复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证6-OHDA模型大鼠黑质α-syn、VAPB、PTPIP51表达的影响

目的观察复方地黄颗粒对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)大鼠黑质α-syn、VAPB、PTPIP51表达的影响,并探讨其潜在作用机制。方法构建6-羟基多巴胺(6-OHDA)PD大鼠模型,成模大鼠随机分为Model组、Madopar组、CLD组、CMD组、CHD组,NC组不做任何处理,SO组注射抗坏血酸,每组13只。检测大鼠神经行为学变化;Western blot、RT-PCR、免疫组化检测黑质α-syn、VAPB、PTPIP51表达;HE染色观察黑质组织病理形态变化;透射电镜观察黑质细胞线粒体超微结构;ELISA检测各组黑质组织ATP含量变化。结果与NC组和SO组比,Model组大鼠旋转圈数和爬杆时间增加,α-syn表达升高,VAPB、PTPIP51表达降低,神经元细胞数量减少、胞体皱缩,线粒体肿胀,线粒体嵴消失,ER-线粒体接触距离变大,ATP含量降低;与Model组相比,Madopar组和CLD组、CMD组、CHD组大鼠旋转圈数和爬杆时间减少,α-syn表达降低,VAPB、PTPIP51表达升高,神经元损伤程度减轻,线粒体形态有所改善,ATP含量增加,呈量效差异性,Madopar组和CHD组相对疗效较佳且差异无统计学意义。结论复方地黄颗粒能够减轻PD大鼠行为症状,并可能通过下调α-syn表达,上调PTPIP51、VAPB表达,改善线粒体功能,从而发挥治疗PD的作用。

复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证大鼠多巴胺能神经元生物学功能的影响

目的探讨复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠多巴胺(DA)能神经元生物学功能的作用。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体注射法制备PD阴虚动风证动物模型,成模大鼠随机分为模型组、美多芭组(150 mg/kg)和复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g/kg),分别给予相应药物进行干预,正常组、假手术组及模型组给予生理盐水,共灌胃28 d,观察各组大鼠一般情况及神经行为学,HE染色观察黑质组织病理改变,透射电镜技术观察损毁侧黑质内DA能神经元的线粒体结构,免疫组化、Western blot及RT-qPCR法检测DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达。结果与正常组、假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加(P<0.01),游泳评分降低(P<0.01),悬挂时间减少(P<0.01),黑质神经元数量减少,形态受损,黑质内神经元出现线粒体肿胀变性,线粒体嵴消失等损伤,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC 1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.01);与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠旋转圈数减少(P<0.01),游泳评分升高(P<0.01),悬挂时间增加(P<0.01),线粒体形态结构损伤减轻,损伤侧黑质DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC 1 mRNA和蛋白表达均升高(P<0.05,P<0.01),复方地黄颗粒高剂量效果与美多芭相当(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过调控DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达促进内质网-线粒体稳态,减轻线粒体损伤,维持DA能神经元生物学功能。

复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证大鼠纹状体PINK1、Parkin、α-syn表达的影响

目的观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠纹状体PTEN诱导假定激酶1(PINK1)、Parkin、α-突触核蛋白(α-syn)表达的影响,探讨其治疗PD阴虚动风证的作用机制。方法采用黑质注射6-羟基多巴胺制备PD阴虚动风证模型。将65只成模大鼠随机分为模型组、美多芭(150mg/kg)组和中药低、中、高剂量(1.75、3.5、7g/kg)组,另取26只大鼠分为正常对照组和假手术组,每组13只,各给药组分别予相应药液灌胃,正常对照组、假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续28d。检测大鼠行为学变化,ELISA和生化试剂盒分别检测纹状体三磷酸腺苷(ATP)含量及线粒体呼吸链复合物Ⅳ(COXⅣ)活性,HE染色观察纹状体组织形态,免疫组化染色、Westernblot和RT-qPCR检测纹状体PINK1、Parkin、α-syn蛋白和mRNA表达。结果与正常对照组和假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数和爬杆时间增加,游泳评分降低(P<0.01),纹状体ATP含量及COXⅣ活性降低(P<0.01),神经元排列混乱、数量减少、细胞肿胀,部分细胞核皱缩,空泡形成,边界模糊,纹状体PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达降低(P<0.01),α-syn蛋白和mRNA表达升高(P<0.01);与模型组比较,各给药组大鼠旋转圈数和爬杆时间减少,游泳评分升高(P<0.01),纹状体ATP含量及COXⅣ活性升高(P<0.05,P<0.01),神经元数量增加、排列趋于整齐、形态有所改善,纹状体PINK1、Parkin蛋白和mRNA表达升高(P<0.05,P<0.01),α-syn蛋白和mRNA表达降低(P<0.05,P<0.01),以美多芭组和中药高剂量组改善最明显(P<0.05,P<0.01),2组差异无统计学意义(P>0.05),且中药各剂量组呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。结论复方地黄颗粒可改善PD阴虚动风证大鼠行为学症状,可能通过调节纹状体PINK1、Parkin、α-syn表达,进而减轻线粒体功能障碍,保护多巴胺能神经元,发挥治疗PD作用。

复方地黄颗粒通过泛素-蛋白酶体系统治疗PD阴虚动风证大鼠的分子机制研究

目的探讨复方地黄颗粒通过调节泛素-蛋白酶体系统相关蛋白变化治疗帕金森病(PD)阴虚动风证的分子机制。方法随机选取26只SPF级雄性SD大鼠作为正常对照组、假手术组,每组13只,其余大鼠采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑部偏侧注射损毁黑质法制备PD阴虚动风证大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组,美多芭组(150 mg·kg^(-1)),复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g·kg^(-1)),每组13只。各组连续灌胃给药28 d。观察各组大鼠一般情况及神经行为学表现;免疫组化法、Western blot及qPCR法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体组织中泛素(UB)、泛素激活酶(UBE1)、泛素结合酶(UBE2A)、泛素羧基末端水解酶(UCH-L1)阳性细胞表达、蛋白及mRNA表达水平;ELISA法检测各组大鼠脑部损毁侧纹状体中多巴胺(DA)含量变化。结果正常对照组与假手术组一般情况无明显差异,旋转圈数、悬挂时间及移动格数差异无统计学意义,与假手术组比较,模型组大鼠精神差,易激惹,肢体震颤,行动迟缓,毛色黯黄,饮食少,体质量减轻,旋转圈数增加、悬挂时间及移动格数减少(P<0.01),损毁侧纹状体中UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.01),DA含量明显减少(P<0.01);与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠一般情况有所改善,旋转圈数减少、悬挂时间及移动格数增加(P<0.05,P<0.01),UB、UBE1、UBE2A、UCH-L1阳性细胞表达、mRNA及蛋白表达水平提高(P<0.05,P<0.01),DA含量增加(P<0.01);行为学检测及各指标表达水平以美多芭组和复方高剂量组改善最明显(P<0.05,P<0.01),此二者无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过调控泛素-蛋白酶体系统相关蛋白的表达,减少异常蛋白聚集,从而减轻DA含量缺失,发挥治疗PD阴虚动风证的作用,并以复方地黄颗粒高剂量效果最佳。

复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证大鼠肠-肝-脑轴DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达的影响

目的观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠肝脏和结肠组织DJ-1、肌醇1,4,5-三磷酸受体(IP3R)、葡萄糖调节蛋白75(GRP75)、电压依赖性阴离子通道1(VDAC1)表达的影响。方法采用右侧黑质注射6-羟基多巴胺法制备PD阴虚动风证大鼠模型,将造模成功的65只大鼠随机分为模型组、美多芭组(美多芭150 mg/kg)和中药低、中、高剂量组(复方地黄颗粒1.75、3.5、7 g/kg),每组13只。另取13只未造模大鼠为正常对照组、13只仅注射抗坏血酸溶液大鼠为假手术组。各药物组予相应药物灌胃,正常对照组、假手术组和模型组予生理盐水灌胃,每日1次,连续28 d。观察大鼠神经行为学变化,HE染色观察肝组织、结肠组织形态,免疫组化染色、RT-PCR、Western blot分别检测肝组织和结肠组织DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1蛋白及mRNA表达。结果与正常对照组和假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加,肝组织颗粒样变性,细胞胞质疏松,少量肝细胞脂肪变性,结肠黏膜层及黏膜下层水肿,结缔组织疏松,有少量淋巴细胞浸润,较多血管扩张,肝组织和结肠组织DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1蛋白及m RNA表达均明显降低(P<0.01);与模型组比较,美多芭组及中药各剂量组大鼠旋转圈数减少,肝细胞轻度颗粒样变性,胞质疏松,肝索排列较整齐,结肠轻度水肿,有少量淋巴细胞、粒细胞浸润,少量血管扩张,肝组织和结肠组织DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1蛋白及mRNA表达均明显升高(P<0.05),中药高剂量组变化最明显,与美多芭组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过调节肝组织和结肠组织DJ-1、IP3R、GRP75、VDAC1表达恢复内质网-线粒体稳态,改善肠-肝-脑轴线粒体功能,保护多巴胺能神经元,延缓PD进程。

基于TLR4/NF-κB信号通路探讨复方地黄颗粒治疗帕金森病阴虚动风证大鼠的作用机制

目的 基于复方地黄颗粒对右侧黑质中TLR4/NF-κB信号通路的影响,探讨治疗帕金森病阴虚动风证大鼠的可能作用机制。方法 100只SPF级雄性SD大鼠,随机选取20只作为正常对照组和假手术组(n=10),剩余80只采用6-羟基多巴胺(6-hydroxydopamine, 6-OHDA)注射右侧黑质二坐标法制备PD阴虚动风证动物模型,将成模的50只大鼠分为模型组、美多芭组和复方地黄颗粒低、中、高(n=10)。复方地黄颗粒低、中、高组每只大鼠每天复方地黄颗粒灌胃量依次为1.75g/kg、3.5g/kg、7g/kg,美多芭组为150mg/kg多巴丝肼,连续28d、1次/日,正常对照组和假手术组0.9%氯化钠溶液10ml/kg灌胃。在此期间观察各组大鼠情况和神经行为学变化,灌胃结束后脱臼处死大鼠采集右侧黑质。通过RT-qPCR、Western blot及免疫组化法检测TLR4/NF-κB信号通路中TOLL样受体4(TLR4)、核转录因子-kappa B p65(NF-κB p65)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果 模型组与正常对照组和假手术组比较,大鼠旋转圈数和右侧黑质TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-6蛋白、mRNA表达上升,但悬挂时间和移动格数下降(P<0.01)。模型组与美多芭组和不同剂量的复方地黄颗粒组比较,大鼠旋转圈数和大鼠右侧黑质TLR4、NF-κB p65、TNF-α、IL-6蛋白、mRNA表达下降,但悬挂时间和移动格数增加(P<0.05,P<0.01),其中复方地黄颗粒高剂量组差异达到显著程度(P<0.01)。结论 复方地黄颗粒通过调控TLR4/NF-κB信号通路起到减少炎症反应、保护多巴胺(DA)能神经元的作用,其机制可能与调控蛋白表达相关。

基于PI3K/AKT/mTOR信号通路探讨复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证大鼠的影响

目的观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠黑质PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响,探讨其治疗PD的作用机制。方法通过向黑质注射6-羟多巴胺制备PD阴虚动风证大鼠模型。将大鼠随机分为对照组、假手术组、模型组、美多芭组和复方地黄颗粒低、中、高剂量组,每组10只。各组分别予相应溶液灌胃,连续28 d。检测大鼠神经行为学变化,HE染色观察黑质形态变化,RT-qPCR检测受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62、LC3BmRNA表达,免疫组化检测受损黑质p-PI3K、p-AKT、p-mTOR表达,Western blot检测受损黑质p-PI3K、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR、p62、LC3B蛋白表达。结果与对照组和假手术组比较,模型组大鼠旋转圈数增加,爬杆时间延长,悬挂时间及移动格数减少(P<0.01);黑质神经元排列紊乱,胞核固缩、结构模糊;受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62 mRNA表达升高,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p62蛋白表达升高,LC3B mRNA和LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达降低(P<0.01)。与模型组比较,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组大鼠旋转圈数减少,爬杆时间缩短,悬挂时间及移动格数增加(P<0.01);黑质神经元数目增多,结构形态明显改善;受损黑质PI3K、AKT、mTOR、p62 mRNA表达降低,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p62蛋白表达降低,LC3B mRNA和LC3BⅡ/Ⅰ蛋白表达升高(P<0.05,P<0.01),以复方地黄颗粒高剂量组作用最明显(P<0.05,P<0.01),与美多芭组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路增强受损黑质自噬能力,保护多巴胺能神经元,从而治疗PD。

阴虚动风证帕金森病异动症模型大鼠的氧化应激反应及复方地黄方的干预作用

目的探讨阴虚动风证帕金森病异动症(LID)大鼠氧化应激反应及复方地黄方的干预作用。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备帕金森病大鼠模型,进一步腹腔注射左旋多巴+苄丝肼(50 mg/kg左旋多巴和12.5 mg/kg苄丝肼)制备阴虚动风证帕金森病LID大鼠模型,并随机分为LID组、复方地黄方组,另取正常对照组、假手术组大鼠。每组6只。分别在4周、6周后进行神经行为学检测后,取纹状体,应用比色法分别测定各组大鼠纹状体内SOD、MDA、GSH、GSH-Px的含量。结果阴虚动风证帕金森病LID模型组大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均明显的减少,MDA的含量呈增加的趋势;而复方地黄方组大鼠纹状体内SOD、GSH、GSH-Px的含量均呈现增加的趋势,且随治疗时间的延长增加趋势更明显,MDA的含量呈现减少的趋势,且随治疗时间的延长减少的趋势更明显。结论复方地黄方较好地改善阴虚动风证LID大鼠的氧化应激反应,复方地黄方干预LID模型大鼠可能是通过清除自由基,减轻对细胞的损伤从而缓解帕金森病LID的症状。

阴虚动风证帕金森病异动症大鼠大麻素CB1受体变化及复方地黄方的干预作用

目的探讨阴虚动风证帕金森病(PD)异动症(LID)大鼠纹状体内大麻素CB1受体的表达及复方地黄方的干预作用。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备帕金森病大鼠模型,进一步腹腔注射左旋多巴+苄丝肼(50 mg/kg左旋多巴和12.5 mg/kg苄丝肼)制备LID大鼠模型,并随机分为LID组、复方地黄方组,另取正常对照组、假手术组大鼠为对照,每组6只。分别在4周、6周进行神经行为学检测后,处死大鼠并取纹状体,应用Western blot法测定各组大鼠纹状体内大麻素CB1受体的表达情况。结果 LID大鼠随造模时间延长,AIM评分呈增加趋势(P<0.05),旋转启动时间呈缩短趋势(P>0.05),旋转持续时间呈增加趋势(P<0.01),剂峰旋转圈数呈减少趋势(P>0.05),复方地黄方可改善上述变化。LID大鼠大麻素CB1受体表达增加,且随造模时间延长呈现减少趋势(P<0.01),而复方地黄方干预后大麻素CB1受体的表达呈现逐渐增加的趋势(P<0.01)。结论LID模型大鼠大麻素CB1受体的含量明显升高,其变化能够较好的反映阴虚动风证的严重程度,复方地黄方干预LID模型大鼠可能是通过激活纹状体内大麻素CB1受体,抑制兴奋性氨基酸(主要是谷氨酸)的释放和诱导细胞发生级联反应来减弱神经元的兴奋性,从而起到减轻L-dopa的兴奋毒性的作用。

阴虚动风证帕金森病LID大鼠氨基酸变化的动态研究及复方地黄方的干预作用

目的探讨阴虚动风证帕金森病LID大鼠脑内氨基酸类神经递质的动态变化及复方地黄方的干预作用。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)偏侧损毁黑质制备帕金森病(PD)大鼠模型,成功的PD模型大鼠腹腔注射左旋多巴/苄丝阱[50/12.5(mg.kg)],制备阴虚动风证帕金森病LID病证的大鼠模型。将大鼠分为复方地黄方组、LID组、正常对照组、假手术组,并在治疗4周、6周后取纹状体,应用高效液相法(HPLC)测定各组大鼠纹状体内氨基酸的含量。结果阴虚动风证帕金森病LID模型大鼠纹状体内兴奋性氨基酸显著升高;复方地黄方能显著降低兴奋性氨基酸的含量,抑制性氨基酸含量则明显升高。结论复方地黄方缓解帕金森病LID的机制可能是通过调节脑内氨基酸的水平、减轻其兴奋毒性来实现的。

复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病大鼠纹状体细胞凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响

目的探讨复方地黄颗粒(CRG)对阴虚动风证帕金森病(PD)大鼠纹状体细胞凋亡及对PI3K/Akt信号通路的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)注射损毁黑质法制备阴虚动风证PD大鼠模型,造模成功30只大鼠。随机分为模型组、美多芭(MAD)组、复方地黄颗粒低(L-CRG)、中(M-CRG)、高(H-CRG)剂量组,每组6只。另纳入正常对照组和假手术组各6只。美多芭组予美多芭150 mg/(kg·d)灌胃; L-CRG、M-CRG、H-CRG组予复方地黄颗粒3. 5 g/(kg·d)、7 g/(kg·d)、14 g/(kg·d)灌胃;正常对照组、假手术组及模型组予等量生理盐水灌胃。用药6周后处死大鼠,取纹状体。采用TUNEL法检测纹状体细胞凋亡情况;采用透射电子显微镜观察纹状体细胞超微结构;采用蛋白印迹(WB)法检测Bcl-2、Bax、PI3K、Akt、p-Akt蛋白水平。结果与对照组和假手术组比较,模型组细胞凋亡指数明显升高,差异有统计学意义(P <0. 05),细胞凋亡特征明显,Bax蛋白水平明显升高(P <0. 05),Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白水平降低(P <0. 05);与模型组比较,低中高剂量复方地黄颗粒组细胞凋亡指数显著下降(P <0. 05),细胞形态趋于正常,Bax蛋白水平明显降低(P <0. 05),Bcl-2、PI3K、p-Akt蛋白水平升高(P <0. 05),且呈剂量依赖效应。结论复方地黄颗粒可能通过PI3K/Akt信号通路调节凋亡相关蛋白表达,抑制阴虚动风证PD大鼠纹状体细胞凋亡,呈剂量依赖效应。

大定风珠治疗脑出血恢复期阴虚动风证证效关系的蛋白质组学研究

目的通过鉴定并分析脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)恢复期阴虚动风证患者大定风珠对证、镇肝熄风汤非对证治疗与健康对照组比较外周血单个核细胞(peripheralblood mononuclear cells,PBMCs)差异表达的蛋白质,从方证对应的角度寻找脑出血恢复期阴虚动风证的证效关系蛋白质,并探讨脑出血恢复期阴虚动风证的本质内涵。方法分离对照组、脑出血恢复期阴虚动风组、脑出血恢复期阴虚动风对证治疗及非对证治疗组外周血单个核细胞,利用双向凝胶电泳技术建立各组的PBMCs蛋白双向凝胶电泳图谱,经PDQuest8.0软件分析,选取差异表达的蛋白质点,应用MALDI-TOF-MS质谱仪获得肽质量指纹图谱,用Mascot软件搜索数据库鉴定部分差异表达蛋白质。结果经双向凝胶电泳和图像分析,筛选出的24个差异表达蛋白质点中共有12个得到鉴定,其中脑出血恢复期阴虚风动证组与健康对照组比较,5个蛋白表达上调,4个蛋白表达下调,1个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证大定风珠对证治疗组与健康对照组比较,7个蛋白表达无明显差异,2个蛋白表达下调,2个蛋白表达上调,1个蛋白表达缺失;脑出血恢复期阴虚风动证镇肝熄风汤非对证治疗组与健康对照组比较,6个蛋白表达下调,3个蛋白表达上调,1个蛋白表达缺失。结论初步鉴定了脑出血恢复期阴虚动风证对证与非对证治疗方证效应的相关蛋白,这些蛋白功能涉及应激、细胞代谢、细胞迁移、信号转导、细胞骨架等;大定风珠对证治疗则能有效地调节多个异常表达的蛋白,非对证治疗则使蛋白表达明显异常,体现了中医辨证论治、方证相应的科学性。

复方地黄方对阴虚动风证帕金森病异动症模型大鼠神经行为学及纹状体内多巴胺受体变化的干预作用

帕金森病（PD）是中老年人常见的神经系统变性疾病，左旋多巴（L-dopa）是治疗PD最有效的药物，但长期应用可引起诸多运动并发症，其中最突出的是左旋多巴诱导异动症（LID）。复方地黄方是我们挖掘中医药理论并经临床证明治疗PD及LID有效的中药复方。

帕金森病阴虚动风证、阳虚血瘀证诊断标准与疗效评定标准(试行)

帕金森病(PD)是临床常见的神经系统退行性病变之一,发病率与致残率逐年攀升,中医药治疗PD优势显著。PD分型(震颤型和僵直型)与分期(早期、中期、晚期)不同,证候亦不同,其中阴虚动风证和阳虚血瘀证分别是震颤型和僵直型PD的核心证候。根据现有研究成果并结合中西医诊断标准和专家共识等,建立PD阴虚动风证、阳虚血瘀证的诊断标准和疗效评定标准,有助于PD及其中医证候的标准化研究。

复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病模型大鼠神经营养因子及其受体的影响

目的探讨复方地黄颗粒治疗阴虚动风证帕金森病(PD)的作用机制,为临床PD治疗提供新的思路。方法制备6-羟基多巴胺(6-OHDA)阴虚动风证PD大鼠模型,将造模成功的50只大鼠随机分为模型组,美多芭组和复方地黄颗粒低、中、高剂量组;另取不造模大鼠10只不作处理设为正常对照组,10只只注射抗坏血酸设为假手术组。美多芭组给予美多芭150mg/kg,复方地黄颗粒低、中、高剂量组分别给颗粒剂3.5、7、14g/kg灌胃;正常对照组、假手术组和模型组以等体积蒸馏水(2ml/只)灌胃,每日1次,连续用药6周。分别采用RT-q PCR及Western blotting检测神经生长因子及其受体(NGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)、原肌球蛋白受体激酶(Trk)A、Trk B、GDNF家族受体(GFR)-α1以及Ret的m RNA及蛋白在损毁侧纹状体的表达,酪氨酸羟化酶(TH)m RNA及蛋白在损毁侧黑质及纹状体的表达。结果与正常对照组比较,模型组大鼠NGF、BDNF、GDNF、Trk A、Trk B、GFR-α1、Ret、TH的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.01)。与模型组比较,美多芭组以及复方地黄颗粒各剂量组神经营养因子及其受体的表达均明显升高(P<0.01),但仅中剂量组表达水平与美多芭组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过调控神经营养因子及其受体的表达来发挥抗PD作用,其中以中剂量复方地黄颗粒的疗效为佳。

复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病异动症模型大鼠神经行为学的影响

目的观察复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病(PD)异动症模型大鼠神经行为学的影响。方法采用6-羟基多巴胺(6-OHDA)脑立体定向注射术建立大鼠PD模型,向PD大鼠腹腔注射左旋多巴(50mg/kg)/苄丝肼(12.5mg/kg),每日2次,连续2周,构建阴虚动风证PD异动症(LID)模型。将LID模型大鼠随机分为模型组和复方地黄颗粒组,每组10只,复方地黄颗粒组给予中药复方地黄颗粒(14g/kg,2ml)灌胃,模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续用药6周;另设正常组及假手术组,每组10只。在给药第4、6周分别观察PD大鼠LID模型异常不自主动作(AIM)评分、旋转起动时间、旋转持续时间、旋转圈数、剂峰旋转圈数、APO诱导后旋转圈数等神经行为学的变化。结果复方地黄颗粒干预后,LID大鼠AIM评分显著降低,旋转起动时间延长,旋转持续时间减低,旋转圈数、剂峰旋转圈数及APO诱导后旋转圈数减少,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论复方地黄颗粒可改善帕金森病LID模型大鼠的神经行为学表现,具有抗LID作用。

复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证小鼠血清环核苷酸的调节及多巴胺能神经元的修复作用

目的探讨复方地黄颗粒对帕金森病(Parkinson’s disease,PD)阴虚动风证小鼠血清环核苷酸(cAMP、cGMP)的调节及多巴胺神经元的修复作用。方法将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为为正常组(Normal)、模型组(MPTP+NS)、治疗组(MPTP+CDG),每组8只。正常组小鼠注射生理盐水,模型组腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)构建PD动物模型,两组均每日1次,连续注射5 d。治疗组造模后给予复方地黄颗粒(Compound Dihuang Granule,CDG)灌胃治疗,每日1次,连续给药7 d。本研究从PD小鼠病因、症状、客观指标检测、以方测证等方面验证该模型的中医证候属性,并探讨CDG对PD阴虚动风证小鼠血清中环核苷酸及酪氨羟化酶表达影响。结果模型组小鼠行为学、舌色度值比率、血清环核苷酸含量、酪氨酸羟化酶含量与正常组差异显著(P<0.05)。给予CDG治疗后能显著改善小鼠的行为学及相关客观指标(P<0.05)。结论给予MPTP腹腔注射制备的帕金森病阴虚动风证小鼠模型稳定、可靠,CDG能调节血清中环核苷酸含量,有效修复损伤的多巴胺能神经元。

复方地黄颗粒对帕金森病阴虚动风证大鼠纹状体GLAST、GLT-1及GAT-1表达的影响

目的观察复方地黄颗粒对帕金森病(PD)阴虚动风证大鼠纹状体谷氨酸/天冬氨酸转运体(GLAST)、谷氨酸转运体1(GLT-1)、γ-氨基丁酸转运体1(GAT-1)表达的影响,探讨其潜在作用机制。方法采用6-羟基多巴胺注射损伤黑质法制备PD阴虚动风证大鼠模型,将成模大鼠随机分为模型组、美多芭组(150 mg/kg)和复方地黄颗粒低、中、高剂量组(1.75、3.5、7 g/kg),每组11只,另取11只作为正常对照组、11只作为假手术组。正常对照组、假手术组及模型组予生理盐水灌胃,美多芭组及复方地黄颗粒各剂量组灌胃相应药物,连续28 d。观察大鼠神经行为学变化,RT-qPCR、Western blot及免疫组化检测损伤侧纹状体GLAST、GLT-1和GAT-1表达。结果与正常对照组和假手术组比较,模型组大鼠神经行为学实验旋转圈数增加,悬挂时间及移动格数减少(P<0.01),损伤侧纹状体GLAST、GLT-1 mRNA和蛋白表达降低,GAT-1 mRNA和蛋白表达升高(P<0.01);与模型组比较,美多芭及复方地黄颗粒各剂量组大鼠神经行为学实验旋转圈数减少,悬挂时间及移动格数增加(P<0.01),损伤侧纹状体GLAST、GLT-1 mRNA和蛋白表达升高,GAT-1 mRNA和蛋白表达降低(P<0.05,P<0.01),以复方地黄颗粒高剂量组作用最明显(P<0.05,P<0.01),与美多芭组差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可能通过上调GLAST、GLT-1及下调GAT-1水平,改善谷氨酸与γ-氨基丁酸失衡,发挥治疗PD阴虚动风证作用。

早期手术结合中医“增水行舟”法治疗高血压脑出血阴虚风动证疗效观察

目的观察早期手术结合中医"增水行舟"法治疗高血压脑出血阴虚风动证的临床疗效。方法回顾性分析2011年10月—2014年2月67例高血压脑出血患者。根据治疗方法不同,将67例患者分为西医治疗组和中西医治疗组,所有患者均于发病后24 h内清除血肿,西医治疗组术后给予基础治疗,中西医治疗组在西医治疗组基础上给予口服增液承气汤加减方。观察并比较两组术后不同时期GCS评分变化、神经功能缺损程度评分变化、日常生活活动能力(ADL)评分变化,并比较两组临床疗效。结果两组术后不同时间GCS评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。与西医治疗组比较,中西医治疗组术后第21天神经功能缺损程度评分降低(P<0.05),术后第21天日常生活活动能力评分、临床疗效总有效率明显增高(P<0.01,P<0.05)。结论早期手术结合"增水行舟"法治疗高血压脑出血阴虚风动证远期效果优于单纯西医治疗。

复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病大鼠胶质细胞系源性神经营养因子的影响

目的探讨复方地黄颗粒对阴虚动风证帕金森病(PD)模型大鼠胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)的影响。方法采用6-羟基多巴胺脑立体定向注射术建立大鼠PD模型,将造模成功的PD模型大鼠随机分为3组:模型组、复方地黄颗粒组、多巴丝肼组,另取不造模大鼠为正常对照组,只注射维生素C大鼠为假手术组。复方地黄颗粒组给予复方地黄颗粒中药混悬液灌胃,多巴丝肼组给予多巴丝肼生理盐水混悬液灌胃,正常对照组、假手术组、模型组给予等量蒸馏水灌胃。每组均为6只。给药6周后处死,蛋白质印迹法检测大鼠纹状体GDNF蛋白表达。结果与模型组相比,复方地黄颗粒组、多巴丝肼组GDNF蛋白表达趋势上升,差异有统计学意义(P<0.01);复方地黄颗粒组与多巴丝肼组的GDNF蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论复方地黄颗粒可增加阴虚动风证PD大鼠的GDNF表达,有利于保护DA能神经元。