let-7a荷载AS1411与lipidoid共修饰阳离子脂质复合物的制备

构建了let-7a荷载AS1411与lipidoid共修饰阳离子脂质复合物,并对其理化性质进行考察。合成荷正电荷类脂质材料N,N’-二油酰三羟甲基氨基甲烷(2-氨基乙基)胺(Lipidoid),然后结合乙醇注入法与静电吸附法,制备荷载let-7a的AS1411与lipidoid共修饰阳离子脂质复合物(let-7a/AS1411-Lipoplex),评价其制剂学性质。通过薄层色谱法(TLC)、核磁共振法(~1H-NMR)、傅里叶转变红外法(FT-IR)和液质联用仪(LC-MS)法验证了Lipidoid的结构。所制得let-7a/AS1411-Lipoplex大小规整,平均粒径为70nm,Zeta电位为30mV,AS1411-Lipoplex明显改善let-7a在血清中降解。成功构建可高效荷载let-7a的适配体(AS1411)与lipidoid共修饰的脂质复合物,为后续研究打下基础。

体外实验观察微泡-阳离子纳米脂质体复合物促进HGF基因转染

目的通过生物素-亲和素的特异结合,制备一种高效载肝细胞生长因子(HGF)基因的脂质微泡(LMB)-阳离子纳米脂质体复合物(LMB-CNLP),观察转染情况,探讨其对对数生长期的肝星状细胞株HSC-T6活性的影响。方法将HSC-T6细胞分为载HGF基因的LMB组、LMB-CNLP组和对照组(单纯质粒),超声辐照各组进行HGF转染。以荧光显微镜及流式细胞仪观测转染情况,ELISA试剂盒检测HGF蛋白表达情况,流式细胞仪检测HSC-T6细胞凋亡。结果 LMB-CNLP组HGF基因的转染率为41.29%,明显高于其他2组。转染后的细胞能持续表达HGF,且随着HGF蛋白增多,HSC-T6细胞凋亡率增高。结论超声辐照LMB-CNLP复合物能提高HGF基因在体外培养的HSC-T6细胞中的转染情况,促进HSC-T6凋亡,为基因治疗肝纤维化提供实验依据。

阳离子脂质/DNA复合物气雾剂的制备及其体外细胞转染研究

目的:制备阳离子脂质DOTAP和DNA的复合物(DOTAP/DNA)气雾剂并研究其细胞转染效率。方法:采用改良的Bligh and Dyer萃取法,制备能够在乙醚中均匀分散的不同氮-磷比的DOTAP/DNA复合物,采用定磷法测定载药率、激光粒度分布仪测定粒径分布等参数;进一步灌装DOTAP/DNA复合物气雾剂,以人肺腺癌细胞H1299为模型,检测气雾剂的细胞毒性(细胞相对存活率)和DNA转染效率(荧光强度)。结果:最佳氮-磷比(2∶1)的DOTAP/DNA复合物的载药率可达到(72±1.580)%,粒径为(188.700±42.770)nm;气雾剂的细胞相对存活率可达(91.643±6.970)%,荧光强度可达1.080×105RLU·mg-1。结论:研制的新型DOTAP/DNA复合物气雾剂,其毒性较低,细胞转染效率较高,具有被进一步开发研究成为呼吸道基因输送制剂的潜力。

脂质-聚阳离子-CDKN1B质粒复合物的构建、特性和转染(英文)

目的研究开发一种能有效转染CDKN1B基因进入肺和肝癌细胞的非病毒基因传递系统。方法重组构建了含有CDKN1B序列和EYFP报告基因的质粒。该重组DNA与鱼精蛋白缩合后再与脂质体作用形成脂质-聚阳离子-DNA复合物(lipids-polycation-DNA-complex,LPDs) ,分别用激光粒度仪法和透射电镜法研究该LPDs的理化性质;用该LPDs转染几种肺癌、肝癌细胞;该LPDs中的EYFP在A549细胞中的表达情况用荧光显微镜和流式细胞仪观察和评价;在LLC肺癌细胞、Chang正常肝细胞和7721肝癌细胞中表达的CDKN1B蛋白用Western印迹方法分析。结果该LPDs为凹陷的球状;平均粒径是167 nm,多分散指数为0 .35 ;平均zeta电位为+32 .6 mV;从A549细胞的荧光显微照片可清楚观察到EYFP的表达;A549细胞的流式细胞仪分析结果显示,LPDs的转染效率与阳性对照LipofectAMINE○R的转染效率相当;Western印迹法分析显示,以LPDs装载的CDKN1B质粒在LLC细胞、常细胞和7721细胞中表达CDKN1B蛋白,而裸CDKN1B质粒没有表达。结论脂质-聚阳离子- CDKN1B质粒复合物的构建是成功的。LPDs能够将CDKN1B质粒传递到肺癌细胞和肝癌细胞,并获得高效率的表达。因此,这种基因传递系统有望开发用作肺癌和肝癌的基因治疗传递系统。