血清淀粉样蛋白A、β-防御素-3水平检测在四肢开放性骨折术后切口感染中价值

目的探究血清淀粉样蛋白A(SAA)、β-防御素-3(HBd-3)水平在四肢开放性骨折术后切口感染中的监测价值。方法选取2019年2月—2020年10月在澄迈县人民医院行内固定手术治疗的四肢开放性骨折患者247例为研究对象。统计术后28 d术后切口感染情况,并依据是否发生术后感染分为感染组和未感染组。对比感染组和未感染组临床资料。Logistic多因素回归分析影响术后切口感染的因素。分析SAA、HBd-3及两者联合对术后切口感染发生的预测效能。结果四肢开放性骨折患者术后感染率为21.05%。感染组骨折至入院时间、合并基础疾病占比、Gustilo分型Ⅲ型占比、择期手术占比、未预防使用抗生素占比及SAA水平均高于未感染组(P<0.05),HBd-3水平则低于未感染组(P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,Gustily分型Ⅲ型、未预防使用抗生素、SAA及HBd-3均为四肢开放性骨折患者发生术后感染的影响因素(OR=3.114、3.184、4.204、4.0.35)。ROC分析显示,SAA、HBd-3两者联合预测术后切口感染发生的AUC为0.845,高于SAA、HBd-3单独预测的AUC(P<0.05)。结论SAA、HBd-3两者联合对四肢开放性骨折术后切口感染的预测效能较高,可作为评估该类患者术后切口是否发生感染的重要参考指标。

鸡β-防御素-3的克隆与诱导表达

利用反转录PCR(RT-PCR)与套式PCR技术检测Gal-3基因在鸡体不同组织的分布表达。实验结果表明Gal-3基因在法氏囊、皮肤、舌头、肺脏、骨髓、气管等组织中广泛分布,在肾脏、脾脏、肝脏、胰脏等组织中没有检测到。对从鸡骨髓中扩增出来的β-防御素(Gal-3)cDNA进行克隆测序表明扩增出的cDNA碱基数为297bp,与GenBank中的Gal-3cDNA序列完全相同。核苷酸序列比较表明在同源性上,Gal-3与Gal-1、Gal-2基因核苷酸相似性分别为75%、50%,同火鸡GPV-1基因同源性最高,达91%。体外诱导表达实验表明在气管上皮细胞中LPS与灭活卡介苗可以诱导Gal-3的表达;Gal-3在法氏囊细胞、肺上皮细胞的表达为持续性表达。

鸡β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达及其生物活性测定

采用RT-PCR方法从鸡外周血淋巴细胞中扩增鸡β-防御素-3成熟肽基因,将其克隆到酵母表达载体pPICZα-A的分泌信号肽基因下游。线性化后的重组质粒电击转化毕赤酵母宿主菌GS115,经抗生素Zeocin筛选和PCR鉴定后,得到重组酵母菌。阳性转化菌经甲醇诱导后,SDS-PAGE和western blot鉴定结果表明,在毕赤酵母中得到分泌性表达产物,分子量约为8.9ku,活性检测表明其具有显著的抑菌活性。

人β-防御素-3对小鼠牙周炎进展的保护作用

目的:探索人β-防御素-3在小鼠牙周炎进展中的保护作用。方法:用丝线结扎法建立小鼠牙周炎模型。实验组小鼠腹腔注射人β-防御素-3(100μg/kg),另选结扎过小鼠和未结扎小鼠各1组,腹腔注射磷酸盐缓冲液为对照。8周后取上颌骨,Micro CT、HE染色、TRAP染色及免疫组化染色,评估人β-防御素-3对牙周炎进展的作用。结果:人β-防御素-3能减少牙槽骨吸收及骨内破骨细胞数量;减轻牙龈上皮棘层增厚、上皮钉突增生、炎症细胞浸润、胶原纤维变性断裂等病理变化,降低牙周组织中IL-6、MCP-1和TNF-α的表达强度。结论:人β-防御素-3能够减轻牙周组织炎症,减少牙周组织破坏,从而减缓牙周炎进展。

鸡β-防御素-3在毕赤酵母中的分泌表达

对鸡β-防御素-3(Gal-3)在毕赤酵母中的分泌表达进行了研究。以重组质粒Gal-3-T为模板,利用PCR技术扩增出Gal-3基因成熟肽片段,将该片段插入到酵母表达载体pPICZα-C,构建分泌型重组表达载体pPICZα-C-Gal-3,电转入表达宿主菌X-33毕赤酵母,Zeocin抗性筛选重组菌株;挑取阳性菌株经甲醇诱导表达,Tricine-SDS-PAGE电泳发现在约4.5 kDa位置出现预期条带;对所表达的Gal-3进行抗菌活性检测,发现其具有抗大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等细菌的活性。

人β-防御素-3基因的克隆和序列测定

目的 克隆人β-防御素 - 3的基因 .方法 提取人皮肤组织的总 RNA,反转录为 c DNA作为模板 ,采用 PCR的方法克隆人β-防御素 - 3基因 . PCR产物连接入 p GEM- T- EASY载体 ,转化 DH- 5α感受态细胞 ,蓝白筛选 ,对酶切及 PCR鉴定含有目的片段的克隆进行测序 .结果 获得预期大小的 PCR产物 ,经序列鉴定证实为人β-防御素 - 3基因 .结论 获得了人β-防御素 -

血浆β-防御素-3联合IL-6、PCT水平对下肢骨折患者手术部位感染的预测价值

目的研究血浆β-防御素-3联合白细胞介素-6(IL-6)、降钙素原(PCT)水平对下肢骨折患者手术部位感染的预测价值。方法选择2016年9月到2018年9月到医院就诊的下肢骨折患者155例,根据术后是否发生感染分为感染组(n=25)及未感染组(n=130),所有患者均在术后1d检测血浆β-防御素-3、IL-6、PCT水平。检测两组患者血浆β-防御素-3、PCT、IL-6水平,统计血浆β-防御素-3、PCT、IL-6水平对术后感染患者的预测价值。结果感染组患者血浆β-防御素-3水平低于非感染组,PCT、IL-6水平高于非感染组(P<0.05);血浆β-防御素-3、PCT、IL-6检测术后感染患者的AUC值分别为0.656、0.704、0.708,联合检测AUC值为0.807。结论血浆β-防御素-3联合IL-6、PCT对下肢骨折手术后感染患者有一定预测价值。

人β防御素-3在人工关节感染患者中的表达及其意义的实验研究

目的观察人β防御素-3(human beta-defensin-3,HBD-3)在人工关节感染患者松质骨中的表达,探讨其意义。方法按临床诊断收集术中切取的假体周围的松质骨和正常髂骨,并分为以下4组:人工关节感染组13例,假体无菌性松动组8例,占位器治疗后组9例,正常组7例。采用HE染色观察炎性细胞浸润,免疫荧光染色观察阳性细胞数目及强度并采用Image-pro plus(IPP)7.0C软件测量平均光密度值。收集术前外周血白细胞计数、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C-反应蛋白(C-reactive pro-tein,CRP)结果。分析比较各组间差别。结果 HE染色4组无明显差别,免疫荧光染色以人工关节感染组阳性细胞最多、阳性程度及平均光密度值最高,依次为假体无细菌性松动组,占位器后组及正常组。术前外周血白细胞计数、ESR和CRP感染组最高,其余3组无明显差别。结论 HBD3在人工关节感染及假体无菌性松动患者的假体周围组织和松质骨中存在高表达,且在感染与松动间存在差异。

骨折手术部位感染患者血浆β-防御素-3的检测及其临床评价

目的:揭示骨折手术部位感染患者血浆β-防御素-3浓度的变化,探讨其与骨折手术部位感染危险性的相关性。方法:收集骨折手术部位感染患者18例和非感染患者103例。ELISA检测血浆β-防御素-3浓度。统计分析其与骨折手术部位感染危险性的相关性。结果:协方差分析显示,骨折手术部位感染患者血浆β-防御素-3浓度(64.1±26.3)pg/ml显著地低于非感染患者(134.6±50.2)pg/ml(F=7.254,P<0.001)。Logistic回归分析显示,血浆β-防御素-3浓度(OR=0.681,95%CI=0.391～0.864,P<0.05)是骨折手术部位感染的独立危险因素。ROC曲线分析显示,血浆β-防御素-3浓度预测骨折手术部位感染有显著预测价值(曲线下面积=0.842,95%CI=0.795～0.899,P<0.001),且判定血浆β-防御素-3浓度<95.8 pg/ml,对预测骨折手术部位感染有77.8%的灵敏度和82.5%的特异度。结论:骨折手术部位感染患者血浆β-防御素-3水平降低,可能是骨折手术部位感染的危险因素。

重组人β防御素-3浸泡消毒对赝复硅橡胶颜色稳定性的影响

目的研究用重组人β防御素-3(r HBD3)溶液浸泡消毒赝复硅橡胶材料2个月后,是否会对硅橡胶材料的色差产生影响。方法将制作好的内、外着色组的赝复硅橡胶试件浸泡在25μg/ml的r HBD3溶液中2个月后,在D65光源下利用SCT-DI 2000 for windows软件将测试后的数据保存为CIELAB颜色系统。结果各组试件与自身作对照的△E值均<2。在分光光度计的不同波长下,硅橡胶试件浸泡前后的颜色变化相近。结论采用r HBD3浸泡消毒赝复体的方式在一定时间内不会引起赝复体色泽的明显改变。

急性结膜炎患者治疗前后血清hs-CRP、Il-6和β-防御素-3检测的临床意义

目的探讨急性结膜炎患者治疗前后血清hs-CRP、Il-6和β-防御素-3水平的变化及临床意义。方法应用免疫比浊法,放射免疫分析法和酶联法对40例急性结膜炎患者进行了血清hs-CRP、Il-6和β-防御素-3的水平检测,并与35名正常健康人作比较。结果急性结膜炎患者在治疗前血清hs-CRP、Il-6水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),而β-防御素-3水平显著地低于正常人组(P<0.01),经中西医结合治疗2周后则与正常人比较无显著性差异(P>0.05)。结论检测急性结膜炎患血清hs-CRP、Il-6和β-防御素-3水平的变化对临床观察预后均有重要的临床价值。

慢性牙周炎患者治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3检测的临床意义

目的:探讨了慢性牙周炎患者治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3检测的临床意义。方法:应用放射免疫分析和酶联法对33例慢性牙周炎患者进行了治疗前后血清IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3的检测,并与35名正常健康人作比较。结果:慢性牙周炎患者在治疗前IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8水平非常显著地高于正常人组(P<0.01),但是血清β-防御素-3水平显著低于正常人组(P<0.01),经综合治疗3个月后四项指标检测则与正常人组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:IGF-Ⅱ、IL-6、IL-8和β-防御素-3以不同方式参与了患者的发病,其水平的检测对了解病情和指导治疗具有重要的临床价值。

人α-防御素-3基因乳腺特异性表达载体的构建及在兔乳腺中的瞬时表达

为探索人α-防御素-3(HNP-3)基因在兔乳腺中特异性表达的可行性,将HNP-3基因与大鼠乳清酸蛋白(WAP)基因5′端调控区序列融合,定向克隆到PEGFP-1表达载体EGFP基因上游,在EGFP基因3′端加上His标签蛋白基因序列,构建了HNP-3基因乳腺定位表达载体pEGFP-WAP-HNP-S,将pEGFP-WAP-HNP-S与脂质体包裹后通过乳腺导管注射法转入妊娠母兔乳腺中,Westernblot和ELISA检测HNP-3融合基因在乳腺中表达和融合蛋白的表达水平,并用Ni亲和层析柱进行纯化。结果表明:分娩后初乳中即有分子质量为40kD的HNP-3融合蛋白表达,分娩后第4d达到高峰,表达量为265ng/mL。实验证明HNP-3融合基因在乳腺组织中能够特异性的表达。

大肠杆菌中融合表达人β防御素-3基因的研究(英文)

目的为了在大肠杆菌中融合表达人β防御素-3基因。方法根据大肠杆菌对精氨酸密码子使用的偏爱性,设计搭桥引物,并通过PCR扩增法合成了人β防御素的全基因序列,克隆进pGEX-4T-2中构建pGEX-4T-2-hBD-3融合表达载体。将表达载体转化E.coli宿主菌DH5α,进行IPTG诱导表达。将菌体反复冻溶使细胞膜穿孔,释放可溶性蛋白。融合蛋白GST-hBD-3经凝血酶切割。结果研究得到了重组人防御素蛋白,琼脂孔穴扩散抑菌法检测表明,重组人β防御素3对金黄色葡萄球菌有抗菌活性,抑菌效价为0.843 U。结论人β防御素-3基因在大肠杆菌中得到了融合表达。

人β防御素-3的研究进展

人防御素是一类人体内源性抗微生物阳离子短肽,富含精氨酸,以其广谱高效的抗菌活性和独特的作用机制,成为人体天然免疫体系的重要组成部分。在人防御素家族中,人β防御素-3(HBD-3)具有较强的抗菌活性和更广的抗菌谱,对盐浓度相对不敏感,对宿主细胞毒性低,这些特点使其成为当前研究的热点。本文就其结构特征、生物学功能及其在抗感染方面的应用前景等方面的研究进展作一概述。

非小细胞肺癌组织中β防御素-3的表达与树突状细胞浸润的关系

目的探讨β防御素-3（HBD-3）在非小细胞肺癌组织中的表达，及其与树突状细胞浸润的关系。方法采用免疫组化方法分别对60例非小细胞肺癌组织及癌旁正常组织进行HBD-3及S100检测。分析HBD-3在不同病理类型、临床阶段的肺癌组织细胞中的表达，及其与S100表达的关系。结果（1）HBD-3在肺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P〈0．05）；（2）HBD-3在鳞癌组织中的表达明显高于腺癌组织（P〈0．05）；（3）HBD-3在不同临床阶段的肺癌组织中表达差异无统计学意义（P〉0．05）；（4）S100在肺癌组织中的表达明显高于癌旁正常组织（P〈0．05）；（5）HBD-3与S100在肺癌组织中的表达呈显著正相关（P〈0．05）。结论肺癌组织中HBD-3表达增高，可能是通过趋化未成熟的树突状细胞而在机体抗肿瘤免疫中发挥作用。

重组人β防御素-3表达条件的优化及其对抑菌活性的影响

探讨表达条件对重组人β防御素-3(rhβD-3)表达量和抑菌活性的影响.对重组酵母菌的摇瓶发酵条件,如pH、发酵温度、甲醇的添加量等进行优化.结果表明,适宜的表达条件为BMMY培养基pH为6.0,装液量50mL/500mL锥形瓶,28℃,290r/min培养48h,每24小时加0.5%(V/V)甲醇.优化后rhβD-3的表达量可提高到340μg/mL,抑菌活性也有所提高.

龈沟液β-防御素-2、β-防御素-3在慢性牙周炎与2型糖尿病中的水平研究

目的通过检测龈沟液中β-防御素2、β-防御素3的表达水平,探讨其在慢性牙周病与2型糖尿病中的可能作用。方法选取慢性牙周炎伴2型糖尿病组(T2DMCP组)20例,2型糖尿病组(T2DM组)20例,慢性牙周炎组(CP组)20例,健康组(H组)20例作。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测龈沟液中β-防御素-2和β-防御素-3水平。比较组间龈沟液中β-防御素-2和β-防御素-3水平的差异性,分析β-防御素-2和β-防御素-3之间的相关性与β-防御素-2和β-防御素-3与牙周指标的相关性。结果 CP组、T2DM组、T2DMCP组的临床指标PD、CAL、BI和GCF量均高于H组(P<0.05)。T2DMCP组的PD、CAL、BI和GCF量均高于T2DM组和CP组(P<0.05)。龈沟液中β-防御素-2,β-防御素-3水平在H组高于CP组、T2DM组和T2DMCP组(P<0.05),CP组和T2DM组高于T2DMCP组(P<0.05)。龈沟液中β-防御素-2水平与β-防御素-3水平呈正相关(P<0.05)。结论慢性牙周炎和2型糖尿病可降低龈沟液β-防御素-2和β-防御素-3的水平,提示β-防御素-2、β-防御素-3对牙周组织起保护作用。

萨能奶山羊β-防御素-3基因的克隆、序列分析及差异表达

β-防御素3（BD-3）基因在乳腺炎病程中有重要作用，目前尚未见有关山羊BD-3基因的研究报道，根据已发表的牛的BD-3基因序列的编码区（CDS）设计引物，经RT-PCR、连接T载体、挑取克隆和测序，成功克隆出长度为210bp的萨能奶山羊BD-3基因CDS区，并提交至GenBank。分析该CDS区的核苷酸和氨基酸序列，结果表明，所得核苷酸序列与牛、人的序列同源性分别为91．2％和80．9％；其氨基酸序列在萨能奶山羊BD-3蛋白的功能结构域（含23～67个氨基酸）与人的结构域同源性为99．9％，蛋白质三级结构相似。分别用热灭活的金黄色葡萄球菌、停乳链球菌、大肠杆菌对乳腺上皮细胞刺激0、2、4、6、8h，观察BD-3基因的mRNA水平变化，结果显示，金黄色葡萄球菌刺激4h后，BD-3表达量达到最高，与对照组相比差异极显著（P〈0．01）；停乳链球菌刺激后，BD-3表达量持续升高，8h时与对照组差异极显著（P〈0．01）；大肠杆菌刺激后，BD-3表达量逐渐升高，4h时达到最高，但与对照组差异不显著，之后表达量逐渐下降。成功克隆出山羊BD-3基因，并且在金黄色葡萄球菌、停乳链球菌的刺激下有较高水平的表达，说明BD-3基因在乳腺炎病程中起到萤喜作用．

犬防御素-3基因的真核表达及活性检测

为了在毕赤酵母X-33中表达犬防御素-3,并检测其抗菌活性,根据毕赤酵母密码子偏好性,人工合成犬防御素-3基因,构建重组质粒PpiczɑC-CBD-3,线性化后电转至毕赤酵母菌X-33,经抗性筛选,阳性克隆用10mL/L甲醇诱导表达,表达产物经Tricine-SDS-PAGE电泳分析,并用琼脂空穴扩散法测定其抗菌活性。表达产物经Tricine-SDS-PAGE检测,在分子质量8.5ku左右有目的条带,与预期大小一致,表达的犬防御素经琼脂空穴扩散法检测显示出一定的抗菌活性。研究表明,犬防御素-3在毕赤酵母中成功分泌表达,为进一步研究奠定了基础。