阳离子纳泡的制备及其性质研究

目的:制备一种纳米级阳离子脂质超声造影剂,评价其理化性质及其稳定性,评价其体外与体内显像效果,验证其对肿瘤的被动靶向作用,评价其体内外毒性。方法:采用薄膜水化法,脂膜材料中加入硬脂酸修饰后的PEI600制备阳离子纳泡,显微镜下观察纳泡形态并计算纳泡浓度,Zetasizer Nano纳米粒度和电位仪测定其表面电位、粒径等物理特性,考察其浓度、粒径随时间变化情况,细胞黏附实验验证阳离子纳泡表面电荷的正电性,评价纳泡体外造影效果,免疫荧光染色观察其肿瘤被动靶向作用,CCK8实验评价其体外毒性,经尾静脉注射阳离子纳后组织切片观察其对SD大鼠体内毒性作用。结果:阳离子纳泡形态规则,稳定性好,纳泡平均粒径为(484.8±8.5)nm,平均表面电位为(24.78±3.52)mV;一周内纳泡的平均粒径、浓度未发生显著改变,阳离子纳泡具有较好的体外造影效果,体内超声造影显示,自制阳离子纳泡能够显著增强心脏和皮下移植瘤显影,心脏增强显像时间超过20min。结论:(1)自制纳泡表面带正电荷且具备较好的粒径、浓度稳定性;(2)自制的阳离子纳泡具有良好的声学特性;(3)自制阳离子纳泡具有较好的肿瘤被动靶向能力;(4)自制阳离子纳泡具有较低的毒性,是安全的超声造影剂。

恢复connexin26表达联合载酵母菌胞嘧啶脱氨酶自杀基因纳泡杀灭膀胱癌细胞

目的分析载双基因的阳离子纳泡联合超声靶向微泡破坏技术进行基因转染的有效性,探索恢复或上调膀胱癌细胞的缝隙连接蛋白connexin26(Cx26)表达,能否增强自杀基因系统(yeast cytosine deaminase/5-fluorocytosine,YCD/5-FC)的旁观者效应,提高杀灭肿瘤细胞的效率。方法阳离子纳泡结合超声辐照(US)转染人膀胱癌T24细胞,荧光显微镜及流式细胞仪观测转染效率;qRT-PCR和Western blot检测质粒转染后的mRNA或蛋白相对表达量。将实验分为无处理空白对照、载pc DNA3.1-EGFP纳泡组、载Cx26纳泡组、载YCD纳泡组、载YCD+Cx26纳泡组;通过流式细胞术观察恢复Cx26表达后对膀胱癌细胞凋亡的影响。结果 qRT-PCR、Western blot显示纳泡结合超声辐照成功将目的基因转染并有效表达。恢复Cx26表达后,载YCD+Cx26纳泡组的细胞凋亡率为(60.68±2.61)%,明显高于单载YCD纳泡组的(46.42±2.13)%,差异有统计学意义(P<0.01)。结论恢复缝隙连接蛋白Cx26表达,可改善细胞间通讯连接,加强自杀基因系统YCD/5-FC的旁观者效应,促进肿瘤细胞凋亡,提高杀灭膀胱癌细胞的效率。