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植酸酶基因定性PCR检测方法及阳性质粒分子的构建 被引量:5
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作者 李俊 刘信 +5 位作者 曹应龙 武玉花 厉建萌 吴刚 张丽 卢长明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期639-647,共9页
植酸酶基因在农业生产中具有很高的应用价值,正被广泛用于农作物的基因工程研究。为了满足转植酸酶基因作物安全监管的需要,通过优化PCR检测条件,建立了植酸酶基因特异性定性PCR检测方法。该方法具有良好的扩增特异性和检测灵敏度,可以... 植酸酶基因在农业生产中具有很高的应用价值,正被广泛用于农作物的基因工程研究。为了满足转植酸酶基因作物安全监管的需要,通过优化PCR检测条件,建立了植酸酶基因特异性定性PCR检测方法。该方法具有良好的扩增特异性和检测灵敏度,可以满足我国植酸酶转基因作物监管需要。此外,我们将6种主要农作物(小麦、水稻、棉花、大豆、玉米和油菜)的内标准基因和植酸酶基因克隆到同一载体上,构建成了阳性质粒分子pBS Endogenous-phytase。该质粒分子适用于这6种作物中植酸酶基因的筛查检测。本研究为转植酸酶基因作物的安全监管提供了阳性材料和检测方法。 展开更多
关键词 转基因检测 植酸酶基因 定性PCR 阳性质粒分子
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转基因油菜筛查阳性质粒分子的研制及应用 被引量:4
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作者 李俊 李夏莹 +7 位作者 王颢潜 翟杉杉 陈子言 高鸿飞 李允静 吴刚 张秀杰 武玉花 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期1322-1337,共16页
【目的】转基因油菜是四大转基因作物之一,是中国转基因生物安全监管的重要对象,转基因检测为转基因安全监管提供技术支撑。转基因筛查是转基因检测的第一步,筛查靶标设置不合理会导致漏检部分转基因成分。建立转基因油菜筛查策略,并研... 【目的】转基因油菜是四大转基因作物之一,是中国转基因生物安全监管的重要对象,转基因检测为转基因安全监管提供技术支撑。转基因筛查是转基因检测的第一步,筛查靶标设置不合理会导致漏检部分转基因成分。建立转基因油菜筛查策略,并研制与筛查策略配套的阳性质粒分子,将为中国的转基因油菜安全监管提供强有力的技术支撑。【方法】通过收集数据库中登记的转基因油菜品种的外源基因元件信息,分析转基因油菜品种中常用的调控元件和标记基因,基于最大筛查覆盖率原则,确定转基因油菜的筛查靶标。通过检索数据库或查询专利,收集筛查元件的核苷酸序列。一个筛查元件通常有多个标准方法,查阅各筛查元件的检测标准,分析各标准中普通PCR引物对和实时荧光PCR引物/探针组合在筛查元件核苷酸序列中的位置,根据引物探针的结合位点,确定拟构建到质粒上的各筛查元件的核苷酸序列。人工合成各筛查元件和油菜内标基因的融合序列,克隆到常用质粒pUC18,构建阳性质粒分子。采用各筛查元件的普通PCR和实时荧光PCR方法,评估阳性质粒分子的适用性。【结果】建立了转基因油菜的筛查策略,通过检测CaMV 35S启动子、FMV 35S启动子、Bar、PAT、CP4-EPSPS、NPTⅡ、HPT、NOS终止子和PinⅡ终止子共9个基因元件,可实现已知信息转基因油菜品种的全覆盖。构建出聚合9个筛查元件和2个油菜内标基因HMG I/Y和CruA的转基因油菜筛查质粒分子pYCSC-1905。9个筛查元件和2个油菜内标基因的扩增效率均在90%—110%,证明质粒分子上的不同靶标序列没有相互干扰,影响PCR的扩增效率。质粒分子pYCSC-1905可用作9个筛查元件和2个油菜内标基因的通用阳性对照,适用于国家标准(GB/T和农业农村部公告)、出入境检验检疫行业标准(SN/T)和欧盟标准。【结论】提出的转基因油菜筛查策略涵盖9个基因元件,可实现从商业化到安全评价各阶段转基因油菜的筛查检测,显著降低转基因油菜的筛查漏检率。研制的配套质粒分子pYCSC-1905为转基因油菜筛查和各基因元件标准方法的应用提供了通用标准样品,保证检测机构间检测数据的准确性和可比性。 展开更多
关键词 转基因油菜 筛查 筛查策略 阳性质粒分子 应用
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H9N2亚型禽流感病毒HA检测片段阳性质粒的构建
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作者 杨婧 刘宇卓 +5 位作者 刘青涛 赵冬敏 章丽娇 黄欣梅 韩凯凯 李银 《江西农业学报》 CAS 2019年第2期86-90,共5页
本试验按照农业部NYT 772─2013标准构建了长度为487 bp的H9N2亚型禽流感病毒HA检测片段阳性质粒,并对该阳性质粒的特异性、敏感性和重复性进行了鉴定,获得了可用于检测H9N2亚型禽流感病毒HA片段的阳性质粒。该质粒在-20℃下即可保存,... 本试验按照农业部NYT 772─2013标准构建了长度为487 bp的H9N2亚型禽流感病毒HA检测片段阳性质粒,并对该阳性质粒的特异性、敏感性和重复性进行了鉴定,获得了可用于检测H9N2亚型禽流感病毒HA片段的阳性质粒。该质粒在-20℃下即可保存,使用方便,不会污染环境,不存在散播病毒的危险。 展开更多
关键词 禽流感病毒 H9N2 HA检测片段 阳性质粒 构建
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转基因水稻检测用阳性质粒分子的构建及应用 被引量:5
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作者 李晓飞 谭小力 +2 位作者 李俊 武玉花 曹应龙 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期71-77,共7页
通过分析转基因水稻(Oryza sativa)中调控元件和功能基因的种类及应用频率,结合水稻基因工程研究中标记基因的使用情况,确定将CaMV35S启动子、NOS终止子,标记基因Bar、HPT和NPTⅡ基因作为转基因水稻的筛查检测靶标。通过重叠延伸PCR技术... 通过分析转基因水稻(Oryza sativa)中调控元件和功能基因的种类及应用频率,结合水稻基因工程研究中标记基因的使用情况,确定将CaMV35S启动子、NOS终止子,标记基因Bar、HPT和NPTⅡ基因作为转基因水稻的筛查检测靶标。通过重叠延伸PCR技术,将水稻内标基因SPS、筛选靶标(CaMV35S启动子、NOS终止子、Bar基因、HPT基因和NPTⅡ基因)、事件特异性检测靶标(TT51-1、KF-6和KMD1)聚合克隆到质粒载体上,构建质粒分子pBS Rice。应用结果表明,阳性质粒分子pBS Rice既适用于转基因水稻的筛查检测,也适用于抗虫水稻TT51-1、KF-6和KMD1的事件特异性检测。研究结果为转基因水稻安全监管提供了一种不依赖于转基因水稻原材料供应的阳性对照,其对目前国内外批准的转基因水稻检出率达100%,满足了监管过程中转基因水稻的检测需要。 展开更多
关键词 转基因水稻 阳性质粒分子 定性PCR 筛查检测 事件特异性检测
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三种植物源性成分阳性质粒的构建及检测方法的验证 被引量:3
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作者 翟清燕 任易婕 +1 位作者 郑世超 霍胜楠 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2020年第17期237-241,共5页
植物蛋白饮料含有丰富的营养成分,深受广大消费者的喜爱。但由于利益驱使,掺假现象也逐年增加。针对此现象构建了核桃、花生、大豆3种植物成分的阳性质粒分子,对3种阳性质粒分子的特异性和灵敏度进行了验证,并对实时荧光PCR反应体系中... 植物蛋白饮料含有丰富的营养成分,深受广大消费者的喜爱。但由于利益驱使,掺假现象也逐年增加。针对此现象构建了核桃、花生、大豆3种植物成分的阳性质粒分子,对3种阳性质粒分子的特异性和灵敏度进行了验证,并对实时荧光PCR反应体系中不同品牌PCR预混液效果进行了对比分析。结果表明,构建的核桃、花生、大豆阳性质粒分子均具有特异性强、灵敏度高等特点,检验灵敏度均可达到10-5 ng/μL;标准曲线扩增效率分别为93.299%、123.623%和132.975%,且相关线性系数R 2均在0.99以上。综上所述,3种品牌的PCR预混液均具有很高的灵敏度,均可以满足核桃、花生和大豆日常检验工作的要求,对于植物源性成分的鉴定具有重要意义。 展开更多
关键词 阳性质粒分子 特异性 灵敏度 PCR预混液
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3种动物源性成分阳性质粒构建及检测研究 被引量:1
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作者 郭颖慧 郑世超 霍胜楠 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第6期135-142,共8页
为准确、快速地进行食品中狐狸、驴、马成分的定量检测,选择适宜高效的聚合酶,本研究利用荧光定量聚合酶链式反应(real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)的方法构建狐狸、驴、马源性成分检测的3种阳性... 为准确、快速地进行食品中狐狸、驴、马成分的定量检测,选择适宜高效的聚合酶,本研究利用荧光定量聚合酶链式反应(real-time Fluorescent Quantitative Polymerase Chain Reaction,FQ-PCR)的方法构建狐狸、驴、马源性成分检测的3种阳性质粒分子,对3种质粒分子的方法特异性、灵敏度进行验证,并对实时荧光PCR反应体系中脱氧核糖核酸(Deoxyribose Nucleic Acid,DNA)聚合酶效果进行对比分析。研究结果发现,所选择的3种品牌的反应液和脱氧核糖核苷三磷酸(Deoxyribonucleoside Triphosphate,d NTP)均具有很高的灵敏度,检出限略微有差异,均可满足日常检验工作的需要。 展开更多
关键词 阳性质粒分子 实时荧光PCR 特异性 灵敏度 DNA聚合酶
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两种动物源性成分阳性质粒分子的构建与检测方法的建立
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作者 翟清燕 郑世超 霍胜楠 《食品研究与开发》 CAS 北大核心 2018年第10期110-115,共6页
旨在构建水貂、紫貂两种成分的阳性质粒分子,对该方法的特异性和灵敏度进行验证,同时对3家公司合成的引物、探针进行比较,对实时荧光PCR反应体系进行优化。结果表明,该检测方法具有较好的特异性和较高的灵敏度,所选择的3家公司的引物、... 旨在构建水貂、紫貂两种成分的阳性质粒分子,对该方法的特异性和灵敏度进行验证,同时对3家公司合成的引物、探针进行比较,对实时荧光PCR反应体系进行优化。结果表明,该检测方法具有较好的特异性和较高的灵敏度,所选择的3家公司的引物、探针均具有较高的检出限,为貂成分检测提供一个新型阳性对照,解决了阳性物质难获取的问题。 展开更多
关键词 阳性质粒分子 特异性 灵敏度 引物 探针
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肉制品中毛皮动物源性成分掺假检测阳性质粒分子的构建与评价 被引量:1
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作者 翟清燕 霍胜楠 +5 位作者 姚现琦 郑世超 王骏 任易婕 孙潇慧 杜东旭 《中国食品卫生杂志》 CSCD 北大核心 2023年第3期360-366,共7页
目的建立一种肉制品中毛皮动物源性成分掺假快速检测技术。方法构建狐狸、貉、水貂三种检测用阳性质粒分子,利用实时荧光定量PCR方法对其特异性、灵敏度和方法适用性等关键指标进行分析。结果构建好的狐狸、貉、水貂阳性质粒分子特异性... 目的建立一种肉制品中毛皮动物源性成分掺假快速检测技术。方法构建狐狸、貉、水貂三种检测用阳性质粒分子,利用实时荧光定量PCR方法对其特异性、灵敏度和方法适用性等关键指标进行分析。结果构建好的狐狸、貉、水貂阳性质粒分子特异性强、灵敏度高,检验灵敏度均可达到10^(-4)ng/μL,标准曲线扩增效率分别为94.451%、117.461%、114.709%,且相关系数(R^(2))均在0.995以上。在混合肉样品和市售肉制品中均可检测,三种成分的检测限均低至1%,具有较好的可行性及适用性。结论本方法构建的三种阳性质粒分子可以满足实际工作中肉类掺假检测的需求。 展开更多
关键词 毛皮动物 阳性质粒分子 特异性 灵敏度
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转基因番木瓜阳性质粒分子的构建和应用 被引量:1
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作者 陈伟庭 高洁儿 +4 位作者 潘志文 周峰 王声斌 姜大刚 姚涓 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第18期6041-6048,共8页
转基因抗病番木瓜已经获得了全球多个国家的商业化应用和进口批准。为了解决转基因番木瓜检测工作中存在阳性对照不易获取的问题,本研究通过基因数据库(美国国家生物信息中心,NCBI),筛选番木瓜内标准基因Papain和Chymopapain基因以及已... 转基因抗病番木瓜已经获得了全球多个国家的商业化应用和进口批准。为了解决转基因番木瓜检测工作中存在阳性对照不易获取的问题,本研究通过基因数据库(美国国家生物信息中心,NCBI),筛选番木瓜内标准基因Papain和Chymopapain基因以及已经报道的番木瓜转化体‘华农1号’、‘55-1’和‘GM YK’的特异性序列,构建了转基因番木瓜阳性质粒分子,并对其特异性、灵敏度以及适用性进行了验证分析,结果表明:该阳性质粒分子包含的5个外源片段的扩增产物条带清晰、特异性好,检测灵敏度高,可以稳定地检测出100个拷贝的质粒分子;同时对质粒分子的适用性进行了测试,结果显示,构建的质粒分子可以应用于番木瓜组织和加工品的转基因检测中。由此表明本研究构建的转基因番木瓜阳性质粒分子可以作为阳性对照应用于转基因番木瓜的特异性检测。 展开更多
关键词 转基因番木瓜 阳性质粒分子 检测 事件特异性
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多重荧光PCR鉴别诊断猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒 被引量:1
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作者 陈静静 罗宝正 沙才华 《中国畜牧兽医文摘》 2012年第11期185-185,共1页
为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSF... 为了建立一种快速、灵敏、特异的能够同时检测猪瘟病毒和非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR方法,根据GenBank中公布的猪瘟病毒基因序列,设计一套特异性的引物和探针,对猪瘟病料提取RNA,经RT-PCR扩增后将产物回收,克隆至pMD18-T构建pMD18-T-CSFV阳性质粒; 展开更多
关键词 猪瘟病毒 多重 特异性 猪霍乱病毒 PCR 阳性质粒 荧光 弱光
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基于TaqMan实时荧光PCR技术检测转基因作物中的调控基因 被引量:4
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作者 罗建兴 海小 +2 位作者 刘国强 其勒木格 郭梁 《河南农业科学》 北大核心 2020年第11期159-165,共7页
为检测食品中的植物转基因成分,自主构建ppCaMV35S、ptNOS和ptCaMV35S 3种阳性质粒作为试验阳性对照,选用2种内源基因(pUbi、pRice-actin)和3种调控基因(pCaMV35S、tNOS和tCaMV35S),利用TaqMan实时荧光PCR技术对4种转基因作物(玉米、水... 为检测食品中的植物转基因成分,自主构建ppCaMV35S、ptNOS和ptCaMV35S 3种阳性质粒作为试验阳性对照,选用2种内源基因(pUbi、pRice-actin)和3种调控基因(pCaMV35S、tNOS和tCaMV35S),利用TaqMan实时荧光PCR技术对4种转基因作物(玉米、水稻、棉花、大豆)和2种非转基因作物(玉米、小麦)进行转基因成分检测。特异性检测结果表明,构建的阳性质粒能够满足实际检测需要,且内源基因和其他调控基因均具有较好的特异性。在转基因棉花试样中分别对调控基因pCaMV35S和tNOS进行检出限试验,检测结果显示,在转基因棉花试样中pCaMV35S和tNOS的检测限度分别为1、10 ng,能够对商业化或处于中间试验阶段的转基因作物及产品进行有效筛查检测。 展开更多
关键词 阳性质粒 转基因作物 特异性 检出限 转基因检测 TaqMan实时荧光PCR 调控基因
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基于TaqMan实时荧光PCR检测植物中转基因成分 被引量:3
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作者 刘国强 海小 +1 位作者 罗建兴 郭梁 《农业与技术》 2020年第10期4-9,共6页
转基因植物的安全性一直备受关注,转基因成分检测是保障食品安全、维护消费者知情权的重要手段。本研究构建并鉴定了pCry3A、pCry1A(c)、pCP4-EPSPS和pCTP2-CP4-EPSPS 4种阳性质粒,并在转基因棉花、转基因大豆、转基因小麦、转基因玉米... 转基因植物的安全性一直备受关注,转基因成分检测是保障食品安全、维护消费者知情权的重要手段。本研究构建并鉴定了pCry3A、pCry1A(c)、pCP4-EPSPS和pCTP2-CP4-EPSPS 4种阳性质粒,并在转基因棉花、转基因大豆、转基因小麦、转基因玉米、非转基因玉米中分别检测玉米内源基因(adh1)、抗虫基因(Cry3A、Cry1A(c))和抗除草剂基因(CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS),最后将转基因棉花和转基因大豆DNA模板原液进行梯度稀释确定Cry1A(c)和CP4-EPSPS的检出限,通过检出限检测建立标准曲线确定此方法的转基因成分定量检测能力。结果表明:4种阳性质粒鉴定结果良好,可以作为转基因检测的阳性对照;转基因棉花为转入Cry1A(c)基因的抗虫棉;转基因大豆为转入CP4-EPSPS基因的抗除草剂大豆;转基因小麦为转入Cry1A(c)基因的抗虫小麦;转基因玉米为转入Cry1A(c)、CP4-EPSPS、CTP2-CP4-EPSPS基因的混合转基因玉米;Cry1A(c)和CP4-EPSPS的引物和探针的检出限均可达0.1ng;建立的2种标准曲线的R2≥0.95,说明引物和探针可以满足定量检测要求。本研究对TaqMan实时荧光PCR法检测植物中的转基因成分提供一些借鉴,同时为保障食品安全、维护消费者知情权提供方法支持。 展开更多
关键词 转基因玉米 阳性质粒 检出限 定量
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玉米转基因成分的检测探讨
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作者 周恪驰 何长安 +2 位作者 纪春学 王辉 张恒 《吉林蔬菜》 2021年第4期72-73,共2页
本文以实时荧光PCR检测技术为例,对于玉米转基因成分进行分析。在具体处理中,会组建实验来完成阳性质粒、调控元件、目的基因、标记基因等内容的检测,从而积累有价值的数据信息,为后续同类型检测活动的顺利开展奠定基础。
关键词 阳性质粒 转基因成分 荧光PCR检测技术
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Large Number,Dark Matter,Dark Energy,and Superstructures in the Universe
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作者 HUANG Wu-Liang HUANG Xiao-Dong 《Communications in Theoretical Physics》 SCIE CAS CSCD 2009年第3期575-576,共2页
Since there may exist dark matter particles ν and δ with mass - 10^-1 e V in the universe, the superstructures with a scale of 10^19 solar masses (large number A - 10^19) appeared during the era near and before th... Since there may exist dark matter particles ν and δ with mass - 10^-1 e V in the universe, the superstructures with a scale of 10^19 solar masses (large number A - 10^19) appeared during the era near and before the hydrogen recombination. Since there are superstructures in the universe, there may be no necessity for the existence of dark energy. For checking the superstructure in the universe by CMB anisotropy, we need to measure CMB angular power spectrum especially around ten degrees across the sky- in more details, While neutrino u is related to electroweak unification, the fourth stable elementary particle 6 may be related to strong-gravity unification, which suggests p + p^- → n + δ^- and that some new baryons appeared in the TeV region. 展开更多
关键词 large number dark matter dark energy stable elementary particle SUPERSTRUCTURE
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Q热LAMP检测方法的建立及应用 被引量:1
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作者 徐丽丽 贾广乐 +1 位作者 李桂兰 张映 《畜牧与兽医》 北大核心 2012年第S1期331-331,共1页
Q热(Q fever)是由贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)感染而引起的一种人畜共患的自然疫源性传染病,动物感染后多呈隐性经过。感染Q热后在早期应用抗生素有效,如果延误治疗,极易导致慢性Q热,不但治疗周期长、易复发,并且死亡率高。建立快... Q热(Q fever)是由贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)感染而引起的一种人畜共患的自然疫源性传染病,动物感染后多呈隐性经过。感染Q热后在早期应用抗生素有效,如果延误治疗,极易导致慢性Q热,不但治疗周期长、易复发,并且死亡率高。建立快速、特异、敏感的检测Q热贝氏柯克斯体病原体的方法对于有效控制Q热感染十分重要。 展开更多
关键词 柯克斯 自然疫源 阳性质粒 Q热LAMP 周期长 动物感染 性标准品 标准曲线 倍比稀释
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