基于线粒体凋亡通路探讨防己诺林碱对前列腺癌PC3细胞的生物学行为的影响

目的 基于线粒体凋亡通路探究防己诺林碱(fangchinoline, FAN)对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响。方法 将前列腺癌PC3细胞按照FAN处理浓度分为4组,分别为FAN 0μmol/L组、FAN 5μmol/L组、FAN 10μmol/L组和FAN 20μmol/L组,各组依次采用FAN 0μmol/L (DMSO替代)、5μmol/L、10μmol/L和20μmol/L进行处理,孵育48 h后进行实验。CCK-8法检测PC3细胞增殖,平板克隆法检测PC3细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测PC3细胞凋亡,Transwell实验检测PC3细胞侵袭,划痕实验检测PC3细胞迁移,Western blot检测PC3细胞自噬相关蛋白和线粒体凋亡通路蛋白。结果 与FAN 0μmol/L组相比,FAN 5μmol/L组、FAN 10μmol/L组和FAN 20μmol/L组的PC3细胞增殖能力、克隆形成能力、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.001),凋亡率明显升高(P<0.001);与FAN 5μmol/L组和FAN 10μmol/L组相比,FAN 20μmol/L组的PC3细胞增殖能力、克隆形成能力、侵袭和迁移能力明显降低(P<0.001);与FAN 0μmol/L组相比,FAN 5μmol/L组、FAN 10μmol/L组和FAN 20μmol/L组的PC3细胞中P62和Bcl-2蛋白表达明显降低(P<0.001),LC3B、Bax和Caspase-3蛋白表达明显升高(P<0.001)。结论 FAN可能通过线粒体凋亡通路抑制细胞增殖、侵袭和迁移,促进其自噬和凋亡,并呈现剂量依赖性。

HPLC法测定痹欣片中粉防己碱和防己诺林碱的含量技术

建立HPLC法测定痹欣片中粉防己碱和防己诺林碱含量的的含量技术,以期为提升痹欣片质量控制标准提供参考。方法 色谱柱 安捷伦ZORBAX StableBond Aq柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:甲醇-0.15%三乙胺(75:22);检测波长:228nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃。结果 2种成分含量丰富,分离度、对称性较好,在相应范围内线性关系良好;粉防己碱和防己诺林碱的平均加样回收率分别为97.54%和96.48%,RSD分别为2.0%和0.9%,(n=6)。结论 该方法经方法学验证,可为进一步完善痹欣片质量控制标准提供参考。

防己诺林碱与牛血清白蛋白相互作用的研究

在不同温度下,用荧光猝灭光谱、同步荧光光谱和紫外-可见吸收光谱,研究了防己诺林碱与BSA相互作用的光谱学行为。防己诺林碱对BSA有较强的荧光猝灭作用。根据不同温度下防己诺林碱对BSA的荧光猝灭作用,利用Stern-Volmer方程处理实验数据,表明防己诺林碱对BSA的荧光猝灭作用属于静态猝灭。根据F rster非辐射能量转移理论计算出了防己诺林碱与BSA间的结合距离R(27℃2.51 nm;37℃2.72 nm;47℃2.89 nm)、结合常数KA(27℃1.05×105L.mol-1;37℃3.31×105L.mol-1;47℃7.24×105L.mol-1)及对应温度下的热力学参数。热力学数据表明二者主要靠疏水作用力结合,同时用同步荧光光谱探讨了防己诺林碱对BSA构象的影响。

薄层扫描法测定痛立克注射液中延胡索乙素、粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的 :采用薄层扫描法测定痛立克注射液中延胡索乙素、粉防己碱和防己诺林碱的含量。方法 :采用日本岛津CS - 930 1型双波长飞点扫描仪 ,检测波长为 36 0nm。结果 :延胡索乙素点样量在 0 4～ 2 2 μg ,粉防己碱在 0 5～ 2 5 μg ,防己诺林碱在 0 3～ 1 5 μg的范围内与峰面积呈良好的线性关系 ,r分别为 0 997,0 998,0 996 ,回收率分别为 96 6 % ,96 6 % ,97 7%。结论 :本方法操作简便 ,精密度好 ,结果准确可靠。

HPLC测定中肺合剂中防己诺林碱和粉防己碱的含量

目的测定中肺合剂中防己诺林碱、粉防己碱的含量。方法样品经预处理后采用RP-HPLC同时测定它们的含量。色谱条件：色谱柱为Agilent Zorbax Elipse XDB—C18；流动相为0．06％三乙胺-乙腈溶液（44：56）；流速为1．0mL·min^-1；检测波长设在240nm；柱温30℃。结果防已诺林碱在0．4375—17．5mg·L^-1与粉防己碱在0．875—35．0mg·L^-1内，峰面积与其浓度具有良好的线性关系。平均加样回收率分别为89．30％～94．35％（防己诺林碱），90．08％-95．74％（粉防己碱）。结论本方法简便、快速、准确，可同时测定中肺合剂中防己诺林碱和粉防己碱的含量。

非水毛细管电泳法测定防己及其制剂中防己诺林碱和防己碱的含量

目的：建立简单、快速、灵敏的能同时分离测定防己及其制剂中防己诺林碱和防己碱的非水毛细管电泳方法。方法：采用非水毛细管电泳法，缓冲体系50mmol·L^-1醋酸铵-1．0％醋酸-20％乙腈的甲醇溶液，熔融石英毛细管（75μm×50．0cm），分离电压20kV，检测波长214nm，阳极进样。结果：防己诺林碱和防己碱在1．00～500mg·L^-1与峰面积线性关系良好。迁移时间的日内相对标准偏差分别为0．09％和0．59％，日间相对标准偏差分别为0．63％和1．9％；峰面积的日内相对标准偏差分别为0．45％和4．9％，日间相对标准偏差分别为2．3％和5．6％。防己中防己诺林碱和防己碱平均回收率分别为102％和105％，风痛安胶囊中防己诺林碱和防己碱平均回收率分别为94．6％和98．7％。结论：该方法简单、快速、准确、重复性好，可用于防己及其制剂的质量控制。

苦参碱、水苏碱和防己诺林碱抗细菌内毒素的作用研究

拟探讨3种中药生物碱苦参碱、水苏碱和防己诺林碱对细菌内毒素(LPS)的治疗作用。ICR小鼠腹腔注射6 mg/kg的内毒素3 h后,根据分组情况分别腹腔注射高(10 mg/kg)、中(5 mg/kg)、低(1 mg/kg)3个剂量的苦参碱、水苏碱和防己诺林碱。同时设立LPS对照组、空白对照组和药物对照组。记录LPS攻毒后48 h内各组小鼠临床表现,测定体温、体重及器官指数,检测血清中LPS和炎症因子的含量。结果显示,苦参碱、水苏碱和防己诺林碱能显著改善体温升高、体重减轻、血清中LPS和炎症因子含量升高、内脏肿大等病变。表明以上3种中药生物碱具有明显的抗细菌内毒素作用,为其在兽医临床治疗细菌内毒素疾病提供理论依据。

防己诺林碱对结肠癌细胞恶性生物学行为及HIF-1α/VEGF/Akt通路的相关性研究

目的:研究防己诺林碱(FAN)对结肠癌的作用以及与缺氧诱导因子1α(HIF-1α)/血管内皮生长因子(VEGF)/蛋白激酶B(Akt)通路的相关性。方法:用5、10、20μg/ml的防己诺林碱分别处理结肠癌细胞HT-29 48 h,克隆形成实验检测细胞生长,蛋白印迹检测增殖标记蛋白Ki67、增殖细胞核抗原(PCNA)、上皮细胞钙黏蛋白(E-cadherin)、神经细胞钙黏蛋白(N-cadherin)、HIF-1α、VEGF和Akt的表达,Transwell检测细胞侵袭情况,显微镜观察上皮向间质的形态转变;采用皮下注射结肠癌细胞HT-29构建移植瘤模型,腹腔分别注射5、10、20μg/ml防己诺林碱,检测结肠癌移植瘤体积,免疫组化检测Ki67和VEGF,蛋白印迹检测HIF-1α、VEGF、Akt的表达,HE染色观察肝肾损伤。结果:与Blank cells相比较,FAN组的结肠癌细胞HT-29克隆形成率显著降低,Ki67和PCNA的表达量显著下调,侵袭细胞数目显著减少,VEGF和N-cadherin表达量显著下调,E-cadherin表达量显著上调,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调;与Blank组相比,FAN组的移植瘤体积明显小,Ki67和VEGF阳性比率显著降低,HIF-1α、VEGF和Akt表达量显著下调,肝肾无损伤。结论:防己诺林碱都可以抑制结肠癌细胞HT-29的生长和增殖、侵袭能力、上皮间质转化,并且抑制结肠癌细胞HIF-1α/VEGF/Akt信号通路,从而抑制结肠癌的发生和发展。

防己诺林碱抑制黑色素瘤的增殖转移

目的观察防己诺林碱对黑色素瘤细胞生长转移的影响。方法通过MTT实验,观察不同浓度防己诺林碱对A375细胞增殖的影响;利用Transwell实验,检测不同浓度防己诺林碱对A375细胞转移功能的影响。通过Western blot和RT-PCR,检测防己诺林碱对A375生长转移相关蛋白的影响。结果防己诺林碱可以抑制黑色素瘤细胞A375的增殖转移。10、20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞后,对其增殖的抑制率分别为43.81%±1.53%、48.64%±4.65%、50.69%±4.99%。20、40μM/L防己诺林碱处理A375细胞作用24 h后,对其转移的抑制率分别为14.95%±4.31%、33.03%±5.46%。防己诺林碱显著抑制细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、CDK4、CDK6、基质金属蛋白酶-2(MMP2)的表达(P<0.05)。结论防己诺林碱能显著抑制A375细胞的增殖转移,可作为治疗黑色素瘤的潜在化疗药物进行深入研究。

RP-HPLC法同时测定迪可颗粒中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的:建立迪可颗粒中粉防己碱和防己诺林碱含量的测定方法。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为 Kromasil C_(18)(5μm,250mm×4.6mm)分析柱;流动相:甲醇-乙腈-0.003mol·L^(-1)磷酸二氢钾-二乙胺(55:25:20:0.06);流速1.0mL·min^(-1);检测波长为230nm。结果:精密度和稳定性均良好;粉防己碱浓度在1.392～11.14μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为98.4%;防己诺林碱浓度在0.575～6.90μg·mL^(-1)范围内与峰面积呈良好的线性关系,r=0.9998,平均回收率为97.9%。结论:本方法简便、专属,重复性好,可用于迪可颗粒中粉防己碱和防己诺林碱的含量测定。

RP-HPLC测定轻身减肥片中粉防己碱与防己诺林碱的含量

目的:运用反相高效液相色谱法测定轻身减肥片(大黄、防己等)中粉防己碱及防己诺林碱的含量。方法:采用Zor baxC18柱,甲醇 0. 3 二乙胺溶液(75∶25)为流动相,检测波长为 242nm。结果:粉防己碱的回收率为 103. 65 、RSD为 1. 59 (n=6);防己诺林碱的回收率为 97. 11 、RSD为 1. 91 (n=6)。结论:本法简便、快速、重现性好,可作为产品的定量分析方法。

梯度洗脱联合波长切换HPLC法同时测定豨莶风湿丸中的豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱

目的 建立梯度洗脱联合波长切换HPLC法同时测定豨莶风湿丸中豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱。方法 采用Kromasil C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,以流动相A：乙腈-甲醇（2∶1）、流动相B：0.05%冰醋酸溶液进行梯度洗脱;流速为1.0mL/min;进样量为20μL;豨莶苷、奇壬醇和豨莶精醇检测波长为215nm,防己诺林碱和粉防己碱检测波长为280nm。结果 豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱在给定浓度范围内的线性范围分别为6.45-129.00μg/mL（r=0.999 5）、5.61-112.20μg/mL（r=0.999 9）、4.25-85.00μg/mL（r=0.999 3）、9.19-183.80μg/mL（r=0.999 8）和11.05-221.00μg/mL（r=0.999 7）,线性关系良好;平均加样回收率和相对标准偏差（RSD）值分别为98.73%（1.43%）、97.63%（1.28%）、99.44%（1.29%）、98.33%（1.38%）、97.36%（1.37%）。结论 建立的梯度洗脱联合波长切换HPLC法能同时测定豨莶风湿丸中豨莶苷、奇壬醇、豨莶精醇、防己诺林碱和粉防己碱含量,方法简便、准确、重现性好,为豨莶风湿丸质量控制提供了可靠方法。

RP-HPLC测定舒肝饮丸中粉防己碱与防己诺林碱的含量

舒肝饮丸为我院自制制剂，由防己等9味中药组成，临床用于治疗慢性肝炎、肝硬化等疗效确切。防己为该制剂主要药物之一，含有粉防己碱（tetrandrine）和防己诺林碱（fangchinoline）等有效成分，高效液相色谱法测定防己及其他制剂中粉防己碱和防己诺林碱含量已有报道田。笔者用甲醇超声提取，采用高效液相色谱法测定舒肝饮丸中粉防己碱和防己诺林碱的含量，为该制剂的质量控制提供简便、快速、准确的测定方法。

防己诺林碱对肺癌H1299和A549细胞的作用及其分子机制研究

目的探究防己诺林碱在肺癌中的作用及其分子机制。方法MTS法检测经10、15、20、30、40和60μM/L防己诺林碱处理的肺癌H1299和A549细胞的增殖情况,通过Caspase3、Caspase8和Caspase9活性检测试剂盒和TUNEL试剂盒检测细胞凋亡情况。Western blot检测MAPK信号通路(p-Akt、PI3K、mTOR和Akt蛋白)、增殖和转移(MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1和P21蛋白)、周期和凋亡(Cyclin D2、Bcl2、MCL-1、Bax和p53蛋白)相关蛋白的表达情况,通过Real-time PCR检测PI3k、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2、MCL-1、Bax、Bcl2和TP53基因表达情况。结果防己诺林碱会抑制肺癌H1299和A549细胞的增殖,诱导细胞凋亡,增加Caspase3、Caspase8和Caspase9酶活性。经防己诺林碱处理后,PI3K、p-Akt、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2蛋白表达降低,P21、MCL-1、Bax和p53蛋白表达升高,并且表现为剂量依赖性,但对Akt蛋白表达无影响;PI3K、mTOR、MMP-2、MMP-9、PCNA、Cyclin D1、Cyclin D2和Bcl2基因表达降低,TP53、MCL-1和Bax基因表达增加。结论防己诺林碱通过调控MAPK信号通路、增殖和转移、周期和凋亡相关蛋白和基因的表达,从而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡。

HPLC梯度洗脱法同时测定活血镇痛膏中防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱

目的:建立同时测定活血镇痛膏中的防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱含量的HPLC梯度洗脱法。方法:采用Dikma-C18色谱柱(200 mm×4.6 mm,5μm),以甲醇-乙腈(3∶1)(A)与0.06%二乙胺水溶液(B)为流动相,进行梯度洗脱,检测波长分别为280 nm(防己诺林碱和粉防己碱)、235 nm(新乌头碱、乌头碱和次乌头碱),流速1.0 ml·min^(-1),柱温30℃,进样量为10μl。结果:防己诺林碱、粉防己碱、新乌头碱、乌头碱和次乌头碱5个成分的质量浓度分别在7.490~149.800、14.610~292.200、4.150~83.000、5.250~105.000、5.140~102.800μg·ml^(-1)范围内呈良好线性关系,r分别为0.999 9,0.999 8,0.999 2,0.999 6,0.999 9;平均加样回收率(RSD)分别为99.87%(0.49%),97.79%(1.11%),96.97%(1.75%),98.60%(1.50%),97.94%(0.98%)(n=6)。结论:本文建立的HPLC梯度洗脱法能同时测定活血镇痛膏中的5个成分,该方法简便、稳定、可靠,可作为活血镇痛膏全面可靠的质量控制方法。

高效液相色谱法同时测定复方防己颗粒中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的:研究一种能同时准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的方法。方法:采用高效液相色谱法测定粉防己碱和防己诺林碱的含量;色谱柱ZorbaxsbC18柱;流动相为甲醇-乙腈-0.002moL·L-1磷酸二氢钾-乙二胺(55∶25∶20∶0.06),流速1.0mL·min-1,柱温为室温,检测波长为230nm,进样量为20μL。结果:本法可以准确测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱,精密度、回收率、稳定性均符合要求。结论:该方法能同时测定复方防己颗粒中的粉防己碱和防己诺林碱的含量,方法简单、快速、灵敏度高,可用于复方防己颗粒的质量控制。

高效液相色谱法测定十味风消胶囊中粉防己碱和防己诺林碱的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)测定十味风消胶囊中粉防己碱和防己诺林碱的含量。方法:色谱柱为SHIMADZUVP-ODS色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.2%二乙胺溶液(70:30),流速为1.0 ml/min,检测波长为281 nm,柱温为30℃;自动进样器进样,进样量10μl。结果:粉防己碱在0.051～0.817μg范围内线性关系良好(r=0.999 8,n=6),平均加样回收率为98.68%,RSD为0.77%(n=6);防己诺林碱在0.035～0.557μg范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=6),平均加样回收率为98.94%,RSD为1.03%(n=6)。结论:本法操作简便、结果准确稳定、专属性强,可用于十味风消胶囊的质量控制。

防己诺林碱诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的:探讨防己诺林碱诱导乳腺癌细胞凋亡的作用,为其临床应用提供理论依据。方法:体外细胞培养人乳腺癌细胞株MDA-MB-231,倒置显微镜观察细胞的形态变化,刃天青(Alamarblue)方法检测防己诺林碱对MDA-MB-231抑制的IC50,流式检测防己诺林碱对MDA-MB-231凋亡的影响。结果:防己诺林碱对乳腺癌细胞MDA-MB-231的活力有影响,IC50为9.71μmol/L;同时防己诺林碱也可以诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡和死亡,随浓度升高,作用增强。结论:防己诺林碱可以显著诱导乳腺癌细胞发生凋亡,有一定的抗肿瘤作用价值。

血浆中粉防己碱和防己诺林碱提取方法的比较研究

利用液相微萃取(LPME)方法对人血浆中粉防己碱和防己诺林碱进行提取,重点考察了液相微萃取的最优条件,并从提取效率、净化能力、提取成本和绿色环保等方面分别与液-液萃取、固相萃取和蛋白质沉淀的方法进行了比较.