花生电压依赖性阴离子通道基因(AhVDAC)的克隆及在果针向地性反应中表达分析

为研究电压依赖性阴离子通道基因(AhVDAC)与花生果针向地性生长的相关性,本研究克隆了花生AhVDAC基因全长cDNA序列,并对其编码蛋白结构、亚细胞定位、原核表达蛋白及其在果针向地性反应过程的表达特性进行分析。结果表明,AhVDAC基因含有831 bp的开放阅读框,编码一个含有276个氨基酸、分子量大小为29.7 kD、pI值为6.38的蛋白。亚细胞定位分析结果显示,AhVDAC基因主要定位在细胞质。构建了pPROEXHTa-AhVDAC原核表达载体,诱导及分离纯化了37 kD的AhVDAC纯化蛋白。采用RT-PCR对花生果针入土前不同发育时期AhVDAC的表达进行分析发现,AhVDAC基因表达量在果针发育的第2天最高,随后逐渐下降后维持在较低的表达水平。通过对离体培养的花生果针施加外源CaCl_(2)和LaCl_(3)发现,CaCl_(2)明显促进花生果针向地性弯曲和AhVDAC的表达,而LaCl_(3)则减缓果针弯曲和AhVDAC的表达,推测Ca^(2+)的积累可能促进了AhVDAC的表达,并通过生物膜上AhVDAC的运输对Ca^(2+)进行不对称分布,从而使得花生果针改变生长方向,发生向地性弯曲。

人阴离子交换器(hURAT1)基因多态性与代谢综合征的关系

目的探讨人阴离子交换器(hURAT1)基因外显子1C258T位点多态性与代谢综合征组分的关系。方法该研究分为高尿酸血症组(138例)和健康对照组(117例),两组入选者分别测定身高、体重、腰围、臀围、体质指数、血压等;抽空腹血测血尿酸、血糖、血脂、肝酶、尿素氮、肌酐等。采用聚合酶链反应技术分析hURAT1基因外显子1C258位点多态性;采用方差分析的方法,分析该位点多态性与血尿酸、血糖、收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯、体质指数、腰臀围等代谢综合征各组分的相关性。结果CC基因型和CT基因型比较,血尿酸、收缩压、甘油三酯、体重指数、腰臀围比的差异有极显著性意义(P<0.001),总胆固醇、舒张压的差异有显著性意义(P<0.05),空腹血糖的差异无显著性意义。CT基因型和TT基因型比较,血尿酸、收缩压、总胆固醇、体重指数、腰臀围比的差异有极显著性意义(P<0.001),舒张压、甘油三酯、空腹血糖的差异有显著性意义(P<0.05)。结论hURAT1基因外显子1C258T多态性与代谢综合征各组分相关。

云南省汉族肿瘤患者UGT1A1*6及SLCO1B1基因多态性分布

目的:探究尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1基因( UGT1A1* 6)和溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1基因[ SLCO1B1( 388 A>G)]在云南省汉族肿瘤患者中的分布情况。方法:收集122例云南省汉族肿瘤患者外周血,采用数字荧光分子杂交技术对 UGT1A1* 6和 SLCO1B1( 388 A>G)进行基因分型,统计基因型频率和等位基因频率,分析不同临床特征间的基因型分布差异及不同人群间的基因型分布差异。结果: UGT1A1* 6基因分型位点的基因型分为野生型GG、突变杂合子GA及突变纯合子AA, SLCO1B1( 388 A>G)基因分型位点的基因型分为野生型AA、突变杂合子AG及突变纯合子GG;在云南汉族肿瘤患者中, UGT1A1* 6和 SLCO1B1( 388 A>G)两个基因位点的突变频率较高, UGT1A1* 6等位基因的频率为G (77.87%)和A (22.13%), SLCO1B1( 388 A>G)等位基因的频率为A(27.05%)和G(72.95%);云南汉族肿瘤患者的 UGT1A1* 6和 SLCO1B1( 388 A>G)基因型频率在性别、年龄、不同肿瘤部位及与其他肿瘤患者的分布差异均无统计学意义( P >0.05)。结论:云南省汉族肿瘤患者 UGT1A1* 6和 SLCO1B1( 388 A>G)两个基因位点的突变频率较高,与部分临床特征无关。

有机阴离子转运多肽1B3基因遗传变异与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者预后的关联研究

目的探讨有机阴离子转运多肽1B3(OATP1B3)基因单核苷酸多态性(SNP)与TA方案(蒽环类药物+紫杉类药物)新辅助化疗乳腺癌患者预后的关系。方法439例采用TA方案行新辅助化疗的女性乳腺癌患者,化疗前每人抽取静脉血2 ml,筛选标签SNP,采用Sequenom MassARRAY基因分型平台进行标签SNP分型,并分析标签SNP与乳腺癌患者预后的关系。采用多因素Cox回归分析计算进展或死亡风险比(HR)及其95%可信区间(CI)。结果筛选出7个标签SNP,分别是rs11045689、rs200104106、rs3764006、rs3834935、rs4149117、rs7305323和rs73241801。rs11045689与患者无进展生存、总生存有关(P值分别为0.008和0.015)。与携带rs11045689 GG基因型的患者相比,携带rs11045689 AA基因型患者的无进展生存和总生存较差,进展风险比(HR)及其95% CI为1.39(1.11~1.75),死亡HR及其95% CI为1.38(1.04~1.83)。与携带rs73241801 CC基因型的患者相比,携带rs73241801 TT基因型患者的总生存较好(P=0.041),死亡HR及其95%CI为0.65(0.44~0.94)。累积分析显示,携带风险等位基因的数量与患者的无进展生存、总生存均有关(P值分别为0.012和0.017)。与携带0~1个风险等位基因的患者相比,携带4个风险等位基因患者的无进展生存和总生存较差,进展HR及其95% CI为1.37(1.09~1.72),死亡HR及其95% CI为1.36(1.02~1.81)。结论SLCO1B3基因rs11045689和rs73241801与TA方案新辅助化疗乳腺癌患者的预后有关,可作为预测乳腺癌新辅助化疗患者预后的生物标志物。

KDP晶体中散射的研究

光散射是衡量磷酸二氢钾（ＫＤＰ）晶体质量优劣的一个重要参数，但是由于散射点的尺寸小，因而其组成成分和成因的研究、分析十分困难．本文首次利用透射电镜（ＴＥＭ）研究了ＫＤＰ晶体中液相散射颗粒的尺寸、组成成分，提出了散射形成机理，并进行了验证．

阴离子型胰蛋白酶原基因G191R突变与胰腺炎发病的关系

目的 分析阴离子型胰蛋白酶原（PRSS2）基因G191R突变在急性胰腺炎（AP）和慢性胰腺炎（CP）患者中的发生率,探讨PRSS2基因突变对胰腺炎易感性的影响.方法 采集82例AP、73例CP及138例健康体检者的血液标本,提取基因组DNA.应用巢式PCR对PRSS2基因进行扩增.PCR产物用Hpy188Ⅲ酶切,行限制性片段长度多态性分析（RFLP）,部分产物测序验证.结果 PRSS2基因的巢式PCP产物长度为436 bp,RFLP2获得309 bp和127 bp两个片段,为RPSS2基因G191R突变（即GGA→AGA）所致.DNA测序证实PRSS2基因G191R突变.AP患者中5例发生RPSS2基因G191R突变,突变率为6.1％（5/82）,OR=0.682,95％ CI 0.231 ～ 2.010; CP患者突变率为1.4％ （1/73）,OR =0.145,95％ CI 0.019～1.145;健康对照组为8.7％ （12/138）.CP组的G191R突变率显著低于健康对照组（x2 =0.432,P=0.035）,而AP组与健康对照组的差异无统计学意义（x2=0.487,P=0.485）.结论 PRSS2基因G191R突变可促进阴离子型胰蛋白酶原的降解,降低慢性胰腺炎的发生率.

北方地区新生儿高胆红素血症患儿UGT1A1和OATP2基因突变的研究

目的了解我国北方地区新生儿高胆红素血症的形成与尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)和有机阴离子转运载体2(OATP2)基因突变的关系。方法应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性方法测定新生儿重症高胆红素血症、高胆红素血症及非高胆红素血症患儿的UGT1A1基因211位点(Gly71Arg)突变及OATP2基因388位点(Asn130Asp)突变,并检验各组基因型分布及等位基因频率差异。应用Logistic回归模型,分析两种基因突变对高胆红素血症的影响。结果重症高胆红素血症组68例,高胆红素血症组95例,对照组63例。重症高胆红素血症组和高胆红素血症组UGT1A1基因211位点突变率和OATP2基因388位点突变率均高于对照组(36.8%、26.8%比14.3%,25.7%、25.8%比9.5%,P均<0.05);重症高胆红素血症组和高胆红素血症组差异无统计学意义(P>0.05)。Logistic回归分析显示,UGT1A1基因211位点突变和OATP2基因388位点突变是新生儿重症高胆红素血症的危险因素,OR值(95%CI)分别为5.052(2.383～10.713)和2.692(1.236～5.862)(P=0.001和0.013)。结论携带UGT1A1基因211位点突变及OATP2基因388位点突变与新生儿高胆红素血症的形成有一定关系。

RT-PCR检测OATP-B和OATP-D mRNA在肺癌组织中的表达及其意义

目的:建立荧光定量RT-PCR法检测肺癌组织中人类有机阴离子转运多肽(OATP)B和DmRNA的表达,并分析其表达与病理分型及临床资料的关系。方法:SYBRGreen实时荧光定量PCR定量检测OATP-B和OATP-D的mRNA在40例肺癌中的表达,分析其在不同病理分型肺癌和正常肺组织间及有无淋巴结转移肺癌间的表达差异,并用10例正常肺组织作对照。结果:与正常肺组织相比,OATP-B和OATP-D的mRNA在肺癌中表达均上调,差异有统计学意义,P<0.05;OATP-B和OATP-D的mRNA在有无淋巴结转移肺癌中的表达差异有统计学意义,P<0.05。结论:肺癌中OATP-B和OATP-D的mRNA表达均明显高于正常肺组织,且OATP-B和OATP-D的mRNA在淋巴结转移肺癌中的表达均高于无淋巴结转移肺癌。