牛颈静脉经不同方法交联改性后的免疫原性

目的:研究牛颈静脉带瓣管道经不同方法交联后免疫原性的变化。方法:将牛颈静脉随机分为4组(n=10):多聚环氧化合物(PC)交联组、染料介导光氧化(DMP)交联组、戊二醛(GA)交联组及新鲜牛颈静脉对照组。制备牛颈静脉匀浆,与完全福氏佐剂混合制成复合乳剂抗原,免疫新西兰大白兔。采用双向免疫扩散法测定兔血清抗体滴度。取新鲜牛颈静脉免疫的兔血清,采用免疫印迹法(Westernblotting)体外检测交联后的牛颈静脉组织匀浆的抗原组分。结果:免疫印迹显示新鲜牛颈静脉组织有特异性重复出现的阳性条带,经PC,DMP交联处理的牛颈静脉均未出现明显阳性条带,经GA交联处理的牛颈静脉中1例出现阳性条带,但无特异性重复出现的条带,各交联处理组间免疫原性无明显差异。结论: PC,DMP及GA交联处理的牛颈静脉可有效地灭活其免疫原性,适合临床应用要求。

转基因食品DNA提取技术研究

目的:建立从食品中提取DNA的方法。方法:采用CTAB法、酶裂解法、SDS沉淀法3种方法提取转基因相关食品中的DNA,用核酸蛋白分析仪测定核酸的纯度和浓度、PCR扩增真核生物的18SrDNA基因评价提取核酸的质量。用转基因植物通常含有的CaMV35S启动子作为转基因成分的指示标记。结果:3种方法得到的DNA提取物OD260/OD280比值均接近1.6～1.9,CTAB法获得的DNA量较少,酶提取法所得的DNA提取物的量多,但扩增条带荧光较暗。SDS法能收获较多的DNA,PCR扩增效果好。用SDS法提取的DNA进行35S启动子检测,3份转基因样品均出现强阳性结果,而10份非转基因食品均未产生阳性条带。结论:SDS沉淀法提取DNA,具有经济、简便的特点,所提的DNA量适用于PCR检测。

大鼠背根神经节P2Y1与P2Y4嘌呤受体的表达比较

目的:探讨P2Y1和P2Y4亚基在大鼠背根神经节(D R G)神经元的表达。方法:应用组织水平和多细胞水平R T-PC R方法从不同角度检测了P2Y1和P2Y4受体的表达情况。结果:两种R T-PC R扩增结果均显示:P2Y1亚型有特异性表达阳性条带出现,而P2Y4亚型则无特异性表达条带出现。结论:大鼠D R G的大、中、小细胞中均有P2Y1亚型表达,而无P2Y4亚型的表达。

不同毒力钩端螺旋体属特异性外膜蛋白抗原的分析

目的 了解不同毒力钩端螺旋体株有无属特异性外膜蛋白抗原。方法 TR/ patocⅠ钩体属特异性抗原免疫家兔获得抗血清 ,以显微镜凝集试验检测TR/patocⅠ属特异性抗原抗血清对我国 15群 17型问号钩体和 2群 2型双曲钩体的凝集情况。采用Auran介绍的方法制备问号钩体黄疸出血群赖型 5 6 6 0 1株、波摩那群波摩那型 5 6 6 0 8株和双曲钩体三宝垄群Patoc型patocⅠ株的外膜蛋白 ,用SDS -PAGE及Westernblot分析不同毒力钩体外膜蛋白的电泳特征及与TR/ patocⅠ属特异性抗血清的反应性。结果 钩体TR/ patocI属特异性抗血清能与上述各株钩体发生凝集反应 ,其效价为 1∶2 5 6～ 1∶5 12。三种不同毒力钩体外膜蛋白有相似的SDS -PAGE图谱 ,其主要蛋白组分的分子量约为 6 0kDa ,Westernblot结果证实在约31kDa处有一共同的能与TR/patocI属特异性抗血清发生反应的阳性条带。结论 钩体细胞表面具有属特异性抗原 ,分子量31KDa外膜蛋白可能是属特异性抗原之一。

大鼠背根神经节神经元P2Y嘌呤受体的表达

目的 探讨P2Y1和P2Y4亚基在大鼠背根神经节(DRG)神经元的表达。方法 应用组织水平和多细胞水平RT -PCR方法从不同角度检测了P2Y1受体的表达情况。结果 两种RT -PCR扩增结果均显示:P2Y1亚型有特异性表达阳性条带出现,而P2Y4亚型则无特异性表达条带出现。结论 大鼠DRG的大、中、小细胞中均有P2Y1亚型表达。

ENA多肽抗体检测及临床意义

目的探讨抗核抗体中的盐水可提取核抗原(ENA)抗体对风湿免疫性疾病的诊断意义。方法取380例患者血清,采用免疫印迹(IB)法检测ENA抗体。结果SLE患者抗Sm及抗U1RNP抗体分别为32.4%、26%。抗rRNP主要见于SLE为14.6%。9例MCTD抗U1RNP均为阳性。抗SS-A和抗SS-B抗体在15例SS患者中分别为14/15和13/15例。DM患者抗Sc l-70为3/12例。PSS患者抗Jo-1阳性1/8例。其他疾病仅检测到抗SS-A 18.1%、抗SS-B 4.5%、抗rRNP3.3%。与其他疾病组及对照组比较差异有显著性(P<0.01)。结论ENA抗体在风湿免疫性疾病中有较高的检出率,对风湿免疫性疾病的诊断具有重要意义。抗Sm抗体为SLE标志性抗体。仅凭一条条带即报告某一抗体阳性应慎重。

肉仔鸡J亚群白血病继发感染大肠杆菌病的诊断

随着养禽业高度集约化迅速发展,鸡J亚群白血病已成为危害肉仔鸡重要的疾病之一,且因与其他疾病如大肠杆菌病混合感染而使死亡率升高。本论文以吉林省桦甸市某养殖户饲养的肉鸡发病病例为对象,结合鸡群的临床症状,病理变化,病原菌的分离,通过涂片染色镜检、细菌分离、PCR等方法检测鸡ALV-J特异性抗原gp85基因等实验室诊断。结果为MAC上菌落为圆形、砖红色,EMB上为紫黑色、圆形、有光泽的菌落,镜检为G-杆菌,符合大肠杆菌特性;PCR检测可扩增出约1 000 bp的阳性条带,与预期大小相符,符合J亚群白血病特性。该病例为鸡J亚群白血病继发大肠杆菌感染。