探讨阳离子牛血清蛋白制备纯化工艺及大鼠动物模型验证

目的 探讨阳离子牛血清蛋白(C-BSA)制备提纯技术并构建其膜性肾病大鼠模型效应平台。方法 采用改良Border法制备C-BSA,采用十二烷基硫酸钠毛细管电泳法测定C-BSA纯度,毛细管电聚焦电泳法测定C-BSA的等电点;用C-BSA混合弗氏佐剂对SD大鼠预免疫1周后,尾静脉注射连续造模4周后进行生化指标检查和病理组织学检查。结果 C-BSA制备产率可达99.1%,纯度为84.56%,等电点为9~10;4周后模型大鼠尿蛋白明显高于对照组(P<0.05),血浆白蛋白含量明显低于对照组(P<0.05);三酰甘油与总胆固醇含量与对照组相比均有明显增加(P<0.05),PASM、HE组织染色显示出类似于早期膜性肾病的病理特征,IgG免疫荧光染色则显示出沿毛细血管壁有大量颗粒状物沉积,足细胞的特异性分子CD2AP、Podocin和Nephrin荧光表达均减弱,透射电镜下显示造模组有明显的足突广泛融合、基底膜增厚免疫复合物团块状沉积。结论 在改良Border法的基础上增加小剂量乙二胺、增加透析频率容易获取高产率纯度及等电点更高的C-BSA,大鼠动物实验造模成功率及稳定性更佳。