从cDNA文库中筛选分析阳性克隆的简便方法

ｃＤＮＡ文库中阳性克隆的传统筛选分析法既费时又费力．利用微波炉加热的方法，简化了原位杂交中噬菌斑裂解、ＤＮＡ变性与固定的程序；进一步运用ＰＣＲ扩增技术，特异扩增克隆载体中插入的ｃＤ－ＮＡ片段，加快了阳性克隆分析的进程．

一个具有诊断价值的弓形虫基因的发现

目的用弓形虫成囊株感染的小鼠血清筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库,以寻找诊断弓形虫病的抗原基因。方法收集成囊株(Prugniaud株)慢性感染的小鼠血清,经滤膜吸附法去除大肠杆菌抗体,筛选弓形虫RH株速殖子cDNA文库。对3次复筛得到的阳性克隆进行插入片段的核苷酸序列测定,结果送GenBank进行同源性分析。根据序列测定结果,选取其中1个具有完整开放阅读框架的基因进行分析。结果获得4个持续阳性反应克隆。测序和同源性分析显示,WT1为弓形虫P30基因;WT4为弓形虫N-乙酰磷酸丙糖转移酶基因;WT9与已知的基因无同源性。WT12克隆基因与一未知的弓形虫基因有很高的同源性,且具有1个513bp大小的完整开放阅读框架,其蛋白质结构和功能预测可能是个跨膜信号蛋白。结论筛选得到的1个阳性克隆有望成为早期诊断抗原基因,值得进一步研究。