阴性富集联合免疫荧光原位杂交法检测乳腺癌中循环肿瘤细胞

目的探讨阴性富集联合免疫荧光原位杂交法(immuno fluorescence in situ hybridization,im FISH)检测乳腺癌中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)方法学的可行性及其临床价值。方法建立采用阴性富集及im FISH检测CTC的方法,评估线性、精密度情况,并验证此方法在37例乳腺癌、16例良性乳腺病和15例健康人中的CTC检测效果。结果乳腺癌患者的检出率为67. 6%(25/37),良性乳腺病患者及健康人的检出率分别为18. 8%(3/16)和0(0/15)。结论采用阴性富集联合im FISH法检测乳腺癌患者CTC的方法具有可行性,该方法在预测癌症发生方面有积极的提示作用,CTC可以作为有效手段之一,为临床提供更多的相关信息。

差相富集-免疫荧光原位杂交技术检测膀胱癌患者循环肿瘤细胞的初步研究

目的利用差相富集-免疫荧光原位杂交技术(subtraction enrichment and immunostainingfluorescence in situ hybridization,SE-iFISH)检测膀胱癌患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs),并探究该检测结果与肿瘤临床特征的关系。方法收集2016年4~6月收治入院的16例膀胱癌患者(实验组)临床病理资料,其中男14例,女2例,年龄(66.88±8.97)岁。另取10例非肿瘤患者为对照(对照组),其中男7例,女3例,年龄(61.90±9.13)岁。取外周静脉血各6mL,差相富集法收集外周血CTCs,肿瘤细胞标志物-iFISH检测6mL血中所有CTCs的数量及相关生物学特性,比较CTCs的数量与膀胱癌临床特征(有无血尿、肿瘤大小、数目、是否侵及肌层、原发肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤级别、肿瘤病理学类型等)的关系。结果实验组CTCs阳性检出率为43.75%(7/16),对照组CTCs阳性检出率为0%(0/10),两组阳性检出率差异有统计学意义(P=0.022 7)。实验组CTCs含量为0~29个,中位数为0个,对照组CTCs含量为0个,两组CTCs含量差异有统计学意义(P=0.028 3)。实验组中,有无血尿、肿瘤大小、数目、是否侵及肌层、原发肿瘤分期、淋巴结转移、肿瘤级别、肿瘤病理学类型等亚组之间,CTCs阳性检出率的差异无统计学意义。结论 SE-iFISH检测膀胱癌外周血CTCs可行性好。关于CTCs含量与膀胱癌患者临床特征的关系尚不肯定,需更大样本量予以说明。

循环肿瘤细胞与乳腺癌临床特征及疗效评估的相关性

目的 本研究旨在分析循环肿瘤细胞(CTCs)与乳腺癌患者临床特征的关系,并探讨其在乳腺癌疗效监测中的价值。方法 选取2021年6月到2022年11月之间在中国科学院合肥肿瘤医院就诊的39例女性乳腺癌患者和30例乳腺良性疾病患者,应用阴性富集和免疫荧光原位杂交技术(imFISH)检测患者外周血中CTCs的数量,分析CTCs与临床特征的相关性以及治疗前后CTCs计数的差异。结果 乳腺癌患者治疗前后CTCs阳性率分别为87.2%和84.6%,乳腺良性疾病患者均未检出CTCs。TNM分期Ⅲ~Ⅳ期患者CTCs阳性率明显高于Ⅰ~Ⅱ期患者,差异有统计学意义(χ^(2)=4.848,P=0.047);发生淋巴结转移的患者CTCs阳性率明显高于未发生淋巴结转移的患者,差异有统计学意义(χ^(2)=10.469,P=0.007)。39例患者在治疗后,有4例出现病情进展,30例疾病稳定,5例部分缓解。疾病进展的患者治疗前后的CTCs数目差异无统计学意义(P>0.05);疾病稳定和部分缓解的患者治疗后的CTCs数目与治疗前相比明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 阴性富集和免疫荧光原位杂交法的CTCs检出率较高,CTCs检测有助于评估乳腺癌患者的病情,并且对于乳腺癌的疗效监测具有较好的应用价值。

外周血循环肿瘤细胞检测在筛查卵巢上皮性癌中的应用

【目的】检测健康女性、卵巢良性上皮性肿瘤患者及卵巢恶性上皮性癌患者(含各分期)外周血循环肿瘤细胞(CTC)阳性率及数量差异,初步评估CTC检测在卵巢恶性上皮性癌筛查中的临床意义。【方法】选取中山市博爱医院、中山大学附属中山医院2016年1月至2017年12月期间,151例健康女性体检者(正常组)、138例卵巢上皮性良性肿瘤患者(良性组)、92例卵巢上皮性癌,含所有类型及临床分期的卵巢上皮性癌患者(恶性组)为研究对象,卵巢肿瘤患者以病理组织学结果为金标准,采集患者术前和正常组静脉血液样本,采用免疫磁珠微粒阴性富集法和免疫荧光原位杂交法检测研究对象的CTC,使用SPSS 20.0比较3组外周血CTC阳性率及数量差异;统计分析CTC检测诊断卵巢上皮性癌的灵敏度、特异度、符合率、阳性预测值和阴性预测值,综合评估CTC检测诊断卵巢上皮性癌的价值。【结果】(1)正常组、良性组与恶性组CTC阳性率分别为0、0和90.22%,总体差异具有统计学意义(P <0.001);恶性组与正常组、恶性组与良性组相比差异均具有统计学意义(均P <0.001)。(2)恶性组Ⅰ～Ⅳ期CTC阳性率分别为81.25%、89.47%、90.32%和96.15%,差异无统计学意义(P=0.47)。(3)正常组、良性组与恶性组CTC均数分别为0、(0.02±0.15)和(8.27±10.88)个,总体差异有统计学意义(P <0.001),良性组与正常组间无差异(P=0.97),恶性组与良性组、恶性组与正常组差异均有统计学意义(均P <0.001)。(4)恶性组Ⅰ～Ⅳ期CTC均数分别为(2.13±1.31)个、(2.68±1.53)个、(5.90±2.95)个、(19.35±15.19)个,总体差异有统计学意义(P <0.001),除Ⅲ期与Ⅱ期(P=0.19)、Ⅲ期与Ⅰ期(P=0.14)、Ⅱ期与Ⅰ期(P=0.84)差异无统计学意义外,其余各期之间均有统计学意义(均P <0.001)。(5)CTC诊断卵巢上皮性癌的灵敏度、特异度、符合率分别为90.22%、100%、97.64%。【结论】卵巢上皮性癌患者CTC阳性率与均数均为最高;CTC均数与卵巢上皮性癌临床分期具有相关性,提示CTC在卵巢上皮性癌的早期诊断及临床分期预测中具有较高的临床价值。

外周血循环肿瘤细胞与乳腺癌临床病理特征关系的研究

目的研究外周血循环肿瘤细胞(CTC)在乳腺癌患者中的表达及其临床意义。方法采用免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测129例乳腺癌和63例良性乳腺病患者(宜兴市肿瘤医院2017年1月至2019年12月收治)中外周血CTC的表达情况,分析两组患者外周血CTC的表达差异及CTC与乳腺癌临床病理特征的相关性。结果免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测外周血CTC的灵敏度及特异度分别为79.1%和93.7%,受试者工作特征(ROC)曲线下面积为0.881。乳腺癌患者中CTC检测阳性率为79.1%(102/129),明显高于良性乳腺病组的6.3%(4/63),P<0.05。CTC检测阳性率的高低在乳腺癌不同年龄、病理类型、临床分期及Her2表达状态中差异有统计学意义(P<0.05)。结论免疫磁珠富集阴性技术联合荧光原位杂交法检测外周血CTC具有较高的灵敏度及特异度;检测外周血CTC有助于评估乳腺癌患者的病情。

肺癌患者外周动脉血和静脉血循环肿瘤细胞含量的差异及其临床意义

目的探索提高肺癌循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)阳性率的策略。方法对病理确诊肺癌患者46例分别采取外周动脉血(A组)和外周静脉血(V组)各5 mL,采用免疫磁珠阴性富集联合免疫荧光原位杂交法对CTC进行富集计数和鉴定,计算其阳性率。结果A组CTC含量(1.98±1.73[个/3.2 mL])明显高于V组(1.39±1.86[个/3.2 mL])(t=2.533,P=0.015)。A组的CTC检出率(71.7%)明显高于V组(52.2%)(χ^(2)=8.873,P=0.032)。在早期(1期)肺癌,A组的CTC阳性率(50.0%)明显高于V组(14.3%)(χ^(2)=8.857,P=0.013)。结论肺癌患者外周动脉血CTC含量明显高于外周静脉血;检测外周动脉血CTC相比外周静脉血,可获更高阳性率,更有利于肺癌的早期诊疗及随访。

乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的检测及临床意义

目的探讨乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)的检测及临床意义。方法选取福建省漳州市医院乳腺外科2020年12月—2022年12月收治的200例乳腺癌患者纳入研究,并选择同期在福建省漳州市医院乳腺外科接受手术的40例良性乳腺病进行对照研究,采用纳米基底富集分离及免疫荧光原位杂交技术检测两组CTC检测阳性率,检测CTC人类表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,Her2)表达,分析CTC与临床病理特征的关系。结果200例乳腺癌组织中,CTC阳性130例,占比65.00%;40例乳腺良性组织未检测到CTC,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);乳腺癌患者阳性检测与血管侵犯有关(P<0.05);而与年龄、肿瘤大小、病理类型、雌激素受体(estrogen receptor,ER)和孕激素受体(progesterone receptor,PR)、淋巴结转移等均无相关(P>0.05);130例CTC阳性检查出95例Her2阳性。外周血检查出CTC存在Her2阳性有80例,两者比较一致性为84.21%(80/95)。结论外周血CTC与乳腺癌肿瘤发生远处转移存在一定关联,有助于评估乳腺癌患者的病情;CTC Her2检测可能有助于实时判断Her2的状态,对预后有重要意义。

皮肤肿瘤患者外周血循环肿瘤细胞与循环肿瘤血管内皮细胞检测的临床价值

目的探究循环肿瘤细胞(CTC)与循环肿瘤血管内皮细胞(CTEC)检测在皮肤恶性肿瘤中的临床运用价值。方法采用差相富集-免疫荧光染色结合染色体荧光原位杂交(SE-iFISH)方法检测5例皮肤恶性肿瘤患者(肿瘤组)以及14例健康人(健康组)外周血中CTC及CTEC数量,计算检出率,分析肿瘤组CTC/CTEC的亚类分型特征以及CTC/CTEC数量与患者临床特征的相关性。结果肿瘤组CTC及CTEC阳性检出率均为100%,外周血中CTC平均值为(6.93±8.18)个/mL,CTEC平均值为(1.60±1.03)个/mL;健康组CTC及CTEC阳性检出率均为64%,外周血中CTC平均(0.19±0.21)个/mL,CTEC平均(0.30±0.33)个/mL。肿瘤直径较大、伴淋巴结转移、临床分期为Ⅲ、Ⅳ期患者CTC及CTEC水平较高。肿瘤患者大细胞CTC占总数的88.46%(184/208),大细胞CTEC占总数的81.25%(39/48),且主要为≥五倍体CTC和CTEC。结论皮肤肿瘤患者CTC/CTEC检出率较高;CTC及CTEC数量与患者临床特征具有密切关系;皮肤肿瘤外周血中大细胞多倍体CTC和CTEC比例高于其他亚型。

老年食管胃交界腺癌患者循环肿瘤细胞检测的临床意义

目的通过检测老年食管胃交界腺癌(AEG)患者外周血中的循环肿瘤细胞(CTCs),探讨CTCs与老年AEG患者临床特征及预后的关系。方法回顾性分析聊城市人民医院2016年8月至2020年5月95例老年AEG患者的临床资料,治疗前的1周均采用阴性富集-免疫荧光原位杂交技术(NE-FISH)检测CTCs,分析CTCs计数阳性与患者临床特征的关系,通过随访获取老年AEG患者无进展生存期(PFS)及总生存期(OS),采用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox回归分析CTCs计数与老年AEG患者预后指标(PFS、OS)的关系。结果95例老年AEG患者CTCs阳性(CTCs≥2)率为72.6%(69/95)。老年AEG患者CTCs阳性与患者脉管内瘤栓、TNM病理分期、T分期、淋巴结转移、是否手术均密切相关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析示,与CTCs<2组比较,CTCs≥2组老年AEG患者中位PFS(12个月vs 50个月)及中位OS更短(20个月vs 50个月),差异有统计学意义(P<0.01)。结论运用NE-FISH技术对老年AEG患者行外周血CTCs检测是可行的,CTCs阳性与老年AEG患者肿瘤转移、病情进展密切相关,CTCs≥2可能是老年AEG患者预后不良的预测指标。

小细胞肺癌患者骨髓肿瘤细胞的检测及其临床价值

目的探讨小细胞肺癌(SCLC)患者骨髓肿瘤细胞的检测与临床特征及疗效和预后的关系。方法前瞻性纳入2018年1月至2022年10月首都医科大学附属北京胸科医院诊断的初治SCLC患者113例,治疗前抽取骨髓液分别采用液基细胞学检测肿瘤细胞、采用差相富集-免疫荧光原位杂交(SE-iFISH)平台检测播散肿瘤细胞(DTCs)。采用χ^(2)检验分析两种方法检测结果与患者临床特征及疗效的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用Cox比例风险回归模型进行生存分析。结果骨髓液基细胞学阳性率为15.93%(18/113),液基细胞学阳性患者中肝及骨转移率均高于阴性患者(肝转移率分别为55.56%和11.58%;P<0.001;骨转移率分别为77.78%和16.84%,P<0.001),血小板减低更多见(16.67%和2.11%,P=0.033)。SE-iFISH检测DTCs阳性率为92.92%(105/113),DTCs≥111个/3 ml的患者中肝及骨转移率均明显高于DTCs<111个/3 ml的患者(肝转移率分别为37.93%和11.90%,P=0.002;骨转移率分别为44.83%和20.23%,P=0.010),血小板减低发生率明显升高(13.79%和1.19%,P=0.020)。疾病控制组和疾病进展组的骨髓液基细胞学阳性率分别为12.00%(12/100)和46.15%(6/13),差异有统计学意义(P=0.002),骨髓SE-iFISH检测DTCs分别为29(8,110)个/3 ml和64(15,257)个/3 ml,差异无统计学意义(P=0.329)。骨髓液基细胞学阳性患者中位无进展生存时间(PFS)为6.33个月,低于阴性患者(中位PFS为9.27个月,P=0.019),中位总生存时间(OS)为8.03个月,亦低于阴性患者(中位OS为19.50个月,P=0.033)。骨髓SE-iFISH检测DTCs≥111个/3 ml患者的中位PFS为6.83个月,低于DTCs<111个/3 ml患者(中位PFS为9.50个月,P=0.004),中位OS为11.20个月,也低于DTCs<111个/3 ml患者(中位OS为20.60个月,P=0.019)。多因素Cox回归分析显示,疾病分期(HR=2.806,95%CI:1.499~5.251,P=0.001)和骨髓SE-iFISH检测DTCs数量(HR=1.841,95%CI:1.095~3.095,P=0.021)是SCLC患者PFS的独立影响因素,疾病分期是SCLC患者OS的独立影响因素(HR=2.538,95%CI:1.169~5.512,P=0.019)。结论骨髓液基细胞学检测肿瘤细胞和SE-iFISH检测DTCs两种方法临床可行,液基细胞学阳性或DTCs≥111个/3ml均与患者远处脏器转移相关,DTCs≥111个/3 ml是SCLC患者较差PFS的独立影响因素。

循环肿瘤细胞和循环肿瘤内皮细胞对鼻咽癌治疗的应答变化及其意义

目的 探究鼻咽癌患者各治疗阶段循环肿瘤细胞(circulating tumor cell, CTC)及循环肿瘤内皮细胞(circulating tumor endothelial cell, CTEC)与治疗方式的关系。方法 回顾性收集2016年3月-2019年11月在四川大学华西医院就诊的不同治疗阶段鼻咽癌患者,通过差相富集-瘤标免疫荧光染色-染色体原位杂交进行CTC检测,部分患者进行CTEC检测,分析CTC及CTEC与鼻咽癌患者放疗及化疗之间的关系,并探究鼻咽癌CTC与CTEC之间的相关性。结果 共纳入191例鼻咽癌患者,其中初治治疗前66例,诱导化疗后38例,同步放化疗后87例;127例患者行CTEC检查,其中初治治疗前41例,诱导化疗后29例,同步放化疗后57例。各治疗阶段组患者CTC阳性率分别为89.4%、81.6%以及69.0%,其中仅初治治疗前组与同步放化疗后组差异有统计学意义(P=0.003);同步放化疗后组CTC数目分别较初治治疗前组、诱导化疗后组减少(P<0.001,P=0.002);同步放化疗后组三倍体CTC数目与初治治疗前组、诱导化疗后组差异有统计学意义(P=0.009,P=0.013);同步放化疗后组四倍体CTC数目与诱导化疗后组差异有统计学意义(P=0.007);同步放化疗后组多倍体(五倍体或8号染色体拷贝数>5)CTC数目与初治治疗前组差异有统计学意义(P<0.001)。各治疗阶段组患者CTEC阳性率分别为70.7%、82.8%以及64.9%,差异无统计学意义(P>0.05);同步放化疗后组CTEC数目仅较诱导化疗后组减少(P=0.009);各组间三倍体、四倍体CTEC数目差异无统计学意义(P=0.265,P=0.088);多倍体CTEC数目仅同步放化疗后组与诱导化疗后组之间差异有统计学意义(P=0.007)。Spearman相关性分析结果显示,CTC和CTEC之间呈正相关关系(rs=0.437,P<0.001)。结论 同步放化疗对鼻咽癌患者血液CTC数目的减少起着重要作用,而诱导化疗似乎并不会直接引起CTC数目的改变。鼻咽癌患者中,不同倍型CTC对不同治疗方式所产生的应答不同。鼻咽癌CTEC水平与CTC水平呈正相关关系。