六味地黄汤水提醇溶部位的成分分析及对小鼠的补肾作用机制研究

目的研究分析六味地黄汤水提醇溶部位的主要成分及其补肾作用机制。方法用Hypersile C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以甲醇-水(27∶73)为流动相,检测波长为236 nm;流速为1.0 m L·min^(-1);柱温为25℃,用高效液相色谱法测定六味地黄汤水提醇溶部位的主要成分及含量。按照性别和体重将30只小鼠随机分为3组(n=10):正常组、模型组、实验组。实验组按9.75g·kg^(-1)体重灌胃六味地黄汤水提醇溶部位,连续给药9 d;在给药第6天,除正常组外,其他各组按50 mg·kg^(-1)体重灌胃氢化可的松,连续4 d,建立肾阴虚小鼠模型。第10天,用ELISA法测定小鼠血浆环磷酸腺苷(c AMP)、环磷酸鸟苷(c GMP)含量,用放射免疫分析法测定小鼠血清促卵泡素(FSH)、雌二醇(E2)及睾酮(T)含量。结果莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷的线性范围分别在0.24~2.40μg(r=0.999 6)、0.14~1.38μg(r=0.999 1)、0.12~1.20μg(r=0.999 1)及0.24~2.40μg(r=0.999 4)内,线性关系良好;这4种成分的回收率分别为(100.22±1.80)%,(100.83±1.94)%,(102.40±1.47)%,(101.40±1.50)%,RSD分别为1.80%,1.92%,1.44%,1.50%。在六味地黄汤水提醇溶部位中按生药量计算,莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷和马钱苷的平均含量分别为0.20%,0.02%,0.06%,0.13%。给药9 d后,模型组与实验组c AMP含量分别为(8.20±0.63),(6.90±0.15)nmol·L^(-1),差异有统计学意义(P<0.01);模型组与实验组FSH、E2、T含量分别为(0.54±0.10),(0.88±0.04)m U·m L^(-1);(13.93±0.29),(15.48±0.43)pg·m L^(-1);(2.23±0.14),(5.63±0.48)ng·m L^(-1),差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论六味地黄汤水提醇溶部位主要含有马钱苷、莫诺苷、獐牙菜苷、芍药苷,其补肾作用机制可能与其调节c AMP含量及HPG轴中各环节激素水平有关。