀释法测定最低抑菌浓度 (MIC) ,结果显示 :(1) San- 1、M2 、M3、M4等 4个样品对革兰氏阳性菌都有抑制作用 ,其中 Moracin N(M4)的抗菌作用最强 ,其 MICs为 3.12 5～ 6 .2 5 mg/ L;(2 )对解脲脲原体 (Uu)、人型枝原体 (Mh)、蜜蜂螺原体 (CH- 1、CR- 1)有较好的抑制作用 ,其中 Uu的 MICs为 12 .5～5 0 mg/ L,Mh的 MICs为 2 5～ 10 0 mg/ L,CH- 1、CR- 1的 MIC为 2 5～ 2 0 0 mg/ L,其中 Moracin C(M3)的抗枝原体作用最强。

桑树植物防卫素的研究初报

本文用８个桑树品种为材料，接种桑芽枯病菌诱导桑树产生植物防卫素（ｐｈｙｔｏａｌｅｘｉｎ），将抽提液进行抗菌活性鉴定。结果表明，不同桑品种植物防卫素的抗菌活性差异明显。薄板层析（ＴＬＣ）分析表明其不同Ｒｆ值区带的抗菌活性差异明显。田间接种Ｆ．ｓｏｌａｎｉ后，发现不同桑品种抗桑芽枯病菌的能力与不同桑品种枝木的桑植物防卫素的抗菌活性大小完全一致。

九香虫防卫素基因CcDef1的克隆及特征分析

九香虫 Coridius chinensis是一种重要的资源昆虫,防卫素是抗菌肽家族中一个重要的成员。本文从九香虫中克隆了一种防卫素基因 CcDef1 ,其cDNA的长度为395 bp,包含一个300 bp的开放阅读框,编码99个氨基酸。CcDef1的前体由信号肽、前体肽和成熟肽组成,成熟CcDef1形成包含1个α-螺旋、2个β-折叠片和3个二硫键的三维结构。CcDef1蛋白的相对分子量为4589.37Da,总净电荷量为+1,理论等电点为7.84。同源性和聚类分析显示,CcDef1与红尾碧蝽 Palomena prasina 防卫素的亲缘关系最近。该研究为进一步明确 CcDef1 基因的功能及开发新型抗菌药物奠定基础。

九香虫防卫素CcDef3基因的克隆与表达分析

【目的】探明九香虫防卫素基因CcDef 3的生物信息学特征及其在九香虫体内的表达模式,揭示CcDef 3基因的调控规律,为进一步研究该基因的功能及开发新型药物奠定基础。【方法】采用反转录PCR克隆CcDef 3基因并使用生物信息学软件和方法对其进行序列分析,采用实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RT-qPCR)检测其时空表达模式及细菌诱导后的表达模式。【结果】九香虫防卫素基因CcDef 3的cDNA长度为522 bp,包含一个长351 bp的开放阅读框,编码116个氨基酸残基;CcDef3多肽由1个信号肽、2个前肽及1个成熟肽组成,成熟肽形成1个α-螺旋,2个β-折叠片和3个二硫键的三维分子结构;九香虫防卫素CcDef 3与红尾碧蝽防卫素的亲缘关系最近;CcDef 3在九香虫不同发育时期均表达,其中在5龄若虫中表达水平最高,在所检测的组织中皆表达,在脂肪体中表达水平最高;用细菌诱导九香虫成虫后CcDef 3的表达水平上调,在12 h时达到峰值,而后下调至48 h时趋向于诱导前表达水平。【结论】该研究克隆了九香虫防卫素CcDef 3基因,并进行了特征分析,解析其表达模式。CcDef 3基因的表达受到自身免疫的调控,还可以被诱导而参与免疫应答反应。

抗真菌蛋白研究进展

对几种抗真菌蛋白 :病程相关蛋白、防卫素、核糖体失活蛋白、几丁质连接蛋白、蛋白酶抑制剂等的类型、特征、抗菌菌机理进行了阐述 ,着重讨论了病程相关蛋白和核糖体失活蛋白的最新研究进展 ,并且讨论了抗真菌蛋白在植物真菌病害综合防治中的应用前景。

不结球白菜BcDF1.2基因克隆与诱导表达

利用RACE技术,获得了不结球白菜防卫素基因全长序列,命名为BcDF1.2(DDBJ登录号AB302891).序列分析发现,BcDF1.2全长532bp包含1个长度为96bp的内含子区域,该基因编码79个氨基酸残基组成的蛋白质,与其他植物的防卫素基因和抗真菌蛋白基因有较高的同源性.系统进化树分析表明,该基因在不同植物间具有高度保守性.基因组DNA杂交表明BcDF1.2属于较小的多基因家族.水杨酸和霜霉病原菌诱导后,该mRNA不仅在诱导的叶片中转录表达增加,而且在未诱导的系统叶片中表达增加.BcDF1.2在不结球白菜叶片中的转录表达特点表明可能参与对霜霉病的抗性反应.

动物和植物体内的抗菌肽

抗菌肽是一类对细菌、真菌等微生物有抑制或杀灭作用的小分子多肽，文章介绍了植物和动物抗菌肽的主要类型、结构和功能。

GST-MtDef4融合蛋白的原核表达及体外抑菌活性的检测

为研究苜蓿(Medicago truncatula)防卫素基因MtDef4的抑菌功能,以含有该基因片段的质粒pAND-MtDef4为模板,扩增出相应的目的基因,测序正确后将MtDef4基因片段连接到带有GST标签的原核表达载体pGEX6P-1中,转化大肠杆菌TransB(DE3),经IPTG诱导,Glutathione Sepharose 4B亲和纯化,通过SDS-PAGE电泳及Western blot确定融合蛋白的表达。体外抑菌试验表明,MtDef4能够抑制病原真菌Corynespora cassiicola而非Collectotrichum gloeosporioides的生长。本研究结果可为进一步培育转基因橡胶抗病品种奠定基础。

辣椒、菜豆植物保卫素的活性

植物保卫素是由植物与病原物相互作用,或植物受伤,或生理刺激后,由植物产生的抗生物质,是植物抗病的因素之一。已知有不少植物可产生植保素。例如甜椒二醇、菜豆素等。 试验用其非致病菌—棉花枯萎病菌,及破伤刺激等因素。以液滴扩散物法。

西瓜ClPDF2.1蛋白的原核表达及其对香蕉枯萎病菌的抑制活性测定

尖孢镰刀菌古巴专化型侵染香蕉引起的香蕉枯萎病严重危害中国香蕉产业。植物防卫素是一类小的富含半胱氨酸的抗真菌蛋白。本研究旨在了解西瓜(Citrullus lanatus)防卫素蛋白Cl PDF2.1对香蕉枯萎病菌的抑制活性。提取西瓜RNA后反转录为c DNA,以西瓜c DNA为模板,克隆Cl PDF2.1基因,将测序正确的Cl PDF2.1连接到载体p GEX-6P-1,随后转化Trans BL21(DE3)p Lys S,IPTG诱导GST-Cl PDF2.1融合蛋白表达16 h后,经SDS-PAGE电泳及Western blot鉴定GST-Cl PDF2.1融合蛋白的表达,进行GST-Cl PDF2.1融合蛋白体外抑制香蕉枯萎病菌生长的功能初探。本研究为进一步培育转基因香蕉抗病品种奠定基础。

人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白hBD2-haFGF1的构建、表达及生物信息学分析

目的为开发新型抗痤疮药物,构建具有杀菌和促进愈合的人防御素2和酸性成纤维因子1融合蛋白。方法以人肝癌细胞HepG2 cDNA为模板,分别扩增hBD-2基因和haFGF-1基因。采用SOE-PCR方法构建hBD2-haFGF1融合基因。构建hBD2-haFGF1/pET21b原核表达载体,并转化入E.coli BL(21)进行诱导表达。通过生物信息学方法对融合蛋白的理化性质进行预测和分析。结果 RT-PCR分别获得123 bp的hBD-2基因和420 bp的haFGF-1基因,SOE-PCR获得了588 bp的hBD2-haFGF1融合基因,成功构建原核表达载体hBD2-haFGF1/pET21b,经过IPTG诱导,hBD2-haFGF1融合蛋白可在E.coli BL(21)中有效表达,相对分子量为23 800。生物信息学显示hBD2-haFGF1蛋白适合在大肠杆菌中表达,是一个不稳定的亲水性蛋白,具有较好的热稳定性。hBD2-haFGF1融合蛋白主要由延伸链、β转角和随机卷曲组成,结构中保留了β防御素保守结构域和FGF超家族保守结构域。结论构建了hBD2-haFGF1融合基因,并在体外诱导表达了hBD2-haFGF1融合蛋白,通过生物信息学分析对融合蛋白的理化性质进行了预测和分析,上述研究为进一步的纯化和活性分析奠定了研究基础。

药物运载体对真菌的杀菌剂敏感性、多药耐受性和致病性的影响(上)

1．引言 真菌在进化过程中逐渐演化出对各种有毒化合物的不敏感性或耐受性，这些有毒化合物可能是天然毒素如微生物产生的抗生素，或者是植物病原菌特异性的植物防卫素。此外，植物和哺乳动物病害的化学防治还使得真菌不断经受各种人工合成性抗菌化合物（医药品、杀菌剂和抗真菌药物）的选择作用，同时真菌还可能需要适应自己产生的内源性有毒物质如抗生素和真菌毒素，使自身在生境中处于竞争优势。