苹果阳离子氨基酸转运蛋白(CAT)的鉴定、比较与表达分析

阳离子氨基酸转运蛋白(CAT)在植物氨基酸转运与氮素代谢中具有重要作用,重要经济作物苹果中尚未见此类蛋白的相关报道。本文利用生物信息学和分子生物学的方法,对苹果CAT (命名为MdCAT)成员进行鉴定、比较与表达分析。根据拟南芥CAT蛋白序列,在苹果基因组中共鉴定出15个MdCAT成员,它们不均衡地位于8条染色体上。大多数MdCAT具有10个及以上的跨膜区,并具有相似的二级结构组成和三维空间构象。遗传进化树分析表明, MdCAT蛋白分为4组(I、II、III和IV),并且4组成员在保守基序分布上,表现出各自的独特性。电子表达谱分析显示, MdCAT广泛表达于各组织中,尤其在花和果实等表达较高,不同成员稍有差异。在果实发育中, MdCAT3/7/6/14等转录丰度有明显的增加,在果实的氨基酸转运中可能扮演关键角色;休眠芽的表达数据提示,部分MdCAT参与到苹果芽的休眠过程。除此之外,利用实时荧光定量PCR试验,检测了氮素匮乏状态下MdCAT的相对表达,结果表明MdCAT1/6/10/13响应氮饥饿,可能在氮素代谢中发挥重要作用。

低蛋白饲料补充必需氨基酸对异育银鲫生长、氨基酸转运和mTOR信号通路相关基因的影响

实验以初重为(12.71±0.11)g的异育银鲫“中科5号”(Carassius gibelio var.CAS V)为研究对象,基于异育银鲫必需氨基酸需求量,探究在低蛋白饲料中补充必需氨基酸对异育银鲫生长、消化、氨基酸转运和mTOR信号通路相关基因表达的影响。实验设计3组等能饲料:CON组(35%粗蛋白)、LP组(28%粗蛋白)和LP+EAA组(28%粗蛋白+晶体氨基酸),养殖周期为50d。实验结果显示:低蛋白饲料中补充必需氨基酸显著提高异育银鲫生长性能(P<0.05),并与CON组无显著差异(P>0.05);LP+EAA组的肝脏谷草转氨酶活性显著高于LP组(P<0.05),而谷丙转氨酶活性各组间无显著差异(P>0.05);补充必需氨基酸对肠道中胰蛋白酶和淀粉酶活性有显著影响(P<0.05),而对糜蛋白酶和脂肪酶无显著影响(P>0.05)。肠道中cat2、asct2和b0at1三种氨基酸转运蛋白显著上调(P<0.05),LP组的b0,+at的相对表达量显著下调(P<0.05),而pept1的表达各组间无显著差异(P>0.05);肝脏中LP组tor相对表达量显著降低(P<0.05),LP+EAA组的s6k1表达水平显著上调(P<0.05),而4ebp2和eif4e的相对表达量在各组间无显著差异(P>0.05);背肌中LP+EAA组的tor表达水平显著上调(P<0.05),LP组的eif4e表达水平显著下调(P<0.05),而s6k1和4ebp2的相对表达量在各组间无显著差异(P>0.05)。综上所述,向异育银鲫“中科5号”幼鱼饲料中补充必需氨基酸至需求量可以将饲料蛋白水平由35%降至28%,而不会对生长、氨基酸转运和mTOR信号通路相关基因表达等产生负面影响。

微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白CpAAT1的亚细胞定位研究

目的探究微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的亚细胞定位。方法本研究以微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白1(Cryptosporidium parvum Amino acid transporter 1,CpAAT1)为研究对象,设计合成了特异性多肽片段,免疫家兔制备多克隆抗体。利用Western blot验证该抗体的特异性,通过间接免疫荧光的方法对该蛋白的亚细胞定位进行了分析。结果CpAAT1多克隆抗体能特异性识别虫体天然蛋白,后者在微小隐孢子虫生活史的各个时期均有表达。子孢子时期,CpAAT1定位于虫体表膜;无性生殖期时该蛋白定位在成熟的裂殖子表膜;在有性生殖阶段,雌雄配子体均可被该抗体标记。结论本研究为进一步探索微小隐孢子虫氨基酸转运蛋白的转运机制提供了一些新线索。

尾加压素Ⅱ对大鼠血管外膜阳离子氨基酸转运体的影响

目的观察尾加压素Ⅱ（UII）对大鼠主动脉血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1、CAT-2B）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）基因表达影响。方法 SD大鼠24只,250~300g,随机分为空白对照组、UII组（10-9和10-8mol.L-1）和脂多糖（LPS）阳性对照组,每组6只。分离雄性SD大鼠胸主动脉外膜,分别加入单纯孵育液、不同浓度UII和LPS孵育6h。测定孵育液中亚硝酸盐（NO2-）含量;RT-PCR方法测定CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA基因表达。结果与对照组比较UII（10-9~10-8.L-1）刺激血管外膜NO2-生成增加（27%,P〈0.05,和49%,P〈0.01）;UII组血管外膜阳离子氨基酸转运体（CAT-1和CAT-2B）mRNA水平增加（均P〈0.01）,iNOS mRNA表达增加（P〈0.01）。结论 UII可激活血管外膜CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO释放从而引起血管的扩张。

Apelin激活大鼠主动脉阳离子氨基酸转运体的表达

目的研究Apelin对大鼠离体主动脉阳离子氨基酸转运体(CAT)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因表达的影响。方法体外血管薄片孵育,测定孵育液中亚硝酸盐(NO2-)含量、RT-PCR方法测定阳离子氨基酸转运体CAT-1、CAT-2B和iNOS mRNA表达水平。结果大鼠主动脉孵育3h,Apelin(10-9-10-7mol/L)呈浓度依赖地刺激血管NO2-生成增加(33%、46%和69%,均P<0.01)。Apelin刺激血管L-Arg转运体CAT-1和CAT-2B mR-NA基因的表达上调,分别较对照组增加1.11倍和1.28倍(均P<0.01),而iNOS mRNA的表达并无明显改变(P>0.05)。结论Apelin激活血管组织阳离子氨基酸转运体CAT-1和CAT-2B基因表达,其变化可能参与了NO的释放从而引起血管的扩张。

L型氨基酸转运蛋白1的表达对非霍奇金淋巴瘤临床病理特征和预后的影响

目的:检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)组织中L型氨基酸转运蛋白1(LAT1)的表达,分析LAT1对患者临床病理特征和预后的影响。方法:收集2017年1月至2019年4月在本院接受治疗的NHL患者92例,免疫组织化学检测NHL组织中LAT1的表达,比较不同病理特征(包括性别、Ann Arbor分期、结外浸润、Ki-67)患者组间LAT1的表达差异,单因素和多因素Cox回归分析影响患者死亡的危险因素,受试者工作曲线(ROC)检测NHL组织中LAT1阳性细胞百分比对患者死亡的预测价值,分析LAT1阳性细胞百分比对患者生存率的影响。结果:LAT1在NHL组织中呈阳性表达,Ann Arbor分期III期和IV期组LAT1高表达率高于I期组,结外浸润组LAT1高表达率高于无结外浸润组,Ki-67阳性表达组LAT1高表达率高于阴性表达组,比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。LAT1高表达组治疗3个疗程后的缓解率为70.7%,低于低表达组的91.2%,比较差异有统计学意义(P<0.05)。Ann Arbor分期III期、IV期、结外浸润、Ki-67阳性表达和LAT1表达增加(即LAT1阳性细胞比例评分≥2)为患者死亡的危险因素。LAT1阳性细胞百分比预测NHL死亡的截断值为45.6%,曲线下面积为0.905(95%CI:0.897-0.924)。LAT1高水平组(LAT1阳性细胞百分比≥45.6%)3年生存率为50.00%,低于LAT1低水平组的78.26%(P<0.05)。结论:LAT1在NHL组织中表达水平增加,影响患者的肿瘤分期和结外浸润,是患者死亡的危险因素。

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2-HA融合蛋白的构建及鉴定

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白SNAT2在哺乳动物组织中广泛表达,具有转运中性氨基酸的功能,在谷氨酸-谷氨酰胺循环、肝脏糖质新生等生物通路中发挥重要作用.为了方便测定SNAT2在细胞膜上的表达和定位,本研究采用PCR扩增和酶切连接将HA标签蛋白与SNAT2的C末端连接,构建了真核生物表达载体pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体.用脂质体转染法将该表达载体瞬时转染到HEK293T细胞中,通过Western blot法检测到SNAT2-HA融合蛋白在细胞膜上的正确表达和定位.pBK-CMVΔ(1098-1300)-SNAT2-HA表达载体的成功构建,为今后对SNAT2的结构和功能的研究提供了有效方法.

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)多克隆抗体的制备

钠离子依赖的中性氨基酸转运蛋白2(SNAT2)属于SLC38家族,参与小的中性氨基酸跨膜转运,在哺乳动物组织中广泛表达.SNAT2的功能紊乱可以导致许多神经性疾病,如阿尔茨海默症、帕金森症等.采用PCR方法扩增得到SNAT2氨基端75个氨基酸的编码序列,构建重组质粒pET28a-SNAT2-75aa,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3)中,通过IPTG诱导表达重组蛋白.利用组氨酸标签蛋白经镍柱亲和纯化后得到了纯度在95%以上的SNAT2氨基端蛋白SNAT2-75aa,将其作为免疫原免疫新西兰大白兔,从而获得SNAT2多克隆抗体.采用巯丙基琼脂糖凝胶6B(Thiopropyl sepharose)固定抗原亲和纯化法进一步对该抗体进行纯化,纯化后的抗体效价至少提高10倍.蛋白免疫印迹确定该抗体对SNAT2具有高度的特异性,表明SNAT2多克隆抗体制备的成功,为进一步研究SNAT2蛋白的结构和功能奠定了生化基础.

植物氨基酸转运蛋白的研究进展

氨基酸对植物的生长与发育必不可少,氨基酸转运蛋白在植物体内各种氨基酸的转运过程中发挥极其重要的作用。目前已经鉴定了多种氨基酸转运蛋白,并且许多重要的植物基因组序列已经完成了拼接和组装工作,但人们对氨基酸转运蛋白的功能与调节还知之甚少。本文综述了植物氨基酸转运蛋白的进化、表达、功能及调控方面的新进展,以期为主要粮食作物的遗传改良提供借鉴与参考。

不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1mRNA表达量的影响

本试验旨在研究不同蛋白质水平日粮对肥育猪肠道氨基酸转运载体CAT1 mRNA表达量的影响。选取36头杜×长×大三元杂交阉公猪,平均体重(55.6±7.0)kg,随机分为3个处理,分别饲喂13%(低蛋白质组)、16%(对照组)和19%(高蛋白质组)的蛋白质水平日粮,每个处理12个重复(单栏饲养)。于饲喂后第45天,每组随机屠宰5头,分离肠道(十二指肠、空肠和回肠),运用Real-Time PCR技术,以β-actin为内参基因,研究CAT1 mRNA相对于β-actin的表达量。结果表明,在饲喂高蛋白质日粮时,与对照组相比,氨基酸转运载体CAT1 mRNA相对于内参β-actin mRNA的表达量,在肥育猪十二指肠、空肠和回肠中分别提高了58.4%、23.2%和24.5%,但差异不显著(P>0.05);而饲喂低蛋白质日粮时,CAT1 mRNA相对表达量在肥育猪十二指肠和空肠中则分别提高93.1%和122.6%,差异显著(P<0.05),而在回肠中降低了14.3%,差异不显著(P>0.05)。高蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达量的影响不大,而低蛋白质水平日粮对肥育猪肠道CAT1 mRNA相对表达量的影响较大,尤其是对空肠CAT1 mRNA的相对表达量。

用低交换容量聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂柱色谱分离中性氨基酸

通过磺化苯乙烯 -二乙烯苯共聚物或商品化的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 ( 0 0 1× 7)的逆磺化反应 ,得到一系列不同交换容量的聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂 .研究了丙氨酸和缬氨酸及缬氨酸和亮氨酸在这些树脂柱上的色谱分离 .结果表明 ,用两种方法得到的树脂对丙氨酸和缬氨酸的色谱分离性能基本相同 ;同时中性氨基酸与聚苯乙烯型强酸性阳离子交换树脂之间的作用包括离子作用和疏水作用 ,且二者之间存在协同作用 .

大肠杆菌氨基酸转运蛋白的研究进展

总结了大肠杆菌氨基酸的原初主动转运蛋白、次级主动转运蛋白和易化扩散载体在其种类、功能、结构和转运机制方面的研究进展。详细介绍了氨基酸与势能离子相伴的同向共转运和反向共转运,并提出了大肠杆菌氨基酸转运研究中存在问题及展望。

视神经挫伤对大鼠视网膜谷氨酰胺合酶和兴奋性氨基酸转运蛋白-2表达的影响

目的通过谷氨酰胺合酶(glutamine synthetase,GS)、兴奋性氨基酸转运蛋白-2(GLT-1)表达的改变,研究视神经挫伤后视网膜谷氨酸代谢变化的机制。方法建立大鼠右眼视神经挫伤模型48只。术后1d、7d、14d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜GS、GLT-1的表达。结果视神经挫伤后1d、7d、14d,大鼠玻璃体谷氨酸浓度升高,与对侧眼比较差异具有统计学意义(P=0.0011、P=0.0000、P=0.0000)。视神经挫伤后1d,GS高表达(P=0.0054);挫伤后7d,GS表达与对侧眼比较差异无统计学意义(P=0.1379);挫伤后14d,GS低表达(P=0.0333)。视神经挫伤后1d、7d,GLT-1的表达与对照组的差异无统计学意义(P=0.1985、0.6537);但挫伤后14d,GLT-1低表达(P=0.0403)。结论视神经挫伤后玻璃体谷氨酸浓度升高,与视网膜GS、GLT-1的表达降低有关。

视神经损伤对大鼠视网膜兴奋性氨基酸转运蛋白-1表达的影响

目的研究视神经损伤对兴奋性氨基酸转运蛋白-1(EAAT-1)的表达以及对视网膜谷氨酸(Glu)摄取的影响。方法建立大鼠右眼视神经损伤模型48只。术后1、7、14 d以高效液相色谱分析检测大鼠玻璃体谷氨酸浓度;通过免疫组织化学检测大鼠视网膜EAAT-1的表达。结果视神经损伤后1、7、14 d,实验眼玻璃体谷氨酸浓度升高,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1 h=10.171,P=0.000;t7 h=3.871,P=0.006;t14 h=5.599,P=0.001);实验眼视网膜EAAT-1表达降低,与对照眼比较,差异均有统计学意义(t1 h=3.460,P=0.011;t7 h=4.182,P=0.004;t14 h=4.077,P=0.005)。结论视神经损伤后视网膜内谷氨酸积聚,与视网膜EAAT-1的表达降低有关。

两种A类氨基酸转运蛋白部分功能差异的研究

应用重组Vaccinia病毒表达系统在猴肾成纤维细胞CV-1中瞬时表达大鼠A类氨基酸转运蛋白GlnT和SAT-2,研究它们转运MeAIB、Ala和Gln的动力学和对多种氨基酸转运亲和性的差异,结合它们的氨基酸序列同源性比较表明:虽然GlnT和SAT-2蛋白的氨基酸序列有较高的同源性,但它们在转运功能上有较大的差异。

氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促癌功能研究

目的研究氨基酸转运蛋白SLC6A14在大肠癌中的表达特征及其促进大肠癌细胞生长的作用。方法采用实时定量荧光PCR(real-time PCR)检测35对大肠癌及癌旁组织中SLC6A14 mRNA的表达水平;Western印迹法检测SLC6A14在大肠癌细胞株HT-29和SW620中的蛋白表达;免疫组化法检测108例大肠癌组织中SLC6A14的蛋白表达并分析其表达强度与患者临床特征的相关性;MTT法和流式细胞术分别检测下调或抑制SLC6A14对大肠癌细胞生长及凋亡的影响。结果SLC6A14 mRNA在大肠癌组织中的表达水平是癌旁组织的(3.98±1.1)倍(P<0.05);SLC6A14在大肠癌细胞株HT-29和SW620中的蛋白表达明显高于肝癌细胞株Huh7,分别是其(4.31±1.46)倍和(3.14±0.93)倍,均P<0.05。免疫组化结果显示SLC6A14在Ⅳ期癌组织中的蛋白表达强度(135.36±24.28)明显高于Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期癌组织(分别为42.87±26.50、75.67±30.25、101.32±32.47,均P<0.001),但其表达水平在不同年龄、性别和肿瘤大小中的表达差异未见统计学意义(P>0.05)。通过siRNA下调SLC6A14在HT-29和SW620中的表达或抑制剂α-MT后,MTT结果显示大肠癌细胞增殖明显减慢,流式细胞术检测Annexin-Ⅴ+/PI-细胞凋亡明显增加,P<0.05。结论SLC6A14在大肠癌组织和细胞株中表达增加并促进癌细胞生长,是大肠癌治疗的潜在靶点。

有机阳离子转运蛋白的药代动力学和药效学

有机阳离子转运蛋白在药物的胃肠道吸收,肝肾消除以及组织的分布中发挥了重要的作用。为了阐明药物转运蛋白在药代动力学、药效、药物毒性以及基因多态性的个体差异,本文从有机阳离子转运蛋白的分子功能、表达调控、基因多态性以及其对机阳离子药物的药代动力学和药效进行了回顾。

二甲双胍疗效与有机阳离子转运蛋白基因多态性关系的研究进展

二甲双胍作为治疗2型糖尿病的一线用药,广泛受到各临床治疗指南的推荐。但是,二甲双胍的临床治疗效果及不良反应存在着显著的个体差异。有机阳离子转运蛋白与二甲双胍在体内的转运和代谢密切相关,研究表明,有机阳离子转运蛋白的基因多态性是影响二甲双胍疗效的重要因素。本文通过总结分析相关文献,综述二甲双胍疗效与有机阳离子转运蛋白基因多态性关系的研究进展,为二甲双胍在临床中的个体化使用提供参考。

昆虫氨基酸转运蛋白的分类与功能

氨基酸是一类在生物体内参与蛋白质合成、细胞生长调节等生理功能的重要小分子物质,也是一些重要生理活性物质的前体。氨基酸的跨膜转运受氨基酸转运蛋白的调节,氨基酸转运蛋白通常能够转运具有相似结构的多种氨基酸。昆虫的氨基酸转运蛋白可分为8个家族,在营养吸收、物质转运、神经系统调节、信号途径调控和病毒感染等方面具有多种重要功能。本文简要综述昆虫氨基酸转运蛋白的分类和功能,为家蚕和其他昆虫的生理及病理研究提供参考。

氨基酸转运蛋白家族成员在膀胱癌中的表达及其临床意义

目的探讨氨基酸转运蛋白家族成员在膀胱癌中的表达及意义。方法免疫组织化学法检测93例膀胱癌患者癌标本中L型氨基酸转运载体1(LAT1)、系统ASC氨基酸转运蛋白2(ASCT2)、胱氨酸/谷氨酸转运体功能亚基(x CT)、Ki-67和CD34的表达。结果 LAT1、ASCT2和x CT的阳性表达率分别为55.9%(52/93)、77.4%(72/93)和65.6%(61/93)。ASCT2的阳性表达与LAT1、Ki-67相关。单因素分析表明,ASCT2表达、疾病分期与总生存期关系密切。而肿瘤直径、疾病分期与无病生存期关系密切。多元回归分析证实,ASCT2表达是膀胱癌患者术后预后差的独立预测因子。结论 ASCT2能够作为膀胱癌患者的预后判断指标。