HPLC法同时测定阳和颗粒灌胃大鼠血清中4种成分的含量

目的:建立高效液相色谱法(HPLC)同时测定大鼠灌胃阳和颗粒后血清中5-羟甲基糠醛、肉桂酸、桂皮醛、甘草苷等4种成分含量的方法。方法:12只大鼠采用随机数字表法分为阳和颗粒组和空白对照组,每组6只,制备含药血清,采用高效液相色谱仪进行含量测定,以乙腈和0.1%磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为240 nm,流速为1.0 mL/min,柱温为25℃,进样量为10μL。结果:5-羟甲基糠醛、肉桂酸、桂皮醛、甘草苷等4种成分的线性范围分别在0.001,05~0.010,5、0.021~0.210、0.001,15~0.011,5、0.001,25~0.012,5μg的范围内;精密度、专属性、稳定性和回收率试验均符合要求。结论:HPLC可以同时测定大鼠灌胃阳和颗粒后血清中5-羟甲基糠醛、肉桂酸、桂皮醛、甘草苷等4种成分含量。

阳和平喘颗粒对哮喘大鼠的保护作用

目的:研究阳和平喘颗粒对哮喘模型大鼠的保护作用及其可能的作用机制。方法:将60雄性只大鼠随机分为正常对照组、模型组、阳和平喘颗粒(25.92、12.96、6.48g/kg)组、桂龙咳喘宁胶囊(1.62g/kg)组。试验开始第一天,大鼠腹腔注射10%卵清蛋白(OVA)氢氧化铝生理盐水溶液致敏,第8天再次致敏,正常对照组注射等量生理盐水。于初次致敏第15天起,除正常组外,其余各组大鼠用含1%OVA的生理盐水超声雾化激发20min,隔天一次,共7次,复制大鼠哮喘模型。实验第15天起,给药组分别灌胃给予相应的药物,治疗2周,正常组和模型组给予等容积溶媒。实验结束后,分别采用硝酸还原酶法和放射免疫法测定血清中一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)的含量,HE染色法观察哮喘大鼠肺组织病理改变,免疫组化法观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肺组织中的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现明显的哮喘症状,肺组织及周围有大量炎性细胞浸润,血清中NO、ET-1含量显著升高,肺组织中iNOS的表达水平明显高于正常对照组;与模型组相比,阳和平喘颗粒(25.92、12.96g/kg)组哮喘大鼠哮喘症状及肺组织炎症反应明显减轻,大鼠血清中NO、ET-1的含量及肺组织iNOS活性显著降低。结论:阳和平喘颗粒对OVA介导的大鼠哮喘模型的保护作用可能与其对ET-1、NO、iNOS的调节有关。

阳和平喘颗粒对支气管哮喘大鼠气道黏液高分泌的影响

目的探讨阳和平喘颗粒治疗支气管哮喘的可能作用机制。方法 90只SD大鼠随机分为正常组、哮喘模型组、地塞米松组和阳和平喘颗粒低、中、高剂量组,每组15只。采用卵蛋白(OVA)腹腔注射致敏及雾化吸入的方法建立哮喘大鼠模型,同时应用氢化可的松腹腔注射复制肾阳虚模型。实验第28天开始阳和平喘颗粒低、中、高剂量组大鼠分别按1.62、3.24和6.48 g/(kg·d)灌胃给药,地塞米松组按0.5 mg/(kg·d)灌胃给药,每日1次,连续给药2周;正常组、哮喘模型组以等量的生理盐水进行灌胃。采用HE染色和PAS染色分别检测肺组织病理学改变及气道黏蛋白分泌情况;Real-time PCR法检测肺组织黏蛋白5AC(MUC5AC)和黏蛋白5B(MUC5B)mRNA的表达水平;ELISA法检测肺泡灌洗液MUC5AC和MUC5B的水平变化。结果与正常组相比,哮喘模型组肺组织可见广泛炎症性细胞浸润、气道狭窄、肺泡腔增大、气道内黏蛋白的分泌量显著增多,MUC5AC和MUC5B蛋白及mRNA的表达水平升高(P<0.01)。与哮喘模型组比较,阳和平喘颗粒低、中、高剂量组大鼠肺组织形态学结构明显改善、气道管腔大小明显恢复,同时MUC5AC和MUC5B蛋白及mRNA的表达水平下降(P<0.01)。结论阳和平喘颗粒可能通过减少炎性细胞浸润和降低气道黏液蛋白分泌而达到治疗支气管哮喘的效果。

阳和平喘颗粒对气道平滑肌细胞增殖的影响

目的:研究阳和平喘颗粒在体外对支气管哮喘大鼠气道平滑肌增殖及PI3K/PKB通路相关因子的影响。方法:将阳和平喘颗粒含药血清及PI3K/PKB通路阻断剂分别组合作用于体外培养的支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞,噻唑蓝比色法(MTT)检测大鼠气道平滑肌细胞的增值情况,实时聚合酶链反应(Realtime-PCR)检测阳和平喘颗粒对磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、蛋白激酶B(PKB)、肾上腺素受体(AR)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)、增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA表达水平的影响,蛋白印迹法(Western-Blot)检测阳和平喘颗粒对PI3K、PKB、AR、eNOS、PCNA蛋白表达水平的影响,酶联免疫吸附测定(ELISA)阳和平喘颗粒对磷脂酰肌醇二磷酸(PIP2)和磷脂酰肌醇三磷酸(PIP3)表达水平的影响。结果:50%阳和平喘颗粒(18.45g/kg)含药血清对支气管哮喘大鼠气道平滑肌细胞的增殖具有明显的抑制作用,阳和平喘颗粒含药血清及PI3K/PKB通路阻断剂能显著抑制支气管哮喘大鼠细胞内PI3K、PKB、PIP2、PIP3和PCNA的表达,促进eNOS和AR的生成。结论:阳和平喘颗粒具有在体外通过PI3K/PKB通路治疗支气管哮喘大鼠气道重塑的作用。

基于TLR4/NF-κB通路探讨阳和平喘颗粒对哮喘大鼠气道炎症和气道重塑的实验研究

目的:基于Toll样受体4/核转录因子-κB(TLR4/NF-κB)信号通路,研究Toll样受体4抑制剂干预后阳和平喘颗粒对哮喘模型大鼠肺组织气道炎症及气道重塑的影响,探讨阳和平喘颗粒治疗哮喘的作用机制。方法:随机数字法将SD大鼠分为正常对照组、模型对照组、阳和平喘颗粒7.74 g/kg组、Toll样受体4抑制剂0.001 g/kg组、阳和平喘颗粒7.74 g/kg+Toll样受体4抑制剂0.001 g/kg组,联合应用氢氧化铝和卵蛋白致敏诱发大鼠,建立哮喘动物模型,药物干预14 d后,采用HE染色观察肺组织病理改变,吉姆萨染色(Giemsa)观察肺泡灌洗液中炎性细胞的数目,酶联免疫吸附法检测大鼠血清中白介素-6(IL-6)、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF-α)含量;采用免疫荧光法检测TLR4、磷酸化核转录因子-κB(p-NF-κB)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况;qPCR法检测大鼠肺组织Tlr4、Nfkb、核转录因子-κB抑制蛋白(Ikb)mRNA的表达;Western blotting法检测大鼠肺组织TLR4、p-NF-κB、磷酸化核转录因子-κB抑制蛋白(p-IκB)、α-SMA蛋白的表达。结果:与正常对照组比较,模型对照组肺泡灌洗液中嗜酸性细胞(Eos)、中性粒细胞(Neu)、淋巴细胞(Lym)数目显著升高(P<0.01),血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著升高,肺组织Tlr4、Nfkb mRNA表达显著上调(P<0.01),Ikb mRNA显著下调,TLR4、p-NF-κB、α-SMA蛋白表达上调,p-IκB表达下调(P<0.01);与模型对照组比较,各给药组血清中TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著下降(P<0.01),肺泡灌洗液中Eos、Neu、Lym数目明显减少,肺组织中Tlr4、Nfkb mRNA表达下调,Ikb mRNA表达上调,TLR4、p-NF-κB、α-SMA蛋白表达明显下调,p-IκB显著上调(P<0.05或P<0.01);与Toll样受体4抑制剂0.001 g/kg组相比,阳和平喘颗粒7.74 g/kg+Toll样受体4抑制剂0.001 g/kg组Eos、Lym数目及TNF-α、IL-6、IL-1β含量显著降低(P<0.01),TLR4、p-NF-κB、α-SMA蛋白表达明显下调,p-IκB表达明显上调,Tlr4、Nfkb mRNA下调,Ikb mRNA上调(P<0.01)。结论:阳和平喘颗粒可有效改善哮喘大鼠气道炎症和气道重塑,其作用机制可能与抑制哮喘大鼠肺组织TLR4/NF-κB信号通路和减少血清炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β的分泌相关。