呼吸性酸碱失衡家兔肾脏内髓集合管细胞Cl^-/HCO_3^-交换及阴离子交换蛋白2mRNA表达的研究

目的 研究肾脏内髓集合管(IMCD)细胞Cl^-/HCO_3~_交换在呼吸性酸碱失衡时的代偿调节作用。方法 分别以3％CO_2和10％CO_2模拟慢性呼吸性碱中毒(呼碱,ALG组)和慢性呼吸性酸中毒(呼酸,ACG组)建立家兔肾脏IMCD细胞培养模型,对照组(CG组)为5％CO_2+空气平衡,采用荧光探针法测定IMCD细胞Cl^-/HCO_3^-交换,用原位杂交和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IMCD细胞肾脏阴离子交换蛋白2(KAE2)mRNA表达。结果 ACG组Cl^-/HCO_3^-交换[(0.132±0.015)pHi/min]显著高于CG组[(0.117±0.016)pHi/min,P<0.05]CG组与ALG组[(0.111±0.015)pHi/min]无显著差别(P>0.05)。ACG组KAE2 mRNA原位杂交积分光密度(325.48±90.84)显著高于CG组(68.54±20.28,P<0.01);CG组与ALG组(50.56±16.08)无显著差别(P>0.05)。ACG组KAE2 mRNA的RT-PCR积分光密度比值(2.24±0.36)显著高于CG组(0.43±0.05,P<0.01);CG组与ALG组(0.37±0.05)无显著差别(P>0.05)。结论 慢性呼酸显著增加IMCD细胞Cl^-/HCO_3^-交换和KAE2 mRNA表达,慢性呼碱略降低IMCD细胞Cl^-/HCO_3^-交换和KAE2 mRNA表达。

阴离子交换蛋白2功能异常对结肠分泌及蠕动功能的影响

目的探讨阴离子交换蛋白2(AE2)功能异常对结肠黏膜上皮细胞分泌功能及肠管蠕动功能的影响。方法通过复方地芬诺酯灌胃建立SD大鼠便秘模型(模型组,n=17),以未建模SD大鼠作为对照(对照组,n=28)。体外分离培养大鼠结肠黏膜上皮细胞,单细胞离子成像技术比较两组大鼠结肠黏膜上皮细胞培养液中加入AE2抑制剂DIDS前后pH变化值。利用Powerlab系统及Chart5软件绘制离体肠管蠕动曲线,比较两组大鼠离体肠管的蠕动幅度和频率,评价肠管蠕动功能。通过急性滴加试验观察和比较在对照组离体肠管培养液中滴加AE2抑制剂DIDS前后肠管蠕动功能的变化。结果单细胞离子成像技术检测显示,结肠黏膜上皮细胞培养液中加入DIDS后,模型组细胞内pH值继续升高,与加入DIDS后对照组细胞内pH值比较差异有统计学意义(P<0.01)。肠管蠕动曲线观测显示,模型组大鼠离体结肠平滑肌蠕动幅度和频率均明显低于对照组(P<0.05或P<0.01);急性滴加试验表明,培养液中滴加DIDS后,对照组离体结肠平滑肌蠕动幅度和频率均显著降低(P<0.05或P<0.01)。结论 AE2离子转运活性下降可导致结肠分泌功能紊乱及蠕动功能障碍。

阴离子交换蛋白2与肿瘤

阴离子交换蛋白(anion exchanger,AE)2在正常人体多重组织中表达,是一种多功能嵌膜蛋白,最初在红细胞膜上被鉴定。其主要功能是转运一价阴离子,生理条件下以极快速率进行Cl-/HCO3-交换。近年来发现其在某些肿瘤中表达明显异常,可能与肿瘤的发生、发展密切相关,并可能成为肿瘤疫苗治疗的重要靶位。

气道上皮细胞阴离子交换蛋白2在豚鼠支气管哮喘模型中表达的实验研究

目的研究支气管哮喘(简称哮喘)豚鼠气道上皮细胞阴离子交换蛋白2(anion exchanger2,AE2)的表达及意义。方法取20只豚鼠随机分为2组,每组用卵清白蛋白(OVA)致敏,然后分别用生理盐水(对照组)和OVA(哮喘组)雾化吸入激发豚鼠哮喘。在连续雾化3 d后,刮取气道上皮以免疫印迹(western blotting)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法作AE2蛋白及其mRNA表达水平的检测。结果①呼吸频率:激发后对照组与哮喘组比较差异有统计学意义(P<0.01);同组内激发前后比较对照组内差异无统计学意义(P>0.05),哮喘组内比较差异有统计学意义(P<0.01)。②血清IgE浓度和血嗜酸粒细胞(EOS)计数:对照组IgE浓度和EOS计数与哮喘组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。③豚鼠肺组织病理形态改变:光学显微镜观察发现:对照组,豚鼠肺组织未见病理形态改变,哮喘组则有明显哮喘病理形态改变。④AE2蛋白及其mRNA的表达:结果表明对照组豚鼠气道上皮有较高的AE2蛋白和mRNA表达量,哮喘组相对对照组表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 AE2蛋白及mRNA在正常豚鼠气道上皮有一定的基础表达。过敏性哮喘模型豚鼠气道上皮细胞表达的AE2蛋白及mRNA表达明显减少。

气道上皮细胞阴离子交换蛋白2在豚鼠支气管哮喘模型中表达的实验研究

目的 研究支气管哮喘（简称哮喘）豚鼠气道上皮细胞阴离子交换蛋白2（ anion exchanger2，AE2）的表达及意义。方法取20只豚鼠随机分为2组，每组用卵清白蛋白（OVA）致敏，然后分别用生理盐水（对照组）和OVA（哮喘组）雾化吸入激发豚鼠哮喘。在连续雾化3d后，刮取气道上皮以免疫印迹（ western blotting）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）法作AE2蛋白及其mRNA表达水平的检测。结果①呼吸频率：激发后对照组与哮喘组比较差异有统计学意义（P＜0.01）；同组内激发前后比较对照组内差异无统计学意义（P＞0.05），哮喘组内比较差异有统计学意义（P＜0.01）。②血清IgE浓度和血嗜酸粒细胞（EOS）计数：对照组IgE浓度和EOS计数与哮喘组比较，差异有统计学意义（P＜0.01）。③豚鼠肺组织病理形态改变：光学显微镜观察发现：对照组，豚鼠肺组织未见病理形态改变，哮喘组则有明显哮喘病理形态改变。④AE2蛋白及其mRNA的表达：结果表明对照组豚鼠气道上皮有较高的AE2蛋白和mRNA表达量，哮喘组相对对照组表达明显降低，差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 AE2蛋白及mRNA在正常豚鼠气道上皮有一定的基础表达。过敏性哮喘模型豚鼠气道上皮细胞表达的AE2蛋白及mRNA表达明显减少。

二氧化硫体内衍生物通过ROS/JNK/AP-1通路诱导大鼠切牙成釉器细胞AE2蛋白表达上调

探究二氧化硫体内衍生物混合液(亚硫酸钠与亚硫酸氢钠物质的量比为3∶1)对雄性大鼠切牙组织抗氧化防御系统及切牙成釉器细胞丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号转导通路关键蛋白与阴离子交换蛋白2(anion exchanger 2,AE2)表达的影响。30只雄性Wistar大鼠按体质量随机分为高(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))、中(50 mg·kg^(-1)·d^(-1))、低(25 mg·kg^(-1)·d^(-1))二氧化硫衍生物混合液染毒组、高剂量二氧化硫衍生物混合液+N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)染毒组及生理盐水对照组(0.9%氯化钠注射液)。各组均以2 mL·kg^(-1)每日行腹腔注射一次,高剂量+NAC组每次腹腔注射前30 min予200 mg·kg^(-1)NAC水溶液灌胃再施予高剂量组相同染毒操作,连续4周。取大鼠下颌骨切牙组织进行超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活性、还原型谷胱甘肽(reduced glutathione,GSH)及丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)水平测定。剥离包绕切牙根部的下颌骨分离成釉器细胞,以Western blot法检测成釉器细胞MAPKs信号通路关键蛋白及AE2蛋白表达情况。结果显示,低剂量染毒组与对照组比较,大鼠切牙组织多类抗氧化指标及过氧化产物含量的改变均不具统计学意义。中、高剂量染毒组较对照组大鼠切牙组织SOD活性、GSH-Px活性及GSH含量下降、MDA、ROS水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,随二氧化硫衍生物剂量升高,各组大鼠成釉器细胞p-p38 MAPK/p38 MAPK及p-ERK/ERK水平较对照组未见明显变化,而中、高剂量组p-JNK/JNK水平明显升高,AP-1蛋白发生核转位分布,AE2蛋白表达明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05);而ROS抑制剂NAC能使高剂量下AP-1蛋白核转位情况得到改善,并能在一定程度上逆转高剂量二氧化硫衍生物暴露下引起的p-JNK/JNK水平升高及AE2蛋白表达上调。以上结果提示,二氧化硫体内衍生物混合液可造成大鼠切牙组织氧化应激水平升高并通过ROS/JNK/AP-1通路诱导切牙成釉细胞AE2表达上调,具有干扰成釉器细胞成釉功能的潜在毒性。

胆盐在肝移植术后缺血性胆道病变中的作用及研究进展

缺血性胆道病变(ITBL)是由于肝动脉供血不足所导致的胆道受损,是影响肝移植受者长期生存和生活质量的主要因素之一,其发病与冷、热缺血,急、慢性排斥反应,巨细胞病毒感染,胆汁作用等多种因素有关。ITBL的发生是一个多因素、多环节的复杂过程,其治疗手段匮乏,相当一部分患者需要再次肝移植。ITBL已成为阻碍肝移植疗效进一步提高的最主要因素之一,因此加强预防以及寻找更多有效的治疗途径显得尤为重要。近年来发现胆盐的毒性损伤在ITBL中起着中心环节的作用,胆汁成分的主动调节、胆汁酸相关受体表达的调控、胆汁酸相关信号通路的阻断或激活,可能在ITBL的预防和治疗中具备较大的潜力。本文综述了胆盐细胞毒性以及碳酸氢盐伞在肝移植术后ITBL发生、发展中的作用机制,旨在为未来ITBL的诊断和治疗提供参考。