防风-乌梅含药血清对血小板衍生因子诱导人支气管平滑肌细胞增殖与细胞周期的影响机制研究

目的观察防风-乌梅含药血清对血小板衍生因子(PDGF)诱导人支气管平滑肌细胞(HBSMC)增殖及其对细胞周期的抑制作用,探索防风-乌梅配伍抑制气道重塑的机制。方法通过PDGF诱导的方式诱导HBSMC增殖;分别予大鼠灌胃防风、乌梅、防风-乌梅及生理盐水,制备药物血清;取4代对数生长期的HBSMC,将其分为空白对照组、细胞模型组、正常大鼠血清组、正常大鼠血清细胞模型组、激素干预组、防风血清组、乌梅血清组、防风-乌梅血清组,对细胞给予相应处理;CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况,流式细胞检测细胞周期,Elisa技术检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)的浓度。结果防风-乌梅血清组降低细胞增殖的能力要优于单独使用防风血清组和乌梅血清组;防风-乌梅血清组能增加G0/G1期细胞比例,减少S期细胞数;防风-乌梅血清组降低TNF-α和IL-8浓度的作用优于单独使用防风血清组和乌梅血清组。结论防风-乌梅配伍能显著抑制HBSMC增殖,阻滞细胞周期进程,影响气道重塑,其机制可能通过抑制TNF-α、IL-8释放有关。

乌梅-防风药调控过敏性鼻炎Treg/Th17免疫平衡的分子机制研究

目的:探讨乌梅-防风药调控肥大细胞外泌体源性MMP9对过敏性鼻炎(AR)小鼠Treg/Th17免疫平衡的影响。方法:筛选乌梅与防风的潜在作用靶点,并与AR的风险基因取交集,GO分析与蛋白互作分析筛选出潜在作用靶点。建立AR小鼠模型,分离小鼠股骨中肥大细胞及外泌体。乌梅-防风药及外泌体治疗小鼠。评估各组小鼠行为学评分,检测小鼠鼻黏膜中Foxp3、RORγt的mRNA表达。敲减外泌体中MMP9表达后,观察AR小鼠的行为学评分和Foxp3、RORγt的mRNA表达。结果:生物信息学结果显示,乌梅-防风药可能通过肥大细胞外泌体源性IL-1β、MMP9作用于AR。相对于正常小鼠,AR小鼠Foxp3 mRNA表达降低,RORγt mRNA表达升高,MMP9表达升高(均P<0.05)。乌梅-防风药处理AR小鼠后,Foxp3 mRNA表达升高,RORγt与MMP9表达降低,但肥大细胞外泌体能进一步抵消乌梅-防风药的作用,敲减MMP9后肥大细胞外泌体作用减弱。结论:乌梅-防风药通过抑制骨髓源性肥大细胞外泌体源性MMP9调控AR小鼠Treg/Th17失衡。

基于超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术（UPLC-Q-TOF）对防风乌梅药对在健康大鼠血清药物化学研究

目的:分析给予大鼠防风-乌梅药对后的入血成分及其代谢产物。方法:10只雌性大鼠分为防风-乌梅药对给药组和空白对照组,分别予防风-乌梅药对生药溶液和同体积纯水灌胃。给药4 d后,用固相萃取法提取含药血清及空白血清,用药材的乙腈提取液作为药材对照。色谱采用Angient Zorbax Eclipse Plus C8(3.0×100 mm,1.8μm)为色谱柱、0.1%甲酸溶液-乙腈梯度洗脱;质谱采用ESI源、质荷比(m/z)50~1200范围内正离子扫描模式。利用主成分分析结果和药材原型成分数据库对药对血中移行成分及代谢物进行鉴定。结果:防风乌梅药对原型入血成分3种(升麻素、汉黄芩素、升麻素苷)均来自于防风,另外有内源性物质有11种。结论:防风-乌梅药对给药后体内内源性物质较单独使用防风和乌梅任一药味均显著增加,提示药对对机体功能的影响强于单味药物。