3种方法建立阳虚型慢传输型便秘大鼠模型的比较研究

目的采用病证结合评价方法对比研究3种阳虚型STC大鼠模型建立方法,为中医药防治提供理想的实验动物模型。方法64只SD大鼠,分为空白组和模型组,采用盐酸洛哌丁胺结合0℃冰水复合灌胃法(M-1组)、盐酸洛哌丁胺联合大黄水煎液灌胃法(M-2组)、白醋与0℃冰水交替灌胃+盐酸洛哌丁胺灌胃法(M-3组),各16只,分别建立阳虚型STC大鼠模型,空白组(16只)给予等体积蒸馏水灌胃,造模期间观察大鼠一般情况,每周固定时间测定肛温、饮食量、自主活动量、粪便Bristol评分及含水率,模型建立后检测各组大鼠首粒黑便排出时间、肠道推进率,HE染色法观察大鼠结肠病理改变,PAS染色检测大鼠结肠黏液变化,ELISA法、免疫组化法检测结肠5-HT、VIP、SP含量及蛋白表达。结果造模后各模型组大鼠均出现精神萎靡、倦怠懒动、弓背蜷缩等表现。造模期间各模型组大鼠出现死亡,死亡率依次为M-3组>M-2组>M-1组。与空白组相比,M-1组在造模第3周进食量、自主运动量明显降低(P<0.01),造模第4周肛温、粪便含水率明显降低(P<0.01),造模第5周粪便Bristol评分明显降低(P<0.01);M-2组在造模第3周肛温明显下降(P<0.01),进食量、自主运动量明显降低(P<0.01),第6周粪便Bristol评分、含水率明显降低(P<0.01);M-3组在造模第1周自主运动量明显降低(P<0.01),造模第2周进食量明显降低(P<0.01),造模第4周肛温、粪便Bristol评分、粪便含水率明显下降(P<0.01);HE染色显示各模型组大鼠结肠无明显病理改变;与空白组相比,PAS染色发现各模型组大鼠结肠黏液层厚度明显减少,排序依次为M-3<M-1<M-2,同时各造模组大鼠首粒黑便排出时间增加、肠道推进率显著降低(P<0.01),结肠5-HT、SP含量及蛋白表达显著下降(P<0.01),M-1组结肠VIP含量及蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论3种造模方法均能建立阳虚型STC大鼠模型,但以盐酸洛哌丁胺联合0℃冰水灌胃法建立的大鼠模型具有死亡率低、安全性较好、阳虚证候表现稳定,大便性状改变明显,肠道动力障碍病理变化显著的优点,是阳虚型STC发病机制及相关中医药药物作用实验研究的理想模型。

济川煎对阳虚型慢传输型便秘大鼠肠神经递质的干预作用

目的观察济川煎对阳虚型慢传输型便秘(STC)大鼠肠神经递质的影响,探究济川煎治疗阳虚型STC的作用机制。方法将40只SD大鼠随即分为正常组,模型组,莫沙必利组,济川煎组,采用复合病因法制备阳虚型结肠慢传输型便秘大鼠模型,分别给予莫沙必利、济川煎等药物治疗7 d,观察粪便干湿重比,测定大鼠肠推进功能,采用苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理学改变,Elisa法检测大鼠结肠中肠神经递质血管活性肠肽(VIP)、P物质(SP)、5-羟色胺(5-HT)水平。结果与模型组比较,济川煎组粪便干湿重显著降低(P<0.01),肠推进功能显著升高(P<0.01),济川煎组结肠中肠神经递质VIP显著降低(P<0.01),神经递质SP、5-HT显著升高(P<0.01)。结论济川煎可以显著改善阳虚型STC粪便干湿重比和肠推进功能,减轻结肠黏膜炎症损伤,其机制可能与其调节肠神经递质VIP、SP、5-HT的含量及表达相关。

附子-肉桂调控结肠VIP/cAMP/PKA/AQP通路改善大鼠阳虚型慢传输型便秘

目的:通过血管活性肠肽(VIP)/环状磷酸腺苷(cAMP)/蛋白激酶A(PKA)/水通道蛋白(AQP)通路探究附子-肉桂对阳虚型慢传输便秘(STC)大鼠肠道功能的影响及作用机制。方法:将SD大鼠随机分为6组(n=6),包括正常组、模型组、附子-肉桂高剂量组、附子-肉桂中剂量组、附子-肉桂低剂量组及普芦卡必利组。除正常组以外,其余组均采用盐酸洛哌丁胺联合冰水灌胃造模法,建立阳虚型STC大鼠模型。记录各组大鼠首次黑便排出时间,粪便数量,粪便含水量,肠道推进率及粪便性状评分。通过苏木素-伊红(HE)染色观察结肠组织病理形态,阿利新蓝-过碘酸-雪夫(AB-PAS)染色观察结肠黏液分泌情况。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中VIP的水平。实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中AQPs mRNA表达水平,免疫组化检测结肠和肾组织中AQPs表达,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中cAMP、PKA及VIP的蛋白表达水平。结果:与空白组大鼠相比,模型组大鼠首粒黑便排出时间显著加长,粪便粒数及含水量显著减少,粪便性状评分及肠道推进率显著降低(P<0.01);大鼠肠道病变重,黏液分泌减少;血清中VIP含量显著减少,结肠和肾组织中水通道蛋白1(AQP1)表达水平显著增加,水通道蛋白3(AQP3)及水通道蛋白(AQP9)表达水平显著减少(P<0.01);结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达降低。与模型组大鼠比较,高剂量附子-肉桂组大鼠首粒黑便排出时间缩短,粪便粒数及含水量增加,粪便性状评分及肠道推进率提高;附子-肉桂高剂量组,大鼠肠道病变减轻,黏液分泌增加;血清中VIP含量增加(P<0.01),结肠和肾组织中AQP1表达水平明显降低,AQP3及AQP9表达水平明显增加(P<0.05,P<0.01)。附子-肉桂高剂量组大鼠结肠组织中cAMP、PKA及VIP表达也显著增加(P<0.01)。结论:附子-肉桂高剂量组可以通过上调VIP/cAMP/PKA/AQP通路提高肠道动力,平衡肠道水液代谢,从而改善阳虚型慢传输便秘大鼠的便秘症状。