微量限制性酶切法快速鉴定阳性重组克隆

介绍了一种简便的能在 1h内鉴定阳性重组克隆的方法。该方法准确性高于PCR法 ,比常规先小量提取质粒再酶切鉴定的方法简便、快速。同时配制的 1种适合多种酶切反应的缓冲液 ,每种限制性内切酶在该缓冲液中的活性与其最适条件下的活性相当。 2种或 2种以上的酶切反应可以同时在这种缓冲液中进行 ,不用更换缓冲液一步完成。

用PCR法快速筛选中国对虾含微卫星的重组阳性克隆

运用PCR法在中国对虾的小片段基因组文库中快速筛选含有微卫星序列的重组阳性克隆。PCR中使用的引物为载体pGEM - 3zf(+)上多克隆位点两侧的T7/Sp6启动子引物和根据微卫星核心重复序列设计的STR引物 :STR1:5’ -ATATATATATATAT - 3’ ;STR2 :5’ -TCTCTCTCTCTCTC - 3’。直接使用含有重组克隆的菌液 ,在PCR反应前增加一段裂解细菌的高温。筛选出来的含有微卫星序列的重组阳性克隆经DNA测序验证。结果证明 ,采用PCR方法用菌液快速筛选含有微卫星序列的重组阳性克隆完全可行 ,而且具有简便、快速、高效。

PCR在消减文库构建中的应用

目的 :消减文库构建过程中 ,用PCR技术快速筛选重组阳性克隆。方法 :将白色单菌落加入氨苄抗性LB培养液中 ,37℃摇振培养过夜 ,取细菌悬液作PCR模板。结果和结论 :以PCR方法筛查重组阳性克隆 ,可以简便快速鉴定重组阳性克隆 ,不需提取质粒。筛选重组阳性克隆可直接用细菌悬液作PCR模板 ,在消减文库构建时 ,能大大提高工作效率。