两种方法制备阳离子脂质体包裹蛋白转染法的比较

目的 比较不同方法制备包裹蛋白脂质体的包封率和转染率 ,评价蛋白转染的可行性。方法 采用逆相蒸发法和冻融超声法制备包裹人IgG的阳离子脂质体 ,测定包封率并分别转染小鼠脾细胞 ,用流式细胞术、免疫荧光法、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法和免疫印迹法检测转染效果。结果 逆相蒸发法制备的脂质体包封率高于冻融超声法 (P <0 .0 1)。两种方法制备的脂质体转染率无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

人成纤维细胞稳定转染的方法比较

目的采用3种不同的方法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞,从中寻找最佳的稳定转染的方法。方法分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞。24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞。结果电转染有最高的瞬时转染效率(56.8%),稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少(约20d);用阳离子聚合物瞬时转染率低(1.7%),稳定筛选同样可以得到阳性大克隆,但是数量很少且从细胞筛选到扩增至阳性大克隆所用的时间也最多(约30d);阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为39.9%,从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间约25d。结论用电转染法将质粒pEGFP-N1转染人成纤维细胞是最佳的转染方法。

32Dp210细胞稳定转染方法的比较

目的：采用3种不同的方法将质粒pEGFP-CEBP 转染32Dp210,从中寻找最佳的稳定转染的方法.方法：分别采用阳离子聚合物转染、阳离子脂质体转染和电穿孔转染方法,将能表达G418抗性蛋白和增强型绿色荧光蛋白（EGFP）的质粒pEGFP-CEBP转染32Dp210.24h后,荧光显微镜下观察EGFP表达,流式细胞术测定瞬时转染率;通过G418筛选得到稳定转染的细胞.结果：电转染有最高的瞬时转染效率（58.9%）,稳定转染得到的阳性克隆最多,且从细胞筛选到扩增至得到阳性大克隆所用的时间也最少（21d）;用阳离子聚合物瞬时转染率低（1.7%）,阳离子脂质体转染效果居中,瞬时转染率为5.8%,后面两种方法得到的阳性克隆太少,无法筛选到阳性细胞.结论：用电穿孔转染法将质粒pEGFP-CEBP 转染32Dp210是最佳的转染方法.