阳离子-氯离子联合转运蛋白抑制剂对氯胺酮麻醉模型小鼠的催醒影响及对其海马凋亡的影响

目的探讨阳离子-氯离子联合转运蛋白(CCC)抑制剂对氯胺酮麻醉模型小鼠的催醒影响及对其海马凋亡的影响。方法选取幼年SPF级昆明种小鼠60只,随机分为两组,其中对照组30只,实验组30只,予100 mg/kg氯胺酮腹腔注射,待小鼠翻正反射消失,反复腹腔注射100 mg/kg氯胺酮,维持麻醉时间为6 h后,予实验组小鼠布美他尼溶液100μg/kg腹腔注射,同时予对照组等量的生理盐水腹腔注射。对比两组小鼠的苏醒时间、海马区细胞凋亡密度以及海马区NMDA-2B受体表达情况。结果实验组小鼠的苏醒时间明显短于对照组(P<0.05);高倍镜下观察显示体积较正常细胞小者为凋亡细胞,其细胞核内含紫蓝色或黑色的凋亡小体,实验组凋亡细胞明显少于对照组;实验组凋亡细胞密度与对照组比较明显较低(P<0.05);免疫组化法检测显示NMDA-2B受体阳性细胞染色呈棕黄色,多位于CA3区海马组织,分布均匀,与对照组比较,实验组的阳性细胞数目明显较少;Western印迹法测定结果显示,实验组小鼠的NMDA-2B受体灰度值明显低于对照组(P<0.05)。结论 CCC抑制剂对氯胺酮麻醉模型小鼠具有催醒作用,能够明显抑制其海马细胞凋亡,对临床具有指导意义,值得临床推广。

野生大豆阳离子质子转运体CHX19.3与14-3-3蛋白的相互作用研究

植物14-3-3家族作为蛋白互作的桥梁,在逆境应答过程中发挥重要作用。前期获得了一个野生大豆阳离子质子转运体CHX19.3,其能显著提高耐盐碱性。为进一步揭示CHX19.3调控耐盐碱性的分子机制,研究利用分裂泛素的酵母双杂交系统鉴定了CHX19.3与14-3-3家族蛋白的相互作用。结果显示成功构建了诱饵载体pBT3-STE-GsCHX19.3,GsCHX19.3-Cub-LexAVP16融合蛋白对酵母菌没有毒性,且拓扑结构符合该酵母双杂交系统。Y2H结果发现在检测的10个14-3-3蛋白中,只有GF14f能够与CHX19.3蛋白互作,其余14-3-3蛋白均不存在相互作用。研究表明野生大豆CHX19.3与14-3-3家族蛋白互作具有特异性,为进一步深入研究CHX19.3通过与GF14f互作调控耐盐碱性的分子机理奠定了基础。

听觉系统发育中的氯离子协同转运蛋白、氯离子内稳态及突触抑制

对成年脊椎动物神经系统中抑制性神经递质甘氨酸和γ-氨基丁酸作用的研究已经比较深入，其中包括非常适合于分析抑制性神经递质转运的听觉系统。为了充分认识甘氨酸和γ-氨基丁酸的转运，需要足够了解这类精确组成的突触发育过程以及在发育过程中甘氨酸能和γ-氨基丁酸能信号的作用，包括氯离子协同转运蛋白（CCCs ）调节细胞质氯离子的动态变化。

钾-氯离子协同转运体2与癫痫

钾-氯离子转运体2仅在中枢神经系统表达,具有神经元特异性。KCC2在维持神经元内氯离子的浓度发挥重要的作用,它主要调节细胞内Cl-的外向流量,使神经元内氯离子浓度低于它的电化学平衡单位,使γ-氨基丁酸能神经元发生超级化的突触后抑制性反应。KCC2在癫痫发病过程中具有重要的作用,在神经元内KCC2的表达减少,使细胞内Cl-增加,改变了神经元内Cl-的稳态,改变γ-氨基丁酸的突触后抑制性电位,GABA能反应向去极化方向转换,促进癫痫发生与发展。

单分散树脂基质的弱阳离子交换色谱固定相的制备及其在生物大分子分离中的应用研究

采用分散聚合法制备种子和'一步种子溶胀聚合法'制备了粒径为6～15 μm的单分散多孔氯甲基苯乙烯-二乙烯苯微球.该微球经化学改性后得到一种亲水性良好的新型高效弱阳离子交换色谱固定相.详细考察了该固定相的表面亲水性、对标准蛋白的分离性能和盐的种类对蛋白质保留行为的影响.考察结果表明该固定相是一种性能优异的弱阳离子交换色谱固定相.将其应用于鸡蛋清中溶菌酶的快速分离纯化,纯化后的溶菌酶纯度高于96%,比活高达71 184 U/mg.

以单分散树脂为基质的中强阳离子交换色谱填料的合成及应用

将粒径为8.0μm多孔单分散交联氯甲基苯乙烯-二乙烯苯树脂的表面经化学方法改性,得到了一种亲水性良好的中强阳离子交换色谱填料,详细考察了该改性后树脂的表面亲水性、对标准蛋白的分离性能、盐种类及盐浓度对蛋白保留行为的影响。实验结果表明,当流动相流速为3 mL/min时,四种标准蛋白可在3min内基线快速分离,蛋白质的保留符合阳离子交换色谱规律。该填料应用于鸡蛋清中溶菌酶快速分离纯化,取得较好效果。

皮质发育障碍模型大鼠海马区阳离子-氯离子转运体基因表达变化的研究

目的探讨阳离子-氯离子转运体 NKCC1(内向 Na^+,K^+-2Cl^-协同运输)、KCC2(外向K^+-Cl^-协同运输)mRNA 在皮质发育障碍致痫机制中的作用。方法在 SD 大鼠孕17 d 腹腔内注入卡莫司汀(BCNU)制作皮质发育障碍模型;Nissl 染色观察 P60 d 仔鼠病理变化;P60 d 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测两组雄性仔鼠海马区 NKCC1、KCC2 mRNA 的表达。结果 Nissl 染色湿示海马区域异位细胞异常聚集。实验组海马区 NKCC 1mRNA 表达明显上调(NKCC1/肌动蛋白的比值,实验组0.70±0.13、对照组0.48±0.09,P<0.01),KCC2 mRNA 表达明显下调(KCC2/肌动蛋白的比值,实验组0.54±0.10、对照组0.81±0.15,P<0.01)。结论 NKCCl mRNA 上调和 KCC2mRNA 下调的共同作用可能与皮质发育障碍致痫密切相关。

阳离子-氯离子共转运体KCC2、NKCC1在对氯苯丙氨酸致急性失眠大鼠模型脑干中的表达

目的探讨阳离子-氯离子共转运体KCC2、NKCC1在大鼠急性失眠发生机制中的作用。方法SD大鼠腹腔注射对氯苯丙氨酸（PCPA）制作急性失眠大鼠模型，同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组，每组6只；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）、免疫印迹（Western blot）检测各组大鼠脑干KCC2、NKCC1的表达；用氯离子荧光探针（MQAE），结合激光共聚焦显微镜观察脑干组织细胞内氯离子浓度（[C1-]i）。结果（1）模型组和干预组的KCC2 mRNA及蛋白表达均低于对照组（mRNA丰度值：0．196±0．021比0．939±0．109，P〈0．05；0．485±0．026比0．939±0．109，P〈0．05；蛋白相对值：0．363±0．058比0．967±0．155，P〈0．05；0．663±0．106比0．967±0．155，P〈0．05）；干预组高于模型组（mRNA丰度值：0．485±0．026比0．196±0．021，P〈0．05；蛋白相对值：0．663±0．106比0．363±0．058，P〈0．05）。（2）模型组的NKCC1 mRNA及蛋白表达稍高于对照组，但差异无统计学意义（mRNA丰度值：0．344±0．026比0．320±0．019，P〉0．05；蛋白相对值：0．244±0．010比0．230±0．021，P〉0．05）；干预组较对照组和模型组降低（mRNA丰度值：0．066±0．031比0．320±0．019，P〈0．05；0．066±0．031比0．344±0．026，P〈0．05；蛋白相对值：0．131±0．012比0．230±0．021，P〈0．05；0．131±0．012比0．244±0．010，P〈0．05）。（3）模型组的[Cl-]i高于对照组和干预组（相对值：0．0315±0．0039比0．0164±0．0019，P〈0．05；0．0315±0．0039比0．0182±0．0013，P〈0．05）；干预组稍高于对照组，但差异无统计学意义（相对值：0．0182±0．0013比0．0164±0．0019，P〉0．05）。结论（1）脑干KCC2表达下调及[Cl-]i的升高可能参与大鼠急性失眠的病理机制；（2）地西泮可能通过上调KCC2和下调NKCC1的表达，进而降低[Cl-]i而发挥镇静催眠作用。

钾-氯离子协同转运蛋白2在神经系统疾病中的研究进展

钾-氯离子协同转运蛋白2（KCC2）大量表达于哺乳动物成熟神经元中。众多研究表明KCC2与多种神经系统疾病的发生机制密切相关，从而广受关注。本文将综述KCC2在神经系统疾病中的最新研究进展。

阳离子-氯离子协同转运体在癫痫发病机制研究及抗癫痫药物研发中的进展

研究证明在大鼠及人类正常的脑发育过程中Na^+-K^+-2Cl^-协同转运体1(NKCC1)、K^+-Cl^-协同转运体2(KCC2)表达模式明显不同。研究它们不同表达模式对γ-氨基丁酸(GABA)作用的影响不仅有助于深入理解癫痫的致痫机制,还可为新型抗癫痫药物的研发提供理论基础。本文就NKCC1及KCC2研究的历史、进展及在癫痫致痫机制中的研究现状做一简要综述。

孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗过敏性鼻炎的临床效果

目的探究孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗过敏性鼻炎(AR)的临床效果及对患者嗜酸性粒细胞(EOS)、集落刺激因子(CSF)、嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(ECP)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)水平的影响。方法选取北京工业大学医院2021年1月至2022年1月期间收治的74例AR患者,以随机数字表法将其分为两组,分别为对照组(采用氯雷他定治疗)、观察组(采用氯雷他定+孟鲁司特钠治疗),各37例。两组患者均治疗14 d。对比两组患者的临床疗效,治疗前后的症状积分、EOS、CSF、ECP、ICAM-1水平,以及治疗期间不良反应发生情况。结果观察组患者治疗总有效率显著高于对照组;与治疗前比,治疗后两组患者鼻痒、鼻塞、打喷嚏、流鼻涕症状评分及EOS、CSF、ECP、ICAM-1水平均显著降低,且观察组显著低于对照组(均P<0.05);两组间不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论采用孟鲁司特钠联合氯雷他定治疗AR患者的效果显著,可通过拮抗EOS、CSF、ECP、ICAM-1等多种因子来阻止患者的病情发展,加快患者的临床症状好转,且不良反应轻微。

自拟消疹煎联合西药治疗慢性湿疹的临床效果及对患者血清LTB4、IL-18、ECP、INF-γ的影响

目的观察用自拟消疹煎联合西药治疗慢性湿疹的临床效果及对患者血清外周血白细胞三烯B4(LTB4)、白细胞介素(IL)-18、嗜酸细胞阳离子蛋白(ECP)、干扰素(INF)-γ的影响。方法将我院收治的104例慢性湿疹患者随机分为对照组和观察组各52例。对照组给予氯雷他定片治疗,观察组患者在对照组基础上加用自拟消疹煎内服,2组均连续治疗2周。治疗前后采用湿疹皮损面积和严重程度指数(EASI)评分评价皮损症状的严重程度及皮损面积,用皮肤病生活质量指数(DLQI)量表评价生活质量,监测LTB4、IL-18、ECP、IFN-γ水平,对比2组的临床疗效,统计治疗过程中的不良反应,随访半年计算复发率。结果观察组经治疗后的临床疗效高达90.38%,较对照组的76.92%明显升高(P<0.05);治疗后,观察组患者的皮损改善优于对照组,患者的红斑、硬肿、苔藓化、表皮剥脱、皮损面积等方面的评分明显低于对照组(P<0.05);观察组患者的生活质量改善优于对照组,其DLQI评分明显低于对照组(P<0.05);观察组患者血清因子LTB4、IL-18、ECP水平明显低于对照组,INF-γ水平则明显高于对照组(P<0.05)。2组患者均未见严重不良反应,对照组患者治疗过程中不良反应率高达26.92%,较观察组的不良反应率为7.69%明显升高,且对照组复发率高达27.27%,观察组患者复发率为1.9%(P<0.05)。结论加用自拟消疹煎联合治疗更利于减轻皮损的严重程度,缩小湿疹面积,提高患者生活质量,疗效肯定,用药安全性高,且不易复发,其起效机制可能在于通过下调外周血LTB4、IL-18、ECP水平而减轻皮肤的炎性损害,有一定的临床推广应用价值。

离子转运蛋白调控钝齿棒杆菌离子和pH稳态促进L-精氨酸合成

L-精氨酸是一种半必需氨基酸,广泛应用于食品、制药、饲料等行业。【目的】当前对L-精氨酸生产菌株的研究,极少涉及离子转运领域。在本研究中,发现在发酵时适量添加外源K+有利于促进钝齿棒杆菌(Corynebacterium crenatum)SYPA5-5合成L-精氨酸。【方法】在C.crenatum SYPA5-5发酵培养基外源添加0.5 g/L和2.5 g/L的K3PO4,取对数期发酵样品进行转录组数据分析,挖掘出K+转运相关的阳离子转运ATP酶CTAP1以及单价阳离子/H+逆转运蛋白Mrp1A,研究其在C.crenatum SYPA5-5快速合成L-精氨酸阶段,对菌株生长及L-精氨酸合成的影响。【结果】对基因ctap1和mrp1分别进行敲除和过表达,深入研究突变株对L-精氨酸合成的影响。研究发现同时过表达离子转运蛋白CTAP1和Mrp1A更有利于胞内离子、pH稳态和渗透压调节,最终提高L-精氨酸的产量。在补料分批发酵中分别过表达Mrp1A、CTAP1以及同时过表达Mrp1A和CTAP1的菌株L-精氨酸产量分别达到61.4 g/L、63.9 g/L和65.3 g/L,产率分别为0.383 g/g、0.392 g/g和0.395 g/g,比C.crenatum SYPA5-5分别提高了34.9%、38.0%和39.1%。【结论】CTAP1是特异性的K+转运ATP酶,可以将培养基中的K+运输到胞内。同时Mrp1A可将胞内K+和Na+等单价阳离子运输到胞外,将胞外H+运输至胞内,中和胞内L-精氨酸所导致的碱性环境,从而维持胞内pH稳定。CTAP1和Mrp1A的研究为解析离子转运机制和L-精氨酸合成之间的联系奠定了基础。

离子转运／交换蛋白在缺血性脑卒中后脑水肿中的作用机制

脑卒中严重危害着人类生命健康，目前高居世界人类死因排名第二位、中国居民死亡率第二位，且发病率近年来仍呈上升趋势。脑卒中分为缺血性脑卒中及出血性脑卒中，其中缺血性脑卒中的发病率更高，约占脑卒中总数的80％。

WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与缺血性脑卒中关系的研究进展

WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(WNK)和下游Ste20相关的富含脯氨酸-丙氨酸激酶(SPAK)或SPAK同源物氧化应激反应激酶1(OSR1)以及阳离子-氯离子共转运体(CCCs)有关。大量证据表明WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路是缺血性脑卒中期间细胞水肿、氯离子稳态失衡和缺血性脑卒中后痉挛发生发展的重要病理生理因素,遂提出WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路可能与缺血性脑卒中的发病机制有关这一理念。该文将以CCCs家族中的钠钾氯共转运体亚型1(NKCC1)、钾氯共转运体亚型2(KCC2)、钾氯共转运体亚型3(KCC3)为切入点综述WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路与缺血性脑卒中的关系,为明确WNK-SPAK/OSR1-CCCs信号通路在缺血性脑卒中治疗过程中的具体机制以及临床治疗脑卒中提供理论依据。

督脉电针对脑缺血再灌注后肢体痉挛大鼠大脑皮层氯离子稳态的影响

目的:探讨督脉电针对脑缺血再灌注后肢体痉挛大鼠大脑皮层氯离子(Cl^(-))稳态及γ-氨基丁酸(GABA)和钠-钾-氯协同转运蛋白1(NKCC1)表达的影响,探讨督脉电针缓解脑卒中后肢体痉挛的作用机制。方法:SD大鼠随机分为正常组9只、假手术组9只,其余采用大脑中动脉栓塞法复制脑缺血后再灌注痉挛大鼠模型,造模成功大鼠随机分为模型组、督脉电针组和巴氯芬组,每组9只。督脉电针组电针“大椎”“脊中”“后会”,每次30 min;巴氯芬组灌胃巴氯芬(0.4 mg/kg),两组均每日1次,连续治疗7 d。应用神经功能缺损评分对各组大鼠神经功能进行评估,采用改良Ashworth量表和电生理描记检测各组大鼠肌肉反应对张力传感器的作用力;采用TTC染色检测各组大鼠脑梗死体积百分比;采用干湿重法检测各组大鼠脑含水量;采用比色法检测各组大鼠大脑皮层中Cl^(-)和GABA含量;采用Western blot法和实时荧光定量PCR法分别检测大脑皮层中NKCC1蛋白和mRNA表达。结果:造模后,模型组、督脉电针组、巴氯芬组较正常组和假手术组神经功能缺损评分和改良Ashworth评分升高、肌肉反应对张力传感器的作用力降低(P<0.01)。治疗后,督脉电针组、巴氯芬组较同组治疗前神经功能缺损评分和改良Ashworth评分降低、肌肉反应对张力传感器的作用力升高(P<0.05,P<0.01);与同时间点模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组神经功能缺损评分和改良Ashworth评分降低、肌肉反应对张力传感器的作用力升高(P<0.05)。与正常组和假手术组比较,模型组脑含水量、脑梗死体积百分比升高(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组脑含水量、脑梗死体积百分比降低(P<0.01)。与正常组和假手术组比较,模型组大脑皮层中Cl^(-)含量升高(P<0.01),GABA含量降低(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组Cl^(-)含量降低(P<0.05,P<0.01),GABA含量升高(P<0.05,P<0.01)。与正常组和假手术组比较,模型组大脑皮层NKCC1蛋白和mRNA表达均上调(P<0.01);与模型组比较,督脉电针组、巴氯芬组NKCC1蛋白和mRNA表达下调(P<0.01,P<0.05);督脉电针组较巴氯芬组NKCC1蛋白和mRNA表达上调(P<0.01,P<0.05)。结论:督脉电针可改善脑卒中后大鼠的肢体痉挛程度,其机制可能与调控大脑皮层中Cl^(-)稳态、增加GABA含量、下调NKCC1蛋白和mRNA表达有关,从而减轻脑水肿和梗死程度,改善神经功能缺损症状,降低肌张力。

基于脑脊液冲刷规律探讨枣仁安神颗粒对大鼠睡眠作用机制研究

[目的]基于脑脊液分泌和冲刷作用规律探讨枣仁安神颗粒改善正常大鼠睡眠状态的作用机制。[方法]选取雄性SD大鼠44只,随机分为正常组和枣仁安神颗粒组,每组22只。连续8 d对枣仁安神颗粒组大鼠灌服枣仁安神颗粒水溶液,正常组以等量纯净水灌服作为对照。分析大鼠给药第6至8天脑电(EEG)、肌电(EMG)特征,觉醒期、非快眼动睡眠期(NREM)、快眼动睡眠期(REM)时长,给药8 d后,超高场强核磁共振成像设备检测大鼠中脑导水管中段处脑脊液平均流速,酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠大脑前额叶皮质水通道蛋白1(AQP1)和钠离子(Na^(+))-钾离子(K^(+))-氯离子(Cl-)协同转运蛋白1(NKCC1)含量,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测大脑前额叶皮质AQP1、NKCC1蛋白表达(因EEG植入手术含金属,无法进行核磁共振监测,故每组用于EEG描述的有8只大鼠,核磁共振监测的有6只大鼠,检测蛋白表达情况的有8只大鼠)。[结果]与正常组相比,枣仁安神颗粒组觉醒期时间缩短(P<0.01),睡眠时间增加(P<0.01),NREM、REM时间增加(P<0.01),枣仁安神颗粒组第6、7、8天之间的觉醒时间逐日减少(P<0.01),睡眠时间逐日增加(P<0.01),NREM、REM时间增加(P<0.01),对大鼠24 h睡眠结构产生影响(P<0.01),中脑导水管中段处脑脊液平均流速加快(P<0.05),大脑前额叶皮质AQP1、NKCC1含量增加(P<0.05),大脑前额叶皮质AQP1、NKCC1蛋白表达升高(P<0.05)。[结论]枣仁安神颗粒可以显著缩短正常大鼠觉醒期,延长睡眠期,特别是NREM与REM,其机制可能与增加脑脊液分泌蛋白AQP1、NKCC1的蛋白表达从而促进脑脊液冲刷有关。

呋噻米对辣椒素介导的胞外信号调节激酶磷酸化的抑制作用

目的:观察阳离子-氯离子联合转运蛋白(CCC)阻断剂在辣椒素介导的胞外信号调节激酶(ERK)活化中的作用。方法:成年大鼠脊髓700μm厚切片,分成空白对照组、辣椒素组、呋噻米组、辣椒素+呋噻米组,予以相应药物处理后固定,再行冰冻切片,进行荧光免疫组化检测程序。对脊髓背角Ⅰ、Ⅱ层的磷酸化的细胞外信号传导激酶阳性(pERK IR)细胞计数,行统计学处理。结果:对照组、辣椒素组、呋噻米组、呋噻米+辣椒素组pERK阳性细胞数分别为4.19±0.42;26.83±1.14;12.31±0.90;12.14±0.72(P<0.001)。呋噻米+辣椒素组阳性细胞数比辣椒素组减少(P<0.001)。结论:呋噻米可抑制辣椒素介导的胞外信号调节激酶磷酸化,具抗伤害作用。

大鼠缰内侧核神经元缺少MAP2和KCC2的表达

为了观察神经元结构蛋白微管相关蛋白2(MAP2)和钾离子-氯离子共转运体2(KCC2)在缰内侧核神经元内的表达,本实验采用2组成年SD大鼠,一组作常规灌注固定,冰冻切片,KCC2和MAP2的免疫荧光组织化学染色;另一组断头取脑,分别取缰内侧核和缰外侧核,用Western blotting法检测KCC2和MAP2的表达。结果显示:KCC2和MAP2在缰内侧核内的表达非常弱,但在缰外侧核有丰富表达。以上结果表明,缰内侧核神经元缺少神经元结构蛋白MAP2和KCC2的表达。

外伤性脑损伤后神经细胞保护因子表达的变化

外伤性脑损伤(traumatic brain injuries,TBI)是指外力作用于颅骨所致的头皮、颅骨、硬脑膜和脑组织与外界相通,并由此引发脑组织一系列病理生理学改变的疾病。脑组织损伤后导致神经细胞缺血缺氧,脑血管通透性增加并引发一系列炎性细胞分泌增加,在促进炎症发生的同时改变多种细胞保护因子的表达,如低氧诱导因子-1(hypoxia-inducible-1,HIF-1)、葡萄糖转运蛋白-1(glucose transporter-1,GLUT-1)、小泛素样修饰蛋白-1(small ubiquitin-like modifier,SUMO-1)、CC趋化因子配体2(CC chemokines ligand 2,CCL2)、瞬时受体电位阳离子通道1(transient receptor potential channel 1,TRPC1)等蛋白质的表达产生一系列应激反应来应对缺氧,进而保护神经细胞免受进一步损伤。本文将围绕脑组织损伤后的神经细胞保护因子改变进行综述。