利用流式细胞仪分选土壤中发生自然转化的阳性转化子

为确定土壤中的DNA通过自然转化的方式发生水平基因转移的频率,将1个带有egfp和卡那霉素抗性基因Kanr的质粒DNA添加到自然土壤中,分离菌悬液,上流式细胞仪分选能发出绿色荧光且具有卡那霉素抗性的阳性转化子,确定土壤中发生自然转化的频率小于10^(-7)。分离的菌悬液通过培养基的富集,从39 736 426个细胞中分选获得了82个细胞,最终得到了纯化的阳性转化子,证实土壤中的DNA通过自然转化发生了水平基因转移。

农杆菌介导法转化金针菇不同受体的效率比较

以金针菇(Flammulina velutipes)单核体菌株Dan3和双核体菌株G1的菌丝碎片以及原生质体分别为转化受体,根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA4404为侵染菌株,潮霉素为筛选标记,绿色荧光蛋白编码基因(egfp)为外源基因,进行农杆菌介导转化金针菇。结果显示:金针菇双核体菌株G1的菌丝碎片作为受体时转化效率最高,为40.31%;单核体菌株Dan3的原生质体作为受体时转化效率最低,为21.87%。

胡杨大片段基因在拟南芥中的表达及耐盐性分析

以根癌农杆菌为介导,利用拟南芥作为受体植物进行胡杨基因大片段的转化。共将1 570个胡杨BIBAC克隆进行了拟南芥转化实验,其中利用抗生素平板筛选,有590个克隆得到了转基因拟南芥,利用PCR进行检测后得到结果跟卡那平板筛选后的结果吻合。对得到的转基因拟南芥进行不同浓度Na Cl筛选(150和175 mmol/L),共得到10个有耐盐表现的克隆;进一步验证试验证实,有两个株系具有稳定的耐盐表现,分离出T2纯合系。对于所获得的转化子进行播种观察得到了两个表型变化的突变体。本研究对于解析胡杨耐盐机理及挖掘胡杨耐盐基因资源具有重要意义。

一种经济高效的酵母菌落PCR模板DNA制备方法的建立

目的建立一种经济高效、结果稳定的酵母菌落PCR模板DNA制备方法。方法将乙酸乙酯处理与高温破壁相结合,建立乙酸乙酯-高温破壁法制备酵母菌落PCR模板DNA,并以此方法对酵母进行目的基因扩增与阳性转化子的筛选。同时,以酵母基因组DNA及高温破壁法制备的模板作为对照。结果乙酸乙酯-高温破壁法制取的模板可直接用于菌落PCR扩增目的基因片段以及筛选阳性转化子,与提取酵母基因组DNA相比,采用乙酸乙酯-高温破壁法制取模板的准确率可达90%以上,而高温破壁法制备模板结果不稳定。结论本实验建立的方法简单高效,结果稳定,成本低廉,可满足大规模筛选阳性转化子。

2016-01 一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌

一种高效表达中华绒螯蟹甲壳素的酿酒酵母工程菌,属于生物技术领域。本方法通过将中华绒螯蟹抗脂多糖因子Es Crustin的c DNA克隆至载体质粒p HAC181上,克隆成功的阳性转化子经过测序验证后,再利用同源重组的方法,将目的基因整合于酿酒酵母菌株中GAL1启动子下游,在半乳糖的诱导下,将目的蛋白Es Crustin高效表达。