糖尿病性勃起功能障碍与阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的相关研究进展

糖尿病性勃起功能障碍(Diabetic Erectile Dysfunction,DMED)与阴茎海绵体平滑肌细胞(Corporal Cavernous Smooth Muscle Cells,CCSMC)表型转化关系密切。CCSMC表型转化是一种CCSMC由“收缩型”向“合成型”或“增殖型”转化的趋势。阴茎的勃起是神经-内分泌调节下的海绵体血流动力学变化过程,其中CCSMC的舒张在此过程中起着关键作用。CCSMC表型转化的标志性蛋白包括收缩型和合成型,前者包括α-平滑肌肌动蛋白(α-Smooth Muscle Actin,α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(Smooth Muscle Myosin Heavy Chain,SMMHC)等;后者包括骨桥蛋白(Osteopontin,OPN)、波形蛋白等蛋白。若收缩型蛋白表达下调或合成型蛋白表达上调,则提示CCSMC发生表型转化,反之称为逆表型转化。研究表明,DMED大鼠CCSMC中α-SMA等收缩型标志物表达下降,而OPN等合成型(增殖型)标志物上升,显示DMED可以促使CCSMC发生表型转化。DMED的发病机制包括血管病变、神经病变、阴茎海绵体平滑肌因素、神经递质调节、内分泌紊乱等因素。当前,大多数学者皆从血管病变方面研究DMED与CCSMC表型转化之间的关系。研究表明,CCSMC表型转化会导致阴茎海绵体结构发生改变,进而影响DMED患者的勃起功能。文章根据目前研究成果,对DMED与CCSMC表型转化相关研究进行系统回顾,以期寻求一种治疗DMED的新思路,从而更好地造福人类。

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞α-肌动蛋白和骨桥蛋白表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)α-肌动蛋白、骨桥蛋白(OPN)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组(21%O2浓度)、低氧组(1%O2浓度)、低氧+红景天苷1 mg/L组、低氧+红景天苷3 mg/L组、低氧+红景天苷5 mg/L组、低氧+前列腺素E1(PGE1)0.4μg/L组,分别培养48 h;RT-PCR法分别测定各组α-肌动蛋白、OPN的相对表达量。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化染色阳性;与正常对照组比较,低氧组细胞的α-肌动蛋白表达量下降、OPN表达量升高(P<0.01);与低氧组比较,红景天苷5 mg/L组α-肌动蛋白表达量升高、OPN表达量降低(P<0.01),与PGE1作用相当(P﹥0.05)。结论:低氧可引起SD大鼠CCSMC收缩型标志物α-肌动蛋白表达降低,合成型标志物OPN表达升高,推测低氧可能引起CCSMC由收缩型向合成型转化。红景天苷能抑制低氧引起的CCSMCα-肌动蛋白表达降低、OPN表达升高,浓度为5 mg/L时与PGE1作用几乎相当。

红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞缝隙连接蛋白43表达的影响

目的:探讨红景天苷对低氧环境下SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设常氧对照组(21%O_2)、低氧组(1%O_2)、低氧+红景天苷8μg/ml组、低氧+红景天苷16μg/ml组、低氧+红景天苷32μg/ml组和低氧+红景天苷64μg/ml组,分别培养48 h;Western印迹测定Cx43相对表达量。结果:体外培养CCSMC生长良好,抗α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和抗desmin抗体免疫组化染色阳性,CCSMC占比90%以上。MTT法结果显示,红景天苷浓度≤64μg/ml时,对CCSMC无明显毒性;而128μg/ml和256μg/ml红景天苷对CCSMC有一定的抑制作用。未加红景天苷干预时,与常氧对照组相比,低氧组Cx43总蛋白和磷酸化蛋白表达均显著升高(P<0.01和P<0.05),磷酸化比例未见明显变化(P>0.05);与低氧不加药组相比,不同浓度红景天苷干预后Cx43表达量仍显著升高,但Cx43蛋白磷酸化比例显著降低,差异均有显著性(P均<0.05)。结论:低氧促进大鼠CCSMC Cx43表达升高,红景天苷浓度≤64μg/ml无法逆转上述缺氧改变,但降低了Cx43磷酸化比例。推测红景天苷能通过降低Cx43磷酸化比例抑制缺氧引起的缝隙连接通道形成,保护平滑肌细胞功能。

低氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨低氧和SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)凋亡的关系。方法:体外培养CCSMC,免疫组化鉴定细胞;低氧(1%O2浓度)干预12、24、48、72 h,常规氧浓度作为对照,流式细胞术测定细胞周期变化和凋亡情况。结果:体外培养的CCSMC生长良好,抗平滑肌α-肌动蛋白单克隆抗体免疫组化DAB法染色阳性。流式细胞术检测CCSMC G0/G1期在48 h内细胞比例逐渐增加,后下降;S期细胞比例与G0/G1期呈相反趋势;G2/M期细胞比例无明显规律。结论:CCSMC在低氧环境下,随时间的延长凋亡程度加重,48 h达到最大值,进一步延长时间细胞裂解,不能加重凋亡。

血小板源性生长因子-BB对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化影响的初步研究

目的:研究血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化的影响。方法:改良组织块法原代培养大鼠CCSMC,并进行细胞免疫荧光鉴定。实验分为空白对照组和不同浓度(5、10、20、40 ng/ml)PDGF-BB组,处理24 h;以及空白对照组和20 ng/ml PDGF-BB作用细胞不同时间(24、48、72 h)组,利用qRT-PCR检测各组细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、碱性调宁蛋白和骨桥蛋白(OPN)mRNA的表达。结果:原代培养CCSMCα-SMA阳性细胞率达95%以上。与空白对照组比较,不同浓度PDGF-BB作用大鼠CCSMC后α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少(P均<0.05);OPN mRNA表达水平显著上调(P<0.05)。与空白对照组比较,随20 ng/ml PDGF-BB作用细胞时间的延长,α-SMA、SMMHC、碱性调宁蛋白的mRNA表达显著减少,OPN mRNA表达水平上调,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论:PDGF-BB可促使SD大鼠CCSMC表型从收缩型向合成型转化。

牛蒡根化学成分对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响

目的:观察牛蒡根化学成分牛蒡低聚果糖和山奈素对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖的影响,探讨牛蒡根对勃起功能障碍治疗作用的可能机制。方法:利用MTT体外药物筛选法测试受试样品对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外增殖活性的影响。结果:牛蒡低聚果糖100、50μg/ml能够明显促进细胞的增殖,且有时间依赖性;山奈素100、50μg/ml对细胞的增殖有抑制作用;25、12.5μg/ml能够明显促进细胞的增殖,且有时间依赖性。结论:牛蒡根化学成分对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞有增殖作用。

降钙素基因相关肽对高血压性勃起功能障碍大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖及表型转化的影响

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对高血压性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSM)增殖及表型转化的影响。方法选取20只自发性高血压Wistar大鼠(SHR)及10只同系正常血压健康大鼠(WKY),测量大鼠尾部动脉收缩压,通过颈部皮下注射阿朴吗啡后观察大鼠阴茎勃起情况,SHR大鼠中无阴茎勃起的归为高血压勃起功能障碍(HBP-ED)组,出现阴茎勃起的归为高血压(HBP)组,WKY大鼠归为对照组。取各组大鼠阴茎海绵体平滑肌组织行细胞原代培养。不同浓度(1、10和100nmol/L)CGRP作用于培养的细胞后,采用MTT法检测细胞增殖情况,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞碱性调宁蛋白(Cnn1)和骨桥蛋白(OPN)mRNA表达水平。结果不同浓度CGRP均可抑制高血压性ED大鼠CCSM的增殖,且抑制程度随CGRP浓度增加而加剧。当CGRP作用的终浓度为100nmol/L时,HBP组和HBP-ED组Cnnl m RNA表达水平较组内0nmol/L浓度均上调(均P<0.05),OPN mRNA表达水平较组内0nmol/L浓度均下调(均P<0.05)。结论 CGRP可抑制高血压性ED大鼠CCSM的增殖,可使高血压性ED大鼠CCSM表型发生逆转化,即由合成型向收缩型转化。

胰岛素样生长因子结合蛋白-3在原代培养的阴茎海绵体平滑肌细胞中的表达及定位

目的:观察胰岛素样生长因子结合蛋白-3(insulin-like growth factor binding protein 3,IGFBP-3)在阴茎海绵体平滑肌细胞(corpus cavernosum endothelial cells,CCSMCs)中的表达及定位情况。方法:原代培养大鼠CCSMCs并鉴定,RT-PCR检测IGFBP-3基因mRNA表达,用荧光免疫细胞化学法检测IGFBP-3在CCSMCs中的定位及蛋白表达。结果:RT-PCR能够检测到IGFBP-3 802bp特异性条带的表达,荧光免疫细胞化学法可见IGFBP-3蛋白表达并同时定位于CCSMCs胞质和胞核中。结论:CCSMCs可表达IGFBP-3基因,其蛋白定位于胞质和胞核,可能是ED治疗的新靶点。

外源性硫化氢通过抑制阴茎海绵体平滑肌细胞凋亡改善海绵体神经损伤大鼠勃起功能障碍

目的观察外源性硫化氢对双侧海绵体神经损伤(BCNI)大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)凋亡及勃起功能障碍的影响。方法将24只SD雄性大鼠随机分为3组(n=8只/组):假手术组、双侧海绵体神经损伤组(BCNI组)、硫化氢干预组(BCNI+NaHS组)。通过钳夹损伤双侧海绵体神经构建BCNI模型。BCNI+NaHS组每天腹腔注射100μmol/kg的NaHS溶液;BCNI组每日腹腔注射等量生理盐水。治疗4周后检测海绵体内压(ICP)和平均动脉压(MAP),并通过Western blot检测胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE),α-SMA,Collagen-Ⅰ,Caspase-3、Bax、Bcl-2表达水平,通过免疫组化检测CBS、CSE表达情况,Masson’s Trichrome染色检测海绵体平滑肌/胶原比值,以及TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染检测CCSMC凋亡水平。结果治疗4周后,BCNI+NaHS组ICP/MAP比值高于BCNI组(P<0.05);Masson’s Trichrome染色结果显示,BCNI+NaHS组海绵体平滑肌/胶原比值较BCNI组显著升高(P<0.05);Western blot结果显示BCNI+NaHS组α-SMA蛋白表达高于BCNI组(P<0.05),同时Collagen-Ⅰ蛋白表达低于BCNI组(P<0.05);TUNEL+α-SMA组织免疫荧光双染结果显示,BCNI+NaHS组CCSMC凋亡数较BCNI组降低(P<0.05)。与BCNI组相比,BCNI+NaHS组Caspase-3、Bax蛋白表达降低(P<0.05),Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值升高(P<0.05)。BCNI组CBS、CSE表达较其余两组显著降低(P<0.05)。结论外源性硫化氢可提高经典的抗凋亡蛋白Bcl-2及抑制CCSMC凋亡,进而改善BCNI大鼠勃起功能。

缺氧对SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的影响

[目的]研究缺氧对阴茎海绵体平滑肌细胞(cavernosum smooth muscle cells,CCSM)表型转化的影响。[方法]用酶消化法获取SD大鼠的原代CCSM,并用细胞免疫荧光法进行鉴定。将原代CCSM置于缺氧小室中(37℃,5%CO2,1%O2,94%N2)培养,按缺氧时间分为0h组、24h组、48h组、72h组,用western-blot法检测四组的α-SMA、OPN蛋白表达量。[结果]低氧可以诱导CCSMα-SMA蛋白表达下降,且在72h内随着缺氧时间延长差异显著性增加。低氧24h组细胞OPN蛋白表达增加(P<0.05);低氧48h组细胞OPN蛋白表达显著增加(P<0.01);48h后随着时间延长差异可能会减小(P>0.05)。[结论]缺氧可以诱导CCSM由收缩型向合成型转化。

血小板源性生长因子-BB对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞增殖、迁移及表型转化的影响

目的了解血小板源性生长因子-BB(PDGFBBB)对大鼠阴茎海绵体平滑肌(CCSM)细胞增殖、迁移及表型转化的影响并初步探讨其作用机制。方法采用改良的组织块培养法培养Wistar大鼠CCSM细胞,并用细胞免疫荧光法鉴定。利用CCK-8法检测不同浓度的PDGFBB对培养的大鼠CCSM细胞增殖的影响,并筛选出最适PDGFBB作用浓度。分别用0 ng/m L PDGFBB与最适浓度PDGFBB处理CCSM细胞,利用划痕实验检测PDGFBB对CCSM细胞迁移的影响,24 h和48 h时利用q RT-PCR检测细胞中转录因子myocardin及收缩型表型标志物α-SMA、SMMHC mRNA表达水平;用最适浓度PDGFBB处理CCSM细胞0、24和48 h后,利用western blotting检测细胞中myocardin的蛋白表达水平。结果原代培养的CCSM细胞中α-SMA和smoothelin阳性率分别约为96.5%和96%;不同浓度的PDGFBB均能明显促进CCSM细胞增殖,其最适浓度为12.5 ng/m L。PDGFBB(12.5 ng/m L)能促进CCSM细胞迁移,下调CCSM细胞中myocardin、α-SMA和SMMHC mRNA表达水平(P均<0.01);在48 h内myocardin蛋白质的表达水平随着PDGFBB作用时间增加而降低。结论改良的组织块培养法可获得高纯的CCSM细胞;PDGFBB可促进CCSM细胞增殖、迁移,使细胞从收缩型向合成型转化,其机制可能是通过下调myocardin。

阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化和勃起功能障碍的相关研究进展

勃起功能障碍(ED)与阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)表型转化密切相关。CCSMC表型转化表现为一种CCSMC由"收缩型"向"合成型"或"增殖型"改变的趋势,α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)、碱性调宁蛋白、肌滑蛋白、肌间线蛋白等可作为收缩型CCSMC分子标志物,波形蛋白、骨桥蛋白、I型胶原蛋白等可作为合成型或增殖型CCSMC分子标志物。目前,以CCSMC表型转化作为切入点进行研究相对较多的是双侧海绵体神经损伤所致的神经源性ED和糖尿病性ED,亦可见动脉性ED、高血压性ED的少许报道;另外,缺氧、血小板源性生长因子、烟草燃烧气体等外界因素直接作用于大鼠或CCSMC时亦会导致CCSMC表型转化。本文将根据目前的研究报道,对CCSMC表型转化与ED相关研究进行系统回顾。

红景天苷通过PDGFR/STAT3信号通路调控大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化的实验研究

目的:探索红景天苷(Salidroside)对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMCs)表型转化的调控作用机制。方法:分离获取SD大鼠原代CCSMCs,在低氧环境中培养24 h并观察红景天苷(30μg/ml)的干预作用,Western印迹测HIF-1α、PDGF受体(PDGFR)及表型转化相关蛋白(α-SMA和Collagen I)的表达变化;CCSMCs培养体系中加入外源性PDGF-BB(20 ng/mL)处理24 h,同时观察红景天苷或PDGFR抑制剂Crenolanib(100 nmol/L)的干预作用,Western印迹检测PDGFR、磷酸化PDGFR、表型转化相关蛋白(α-SMA和Collagen I)、STAT3、磷酸化STAT3、STAT5及磷酸化STAT5蛋白的表达变化;在外源性PDGF-BB刺激CCSMCs的基础上,同时观察红景天苷、STAT3过表达、红景天苷+STAT3过表达的干预作用,Western印迹检测表型转化相关蛋白(α-SMA和Collagen I)、STAT3、磷酸化STAT3蛋白的表达变化。结果:CCSMCs在低氧环境中培养24 h后HIF-1α蛋白表达显著增高(P<0.05),提示成功构建CCSMCs低氧模型,同时CCSMCs中PDGFRα、PDGFRβ及Collagen I蛋白表达显著增高(P均<0.05),α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05),经红景天苷干预后,上述情况受到明显抑制(P均<0.05);CCSMCs受到外源性PDGF-BB刺激24 h后PDGFRα、PDGFRβ和STAT3磷酸化比例及Collagen I蛋白表达显著增高(P均<0.05),α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05),经Crenolanib或红景天苷干预后,上述情况受到明显抑制(P均<0.05),各组STAT5磷酸化比例差异无统计学意义(P>0.05);外源性PDGF-BB处理CCSMCs的同时运用红景天苷进行干预,若过表达STAT3可致CCSMCs中α-SMA蛋白表达显著下降(P<0.05),Collagen I蛋白表达显著增高(P<0.05)。结论:初步证实红景天苷可通过PDGFR/STAT3信号通路改善大鼠CCSMCs表型转化,尚需进一步验证探讨。

成人及家兔阴茎海绵体平滑肌细胞培养和鉴定

目的 :探索阴茎海绵体平滑肌细胞 (CCSM)体外培养及鉴定方法。 方法 :采用勃起功能正常的成年男子及新西兰家兔的新鲜阴茎标本 ,经处理后采用原代细胞培养法 ,对阴茎海绵体组织块进行培养 ,获得CCSM后用光镜、透射电镜和免疫组化等多种方法从细胞形态学及CCSM生长特性等不同侧面对培养的人及新西兰家兔的CCSM进行鉴定 ,并测定CCSM在体外培养时的细胞增殖情况。 结果 :经 2 4h潜伏期 ,体外培养的CCSM进入指数增长期 ,维持约 96h后进入平台期 ;从接种组织块至长成单层细胞约需 15～ 2 0d ,传代后约 4～ 7d后长成单层 ;传代后的细胞增殖旺盛 ,成束状生长 ,并呈现层叠排列及“峰 谷”现象 ;CCSM在体外可稳定传 7～ 12代 ,传代期间其形态及增殖活性变化不明显 ;各种检测鉴定均证实所获细胞为CCSM。 结论 :CCSM原代细胞培养法简便、稳定、可靠 ,对研究阴茎的勃起机制及勃起功能障碍的发生、发展、调控及其治疗药物筛选有重要理论及现实意义。

H2O2对大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞connexin43蛋白表达的影响及红景天苷的干预作用

目的:探讨红景天苷对H2O2所致大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMC)缝隙连接蛋白43(Cx43)表达下调的干预作用。方法:体外分离、培养SD大鼠CCSMC,并利用免疫细胞荧光技术进行细胞鉴定。MTT法检测H2O2对CCSMC存活率的影响,以确定最佳干预浓度。利用最佳浓度H2O2于体外对CCSMC进行干预,并设立干预时间梯度;利用H2O2处理CCSMC的同时,加入低(16μg/ml)、高浓度(64μg/ml)红景天苷进行干预,最终提取获得各组别蛋白,并通过Western印迹检测Cx43表达。结果:原代培养的CCSMC生长状态正常,细胞鉴定结果显示阳性率达90%以上。MTT试验确定用于体外实验的H2O2最佳浓度为200μmol/L。利用200μmol/L H2O2处理CCSMC0、1、2、4h,与空白组相比,1、2、4h组CCSMC中Cx43蛋白水平显著下降(P<0.01);与1h和2h组相比,4h组CCSMC中Cx43蛋白水平显著下降(P<0.01)。利用200μmol/L H2O2处理CCSMC的同时,分别加入低剂量和高剂量红景天苷进行干预,与正常对照组相比,H2O2处理组CCSMC中Cx43蛋白表达明显下降(P<0.05),高剂量红景天苷处理后可抑制该现象(P<0.01),且高剂量红景天苷组CCSMC中Cx43蛋白水平与正常对照组相比无统计学差异(P=0.3222)。结论:红景天苷在体外具有调节H2O2所致大鼠CCSMC中Cx43蛋白表达下降的作用。

高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞表型转化

目的探讨高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌是否存在表型转化及对勃起功能的影响。方法16周龄雄性自发性高血压大鼠(SHR)及其同系正常血压大鼠(WKY),测量尾动脉收缩压,颈部皮下注射阿朴吗啡后检测阴茎勃起功能,然后将大鼠分为高血压勃起功能障碍组(HBP&ED)、高血压组(HBP)和正常对照组(Control)。免疫组化染色和彩色图文分析系统分析各组大鼠阴茎海绵体中平滑肌细胞碱性调宁蛋白(calponin1)和骨桥蛋白(osteopontin,OPN)的表达,实时荧光定量RT-PCR分析各组大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞calponin1mRNA和OPN mRNA的相对表达量。结果在大鼠阴茎海绵体中calponin1和calponin1mRNA表达情况:HBP&ED组低于HBP组(P=0.021,P=0.006)和control组(P=0.000,P=0.001),HBP组低于control组(P=0.000,P=0.015);OPN和OPN mRNA表达情况:HBP&ED组高于HBP组(P=0.000,P=0.000)及control组(P=0.000,P=0.000),HBP组高于control组(PP=0.013,P=0.000)。结论高血压大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞存在表型由收缩型向合成型转化,这种转化达到一定程度最终可能导致大鼠勃起功能障碍。

小干扰RNA抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43的表达

目的:利用小干扰RNA(siRNA)抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接蛋白connexin43(Cx43)的表达和检测细胞间间隙连接通讯功能,探讨该技术在阴茎海绵体平滑肌细胞间隙连接和阴茎勃起功能研究中的应用。方法:利用Ambion公司设计软件,构建靶向人Cx43基因的siRNA重组质粒,转染人阴茎海绵体平滑肌细胞48h后,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹检测Cx43基因和蛋白的相对表达水平、划痕标记荧光染料传输技术检测细胞间间隙通讯功能,并分别与siRNA阴性对照、空白对照组比较。结果:酶切和测序证实siRNA真核表达载体构建成功。siRNA重组质粒转染细胞后的Cx43 mRNA和蛋白相对表达水平分别为(0.45±0.08)%、(0.56±0.06)%,与siRNA阴性对照组(0.72±0.04)%、(0.80±0.08)%和空白对照组(0.74±0.09)%、(0.77±0.11)%相比,差异均有显著性(P(0.05);转染后的细胞间间隙连接通讯功能也显著降低。结论:siRNA能有效抑制人阴茎海绵体平滑肌细胞Cx43的表达和阻断间隙连接介导的间隙连接通讯功能。

兔阴茎海绵体平滑肌细胞培养及其RyRs的表达

目的探讨兰尼碱受体(RyRs)在兔阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSM)的正常表达。方法取雄性性成熟新西兰兔CCSM细胞,用组织块法进行细胞培养,差速贴壁法进行细胞纯化,利用倒置显微镜观察、免疫荧光染色法鉴定细胞纯度;取三代以内培养细胞,通过Genebank查出RyRscDNA序列,针对RyRs3种不同亚型的非同源部分用PrimerPremier5.0软件设计3对引物,以逆转录PCR方法分别检测RyRs3种亚型mRNA的表达,凝胶成像系统分析结果。结果培养7d开始有细胞从组织块长出,15～20d后长满瓶底,呈典型的“峰-谷”现象,经倒置显微镜观察见培养的细胞呈现典型的梭形,免疫荧光染色可见细胞内染为绿色的肌丝,证实培养的细胞为CCSM细胞,经差速贴壁法纯化后,细胞纯度可接近100%。经RT-PCR检测,CCSM只表达RyRs1,未见RyRs其余亚型的表达,提示CCSM表达RyRs1蛋白。结论CCSM表达RyRs中的1亚型,提示其可能参与CCSM细胞的钙调节,进而能调节阴茎勃起功能。

PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞cNMP的影响

目的 :观察PDE5基因反义寡脱氧核苷酸对人阴茎海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的影响 ,为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验依据。 方法 :将PDE5基因反义寡脱氧核苷酸 (含第 1外显子部分序列 )与脂质转染试剂DOTAP共同转染人阴茎海绵体平滑肌原代细胞 ,以酶联免疫法分别检测转染后不同时间 (1～ 4 8h)海绵体平滑肌细胞内cAMP和cGMP的浓度变化 ,观察反义寡脱氧核苷酸对平滑肌细胞内cNMP的影响。 结果 :转染后 ,反义实验组平滑肌原代细胞内cGMP水平 (1～ 6h)显著高于对照组 (P <0 .0 1)。 结论 :PDE5基因反义寡脱氧核苷酸可以增加人阴茎海绵体平滑肌细胞cGMP水平 ,本研究有助于了解PDE5基因与cNMP在阴茎勃起中的作用 ,并为阴茎勃起功能障碍的基因治疗提供理论和实验基础。

大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定

目的探讨Wistar大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞体外培养的方法及其生物学特性。方法采用组织培养法进行培养并行免疫组化鉴定,观察其形态及测定细胞活性。结果大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞为梭,呈长轴平行排列,体外贴壁快,在合适的条件下能够生存并保持其稳定的生物学特性。结论大鼠阴茎海绵平滑肌细胞原培养方便可行,对研究阴茎勃起及ED机制有较大帮助。