阳离子交换色谱法同时测定啤酒和鲱鱼精脱氧核糖核酸中的碱基和核苷

建立了测定啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的阳离子交换色谱法。采用强阳离子交换柱,以水(A)和稀H2SO4(B,pH 2)为流动相,梯度洗脱:0～15 min,0～50%B。6种核苷和碱基(次黄嘌呤、鸟苷、胞苷、胞嘧啶、鸟嘌呤和腺嘌呤)在18 min内实现基线分离,UV检测波长为254 nm。实验表明,6种核苷和碱基的工作曲线的线性范围为0.1～100 mg/L;检出限为0.009～0.068 mg/L(S/N=3),峰面积和保留时间的相对标准偏差(RSD)分别为1.3%～2.2%和1.6%～3.1%。将本方法用于啤酒和鲱鱼精DNA中的碱基和核苷的分析,平均回收率为89.5%～102.9%。

单柱阴离子排斥-阳离子交换色谱法同时测定市售瓶装水中的阴、阳离子

研究了单柱阴离子排斥 -阳离子交换色谱法 ,使用电导检测器对 SO2 -4 、Cl-、NO-3 、F-、Na+ 、NH+4、K+ 、Mg2 + 和 Ca2 + 等阴阳离子同时进行简便、有效的分离和测定。讨论了淋洗液浓度和流速对各离子保留时间及电导测定的影响 。

柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量比较

目的:比较柱前衍生高效液相色谱法(HPLC法)和柱后衍生阳离子交换色谱法(AARO法)测定人胎盘组织液中18种氨基酸含量的差异。方法:HPLC法采用C18柱和2,4-二硝基氯苯(DNCB)进行柱前衍生化,加入0.1 mol獉L^(-1)硼砂缓冲液(p H=9.1),进行测定;AARO法采用强酸性阳离子交换色谱柱和柱后衍生化,直接测定。结果:柱前衍生高效液相色谱法和柱后衍生阳离子交换色谱法的重复性考察,AARO法各组分RSD为0.91%~1.84%,HPLC法RSD为1.04%~1.87%。结论:柱后衍生阳离子交换色谱法与柱前衍生高效液相色谱法测定人胎盘组织液种18种氨基酸,均可采用,两种方法对测定上述各氨基酸结果一致性较好,但柱前衍生HPLC法可能易造成衍生不彻底和衍生物不稳定。

阳离子交换色谱法测定私炒炸药中硝酸铵含量

建立阳离子交换色谱法定量分析私炒炸药样品中硝酸铵含量的方法。采用IonPac CS12A阳离子交换色谱柱分离样品,电导检测器测定硝酸铵含量。线性方程为Y=1.743 8X+0.029,相关系数r=0.999 8,线性范围为1～30 mg/L,最低检测浓度为0.021 6 mg/L,平均回收率为97.76%,相对标准偏差0.849%。该方法具有操作简便,灵敏、准确、重现性好等特点,适用于公安基层办案工作的需要。

柱后衍生阳离子交换色谱法同时测定大蒜中18种水解氨基酸

目的:建立一种柱后衍生阳离子交换色谱法同时测定大蒜中18种氨基酸含量的方法。方法:采用线性梯度洗脱,进样量为50μL,于440nm(脯氨酸)和570nm(其余氨基酸)波长下进行柱后衍生化检测分析,根据色谱分离效果选定最佳检测方法,对比并计算大蒜中18种水解氨基酸与游离氨基酸的含量。结果:在一定的浓度范围内,各种氨基酸的线性关系良好,相关系数r均大于0.9977,其中谷氨酸的含量最高,胱氨酸的含量最低。结论:水解氨基酸色谱分离情况优于游离氨基酸,方法准确度和灵敏度高,具有良好的重复性和回收率,可选用该法对大蒜中多种氨基酸进行同时测定。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定酱油中38种游离氨基酸含量

建立了一种同时测定酱油中38种游离氨基酸的柱后衍生阳离子交换色谱法。样品采用乙醇和冷冻沉淀双重净化,离心后取上清液经阳离子交换色谱柱分离,与茚三酮衍生反应,用紫外检测器检测。结果表明38种游离氨基酸在10~250 nmol/mL范围内线性关系良好,方法检出限介于1.5~19.0 mg/kg之间,在50,100,200 nmol/mL加标水平下,方法的平均回收率介于89.6%~100.8%之间,相对标准偏差介于1.7%~7.2%之间。方法稳定,灵敏度高,适用于酱油中38种游离氨基酸的分析检测。

柱后衍生阳离子交换色谱法同时测定新疆产贝母中17种氨基酸的含量

目的:建立同时测定新疆产贝母中17种氨基酸含量的方法。方法:采用阳离子交换色谱柱分离17种氨基酸;采用柱后衍生阳离子交换色谱法测定药材中17种氨基酸的含量:色谱柱为LCAK 06/Na柱,流动相A为柠檬酸三钠11.9 g、柠檬酸6 g、苯酚1g,加水溶解,再加65 m L甲醇和6 m L浓盐酸,加水定容(调p H至3.4),流动相B为柠檬酸三钠11.9 g、氢氧化钠2.8 g、苯酚1 g、硼酸5.0 g,加水溶解并定容(调p H至10.8)(梯度洗脱),流速为0.45 m L/min(A泵)、0.25 m L/min(M泵),检测波长为440 nm(脯氨酸)、570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL。结果:天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸和脯氨酸检测浓度线性范围均为20~400 nmol/m L(除胱氨酸10~200 nmol/m L)(r均大于0.989 0);精密度、重复性、稳定性试验的RSD<2.0%;检测限除胱氨酸外(0.08 nmol/m L)其余氨基酸均为0.16 nmol/m L;加样回收率为98.5%~99.5%(RSD为0.06%~0.21%,n=6)。结论:该方法操作简便,精密度、稳定性、重复性好,可用于新疆产贝母中氨基酸含量的同时测定。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定缤菲美肤养润抑菌凝胶中氨基酸的含量

采用阳离子交换色谱柱分离氨基酸,通过柱后衍生化检测分析,梯度洗脱,其中溶液泵(A泵)流速为0.50 mL/min,茚三酮泵(M泵)流速为0.25 mL/min,检测波长为440 nm(脯氨酸)和570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL,建立了缤菲美肤养润抑菌凝胶中氨基酸的含量测定方法。结果表明,各氨基酸检测的线性关系良好;精密度(相对标准偏差,RSD)范围0.77%~1.30%,重复性(RSD)范围0.87%~1.96%;平均回收率范围95.81%~102.45%。所建立的分析方法准确,具有良好的重复性和回收率,可作为氨基酸的定量分析方法。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定甘草中18种氨基酸的含量

目的建立柱后衍生阳离子交换色谱法测定甘草中18种水解氨基酸含量的方法。方法采用盐酸溶液水解样品,分别用不同p H值缓冲溶液进行梯度洗脱,以磺酸基阳离子交换色谱柱(4.6mm×150mm)对待测组分进行分离,通过柱后衍生化进行检测分析。柱流速为0.45m L/min,衍生化试剂流速为0.25m L/min,检测波长为440nm(脯氨酸)和570nm(其他氨基酸);进样量50μL。结果 18种氨基酸在45min内达到基线分离(分离度≥1.54);各组分平均回收率为82.2%~95.0%;在20nmol/m L^400 nmol/m L浓度范围内线性关系良好(r≥0.9893);检出限≤0.04 mg/L。结论此方法简便、灵敏、准确且可靠,用于甘草药材中18种水解氨基酸的测定,结果满意。

强阳离子交换色谱法测定阿胶中三聚氰胺残留量

建立用强阳离子交换色谱法测定阿胶中三聚氰胺残留量的测定方法。色谱柱:Luna-SCX强阳离子色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲溶液(10∶90)(称取6.8g磷酸二氢钾,加水800ml完全溶解后,用磷酸调节pH至3.0,用水稀释至1L);流速:1.0 mL.min-1;柱温:35°C;检测波长:240nm;进样量:10μl。结果表明:三聚氰胺在0.836μg～2.508μg范围内呈线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.2%,RSD=0.93%(n=9)。此方法简便可行,准确、灵敏、重现性好,适用于阿胶中三聚氰胺残留量的测定。

阳离子交换高效液相色谱法快速测定蔬菜中灭蝇胺的残留量

取10 g蔬菜样品,加入20 mL体积比1∶99的乙酸-乙腈混合溶液,振荡提取20 min,加入6 g无水硫酸镁,振荡5 min,离心2 min,分取4 mL上清液,过活化好的氨基固相萃取柱,收集全部流出液。用2 mL体积比3∶1的乙腈-甲苯混合溶液洗脱柱子,收集洗脱液并合并至上述流出液中。所得溶液于40℃氮吹至近干,用1.0 mL体积比65∶35的含0.2%(体积分数)乙酸的20 mmol·L^(-1)乙酸钠溶液和乙腈的混合溶液(流动相)复溶,涡旋1 min,过0.22μm滤膜,滤液供高效液相色谱仪分析。在ZORBAX 300-SCX强阳离子交换色谱柱上以流动相等度洗脱分离滤液中的目标物,外标法定量。结果显示,灭蝇胺的质量浓度在0.02~2.00 mg·L^(-1)内和峰面积呈线性关系,检出限(3S/N)为0.006 mg·kg^(-1)。按照标准加入法进行回收试验,回收率为83.6%~90.5%,测定值的相对标准偏差(n=6)为1.5%~9.0%。方法用于43批蔬菜样品的分析,灭蝇胺的检出率为28%,有3批豇豆中灭蝇胺的残留量超过GB 2763—2021规定的限量。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸含量

目的:建立柱后衍生阳离子交换色谱方法,测定甘肃紫斑牡丹花粉氨基酸的含量。方法:样品加6 mol·L^(-1)盐酸于110℃水解22 h。采用柱后衍生阳离子交换色谱法,对甘肃产紫斑牡丹花粉氨基酸的含量进行分析;色谱柱:LCAK06/Na型磺酸基强酸性阳离子交换树脂色谱柱(4.6 mm×150 mm,5μm),梯度洗脱,其中A泵(溶液泵)流速为0.45 m L·min^(-1),M泵(茚三酮泵)流速为0.25 m L·min^(-1),检测波长为440 nm(脯氨酸)和570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL。结果:该测定方法中天冬氨酸、苏氨酸、丝氨酸、谷氨酸、脯氨酸、甘氨酸、丙氨酸、胱氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸、组氨酸、赖氨酸、精氨酸的线性关系良好;精密度RSD范围为0.10%~1.6%,重复性RSD范围为0.20%~1.5%;平均回收率(n=6)在89.5%~98.2%之间,RSD在0.81%~2.9%之间。样品中所含氨基酸的范围为4.13~44.23 mg·g^(-1),破壁前后所测得氨基酸含量无显著差异。结论:所建立的分析方法可作为紫斑牡丹花粉中氨基酸的定量分析。

柱后衍生阳离子交换色谱法测定桦菌芝中氨基酸的含量

目的:建立桦菌芝中氨基酸的含量测定方法。方法:采用阳离子交换色谱柱分离17种氨基酸,通过柱后衍生化检测分析。色谱柱为磺酸基强酸性阳离子交换树脂LCAK06/Na型(4.6 mm×150 mm),采用线性梯度洗脱,其中A泵(溶液泵)流速为0.45 mL.min-1,M泵(茚三酮泵)流速为0.25 mL.min-1;检测波长为440 nm(脯氨酸)和570 nm(其余氨基酸);进样量为50μL。结果:该方法中各氨基酸的线性关系良好;精密度RSD范围0.28%～1.67%,重复性RSD范围0.50%～2.13%;平均回收率为98.7%。结论:本研究建立的分析方法准确,灵敏度高,具有良好的重复性和回收率,可作为中药材中氨基酸的定量分析和研究方法。

平台化高通量pH梯度阳离子色谱法在单克隆抗体电荷异质性分析中的应用研究

目的:建立应用pH梯度分离的高通量、平台化高效液相阳离子交换色谱法,用于单克隆抗体电荷异质性分析。方法:利用不同pH的三羟甲基氨基甲烷、咪唑、哌嗪缓冲液组成pH梯度进行梯度洗脱,采用相同色谱柱、流动相和分离梯度对不同等电点的单抗进行分离。结果:用该法对美国药典收录的3种单抗—贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗进行检测,并与对应各论中记载的盐梯度方法比较,结果显示3种单抗主峰与酸区、碱区的分离度均有改善,贝伐珠单抗分离度分别提高了44%和500%;曲妥珠单抗分离度分别提高了83%和233%;利妥昔单抗酸区分离度由无法给出提高到0.7,碱区分离度提高了10%。针对贝伐珠单抗的方法进行再次优化(提高40%通量)并开展方法学验证。结果显示方法专属性良好,高温破坏后可观察到酸区和碱区杂质均有趋势性增加;精密度良好,重复性实验中主峰保留时间RSD为0.12%,中间精密度实验中酸区、主峰、碱区百分比峰面积RSD均小于2%;准确度良好,酸区、主峰、碱区在5个不同的浓度级别中回收率总体平均值分别为100.4%,101.0%,101.4%;线性良好,蛋白含量0.8~1.2 mg·mL^(-1)范围内酸区、主峰、碱区峰面积均与样品浓度呈线性关系,主峰与碱区线性相关系数R^2均大于0.999,酸区R^2为0.988;耐用性良好,检测条件发生一定变化时,酸区、碱区和主峰的百分比峰面积测定RSD均小于3%。结论:建立的平台化pH梯度方法适用于不同单抗的电荷异质性分析,且具有良好的分离度,为单抗的研究和开发提供了一种通量更高的分离手段和分析方法。

1998~1999年上海市区酸雨状况监测研究

在上海市区设置五个采样点监测上海市区 1 998～ 1 999年的酸雨状况 ,并采用单柱离子排斥 -阳离子交换色谱系统同时分离和测定了雨水中的阴、阳离子。结果表明 ,上海市区 1 998、1 999年的酸雨出现频率分别为 2 4 .2 %和 2 1 .0 %。酸性降水主要集中在梅雨季节 ,说明天气条件的变化已成为上海市区酸雨的主要外因。作为雨水中的主要酸性阴离子 ,1 999年与 1 998年相比 ,SO2 - 4 的平均浓度有所降低 ,而 NO- 3 的平均浓度则有明显增加。

4种方法筛查血红蛋白病的探讨

目的比较4种方法(电泳法、wHPLC、MCV法、一管法)筛查Hb病的检出效能及其准确性,为临床寻求一种较理想的筛查方法,提高实验诊断率。方法选择2007-2008年间在金域医学检验中心进行婚检、孕检、产检及体检标本9203例,同时采用电泳法、wHPLC(弱阳离子交换色谱法)、MCV法(平均红细胞体积测定)、红细胞脆性实验(一管法)进行检测,对1523例疑为Hb病筛查实验结果进行回顾性分析。结果4种方法筛查Hb病的检出率分别为16.5%、16.5%、16.8%、8.3%。准确率分别为90%、92%、96%、52%,4种筛查方法检出率及准确率经统计学分析,差异有统计学意义(P<0.01)。电泳法、wHPLC法、MCV法对筛查Hb病检出率明显高于一管法。结论联合应用电泳法、wHPLC(弱阳离子交换色谱法)及MCV法,能有效地检出Hb病患者。红细胞脆性实验(一管法)存在一定的漏检率,筛查效能差,不具备单独应用的临床价植。

海藻及其混伪品中17种氨基酸的含量测定

目的:建立海藻及其混伪品中17种氨基酸的含量测定方法并进行聚类分析,为海藻药材的质量控制提供依据。方法:取18批样品(S1~S6为真品、S7~S18为混伪品),经酸水解后,采用氨基酸全自动分析仪测定氨基酸含量。色谱柱为LCAK06/Na型磺酸基强酸性阳离子交换树脂分离柱,流动相为缓冲液-再生液系统(梯度洗脱),流速为洗脱泵0.45 mL/min、衍生泵0.25 mL/min,检测波长为440 nm(脯氨酸)、570 nm(其余氨基酸),进样量为50μL。采用PASW Statistics 18.0软件,以“平方Euclidean距离”为度量标准使用组间联接的聚类方法对18批样品进行聚类分析。结果:17种氨基酸均分离良好,空白无干扰;其质量浓度与峰面积的线性关系良好(r均大于0.998),线性范围上下限分别为48.06μg/L(胱氨酸)、1.501μg/L(甘氨酸);精密度、重复性、稳定性试验RSD均小于2%;平均加样回收率为90.60%~101.56%(RSD为0.88%~2.15%,n=6)。海藻及其混伪品样品中均检出17种氨基酸,其中谷氨酸、天冬氨酸、亮氨酸、丙氨酸、甘氨酸、缬氨酸的含量相对较高。聚类分析结果显示,18批样品可以聚为4类,S1~S6为一类,S7~S9为一类,S10~S12、S16~S18为一类,S13~S15为一类,与海藻真品与其混伪品的鉴定结果相一致。结论:该方法操作简便、快速、准确度高、重复性好,可用于海藻及其混伪品的氨基酸定量分析及真伪区分。

Isolation of Lysozyme from Chicken Egg White Using Polyacrylamide-based Cation-exchange Cryogel

An effective cation-exchange chromatographic method for lysozyme isolation from chicken egg white is presented, using supermacroporous cryogel grafted with sulfo functional groups. The chromatographic processes were carried out by one-step and sequential elution, respectively. Sodium phosphate buffer （pH 7.8） containing different concentrations of NaC1 is used as elution agent. The corresponding breakthrough characteristics and elution behaviors in the cryogel bed were investigated and analyzed. Purity of lysozyme in the elution effluent was assayed by sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis （SDS-PAGE）. The maximum purity of the obtained lysozyme was about 96%, and the cryogel is demonstrated as a potential separation medium for purification of high-purit lysozyme from chicken egg white.

高效液相色谱法测定重组人纽兰格林的电荷变异体

目的:重组蛋白在表达和纯化过程中,甚至在存放过程中,都有可能产生降解、聚集,错误折叠、翻译后修饰(如:糖基化、氧化、脱酰胺),从而形成不同的表面电荷,影响产品的稳定性、活性和安全性。该研究旨在确定重组人纽兰格林原液中是否存在电荷变异体并对其定量。方法:采用极端的理化变性条件,制备重组人纽兰格林的电荷变异体;用HPLC(阳离子交换色谱柱,Tosoh Bioscience LLC,TOSOH TSK gelSP-STAT(4.6mm×10cm),7μm)分析重组人纽兰格林中的电荷变异体。结果:纯度99%以上的重组人纽兰格林原液,经酸破坏、高温条件下,产生了相对保留时间为1.1,质谱分子量为5786.28,N末端序列未发生变化的电荷变异体。重组人纽兰格林浓度在0.0156 mg/mL^1.25 mg/mL范围内,浓度与峰面积呈现良好的线性关系,y=17187x-309.09 R2=0.9998。专属性好:在流动相A、流动相B、水、重组人纽兰格林缓冲液中无重组人纽兰格林及电荷变异体峰。回收率:重组人纽兰格林在低(0.5mg/mL)、中(1.0mg/mL)、高(1.25mg/mL)3个浓度的回收率分别为99.0%、99.9%、100.7%。重复性:以重组人纽兰格林峰面积计算RSD为0.57%。最低检测限:电荷变异体的最低检测限为:0.16μg。最低定量限:电荷变异体的最低定量限为0.2μg。结论:该方法用于测定重组人纽兰格林电荷变异体,无杂质干扰,方法准确、可靠。

不同加工方式对鹿茸中粗蛋白与水解氨基酸量的影响研究

目的比较不同加工方式及不同部位梅花鹿鹿茸中蛋白质、氨基酸的量差异,旨在为鹿茸的加工及综合利用提供参考依据。方法采用杜马斯燃烧法、阳离子交换色谱法分别对不同加工方式及不同部位的梅花鹿鹿茸中粗蛋白、17种水解氨基酸的量进行测定,比较其差异。结果带血茸粗蛋白的量粉片部位高于排血茸(P<0.01),蜡片、蜂片部位差异均不显著(P>0.05);排血茸与带血茸蜡片、粉片、蜂片部位氨基酸的量差异均不显著(P>0.05)。冻干茸粗蛋白的量蜡片部位低于煮炸茸(P<0.05),粉片部位高于煮炸茸(P<0.01),蜂片部位高于煮炸茸(P<0.05);冻干茸氨基酸的量蜡片部位低于煮炸茸(P<0.01),粉片部位与煮炸茸差异不显著(P>0.05),蜂片部位高于煮炸茸(P<0.01)。鹿茸粗蛋白与氨基酸的量均表现为蜡片部位显著高于粉片、蜂片部位(P<0.05),粉片部位与蜂片部位差异不显著(P>0.05)。结论不同加工方式的鹿茸粗蛋白与氨基酸的量均有差异,整体表现为带血茸高于排血茸,冻干茸高于煮炸茸;蜡片部位显著高于粉片、蜂片部位,粉片与蜂片部位差异不显著;粗蛋白和氨基酸在冻干茸不同部位的分布比煮炸茸更为均匀。