3种动物源性成分阳性标准分子的构建与应用

为了准确、快速地进行食品中猪、牛、鸭成分的定性和定量检测,设计了这3种动物源性成分特异性的引物和探针,构建了3种检测用阳性标准分子,并分别进行了实时荧光PCR检测。这3种阳性标准分子相对检测灵敏度、特异性高,稳定性好,能够满足日常检测工作的要求。

转基因玉米筛选检测阳性标准分子的构建和应用

为了满足转基因玉米成分检测中阳性对照不易获得及不易长久保存的缺陷,通过分析公共数据库资源,建立了包含玉米内标准基因z SSIIb及遗传转化中常用的Ca MV35S启动子、nos启动子、Ca MV35S终止子、nos终止子的的标准分子。灵敏度检测发现,在检测体系中含有1 000个分子时,可以非常清楚扩增到所有5个片段的目的条带。随机挑选我国批准进口的7种转基因玉米,对标准分子进行验证,结果表明,在相应的阳性样品和标准分子中都能扩增到特异的目的条带,构建的标准分子可以满足作为转基因玉米筛选检测中阳性对照的要求。

转基因玉米特异性检测阳性标准分子的构建与应用

试验用PCR方法从玉米中扩增内源基因zSSIIb片段,并将其克隆到pMD18-T载体上,获得中间载体pMD-zSSIIb;根据Bt11和MON810玉米转化体特异性序列,分别设计带酶切位点的引物,扩增出Bt11和MON810转化体特异性产物;用相应的酶对pMD-zSSIIb和两种PCR产物进行酶切,分别将Bt11和MON810产物克隆到pMD-zSSIIb上,获得阳性标准分子pMD-ZB和pMD-ZM,并对其进行特异性测试。结果表明,获得的阳性标准分子可以作为转基因产品检测时的阳性对照。