哺乳动物基因组靶向修饰阳性细胞富集的报告载体系统研究进展

基因组靶向修饰技术对基因功能研究、基因治疗以及转基因育种研究都具有重要的意义和价值。近年来发展起来的人工核酸酶如ZFNs、TALENs和CRISPR/Cas9等的应用大大提高了基因组靶向修饰的效率。但是由于核酸酶表达载体转染效率、核酸酶表达效率及活性以及基因组被打靶后的修复效率等因素在一定程度上制约着基因组靶向修饰阳性细胞的获得。因此富集和筛选基因组靶向修饰阳性细胞是一个亟待解决的问题。报告载体系统可以间接地反映核酸酶的工作效率并有效富集核酸酶修饰的阳性细胞,进而提高基因组靶向修饰阳性细胞的富集和筛选效率。本文主要针对由非同源末端连接(Non-homologous end joining,NHEJ)和单链退火(Single-strand annealing,SSA)两种修复机制分别介导的报告载体系统的原理和应用进行了详细的介绍,以期为以后的相关研究提供借鉴和参考。

CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集的应用评价

目的探讨CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集的有效性、安全性及应用效果。方法对39例实体瘤和自身免疫性疾病患者动员后采集的外周血干细胞进行了CliniMACS系统阳性富集的CD^＋34自体造血干细胞移植。结果阳性富集后CD^＋34细胞纯度平均可达89．8％，CD^＋34细胞平均回收率达78．9％，粒细胞-巨噬细胞集落形成单位（CFU—GM）数量为（15．0±7．0）×10^5／kg，阳性富集前、后细胞胎盘蓝拒染率比较差异无统计学意义，保持了细胞良好的生物学活性，移植后于2～3周内造血重建。结论应用CliniMACS系统进行CD^＋34造血干细胞阳性富集，可安全、有效地应用于造血干细胞移植。