酸枣仁总皂苷对老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑组织Glu及GABA含量的影响

目的观察酸枣仁总皂苷对老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑组织谷氨酸(Glu)及γ-氨基丁酸(GABA)含量的影响。方法用D-半乳糖致衰老、环磷酰胺及氢化可的松致阴血亏虚,及自制改良多平台法剥夺睡眠,制作老年阴血亏虚型失眠证候大鼠复合模型,采用高效液相色谱法检测环境对照组、证候模型组和酸枣仁总皂苷大、小剂量组大鼠大脑皮层及下丘脑Glu及GABA含量的变化。结果与环境对照组比较,证候模型组睡眠剥夺48h后,大鼠大脑皮层及下丘脑Glu及GABA含量均明显升高,且Glu/GABA比例增高,经酸枣仁总皂苷干预后Glu和GABA均明显下降(P<0.01,P<0.05),且趋于正常范围。结论酸枣仁总皂苷能减少老年阴血亏虚型失眠证候模型大鼠脑内兴奋性氨基酸毒性作用,减轻Glu、GABA参与的迟发性神经元损害。

经穴体外反搏辅助治疗气阴两虚兼血瘀证心力衰竭伴失眠的效果

目的探讨经穴体外反搏辅助治疗在气阴两虚兼血瘀证心力衰竭伴失眠患者中的应用效果。方法选取2021年10月—2022年10月收治的120例气阴两虚兼血瘀证心力衰竭伴失眠患者,采用随机数字表法分为观察组和对照组,每组60例,对照组采取常规治疗,观察组在上述常规治疗基础上配合经穴体外反搏治疗。比较2组临床疗效、主要心血管不良事件(MACE)发生率、安全性,并比较治疗前后中医证候积分、心功能指标[左心室射血分数(LVEF)、每搏输出量(SV)、心排血量(CO)]、血清指标[N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌型肌酸激酶同工酶(CK-MB)]、匹兹堡睡眠质量指数(PSQI)及心力衰竭生活质量量表(LHFQ)评分。结果治疗14 d后,观察组中医证候疗效总有效率及心功能疗效总有效率为98.33%及88.33%分别高于对照组的83.33%及73.33%(P<0.01,P<0.05);治疗后,观察组中医证候积分、PSQI量表各维度评分、LHFQ各领域评分低于对照组,LVEF、SV、CO水平高于对照组,血清NT-proBNP、CK-MB水平低于对照组(P<0.05);随访6个月,观察组MACE发生率6.90%低于对照组的19.64%(P<0.05)。2组未见明显不良反应发生。结论经穴体外反搏治疗将穴位刺激与体外反搏技术有机结合,可改善气阴两虚兼血瘀证心力衰竭伴失眠患者心功能,减轻临床症状,提升睡眠质量及生活质量,降低MACE发生率,调控血清NT-proBNP、CK-MB水平,疗效确切。

失眠肝血亏虚证候与多导睡眠图睡眠结构参数的相关性研究

目的探讨失眠肝血亏虚证候与多导睡眠图(PSG)睡眠结构参数的相关性。方法将2016年10月—2017年12月期间失眠专病门诊患者及心身健康无失眠的职工及家属62例纳入研究,其中失眠患者(观察组)32例,心身健康无失眠的职工及家属(健康对照组)30例。两组均采用美国伟康Alice5系列(12导)多导睡眠监测仪进行睡眠监测,观察两组睡眠进程参数(总记录时间、睡眠潜伏期时间、实际睡眠总时间、觉醒时间、睡眠效率)及睡眠结构参数[包括非快速眼动睡眠期(NREM)和快速眼动睡眠期(REM),NREM又分为N1、N2、N3期三个睡眠阶段]情况,分别记录REM期和NREM各分期的睡眠时间,以及各期占总睡眠时间的百分比。结果在睡眠进程参数方面,观察组患者较健康对照组的实际睡眠总时间减少、睡眠潜伏期时间延长、觉醒时间增多,睡眠效率低下,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。在睡眠结构参数方面,观察组患者N3期睡眠时间及N3期睡眠所占总睡眠时间比例均明显低于健康对照组(P<0.01)。其余N1、N2、REM期睡眠时间及各自所占总睡眠时间比例与健康对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝血亏虚型失眠患者在整个睡眠进程中多表现为入睡困难、眠浅易醒、总睡眠时间不足及睡眠效率低下,而在睡眠结构方面,则多以浅睡眠为主,深睡眠显著不足,且与PSG睡眠结构参数具有相关性。

基于中医临床诊疗模式构建气阴两虚证动物模型的构想与初步探索

在前期研究基础上,提出"基于病证方结合的中医诊疗模式构建中医证候动物模型"的研究构想,通过寻求与证候相关疾病的关键病理环节选择合适的造模方法模拟临床特征和病理过程,并通过"以方测证"和"类证方反证"的方法动态地考察模型在不同时程证候属性。以临床常见的气阴两虚证为切入点,利用信息挖掘技术,发现益气养阴代表方生脉散所防治多种疾病的关键病理环节是缺氧和氧应激,继而发现慢性间歇性缺氧模型小鼠在一定阶段表现为:体重下降,摄食量减少,自发活动改变,心率加快、T波持续性升高等心电图异常改变、出血时间缩短等,部分模拟了气阴两虚证的主要临床表现和由虚到瘀的病机演变过程,并伴随氧化应激异常等病理变化,生脉散可明显改善上述指征,从而初步验证了所提出的建模假说及慢性间歇性缺氧模型的气阴两虚证候属性。课题组正开展进一步的研究,以期为揭示气阴两虚证的科学内涵及深入阐释益气养阴代表方的作用机理提供可靠的实验与技术平台,并为证候动物模型的构建提供思路与方法借鉴。

两种气阴两虚证小鼠模型制备方法比较

目的比较两种不同的复合造模方法,寻找建立气阴两虚证模型的优势方法。方法72只BALB/c小鼠随机分为空白组、游泳复合组、睡眠剥夺复合组,每组24只。每组再按造模3周、6周、9周随机分为3小组,每小组8只。其中游泳复合组采用饮食不节^(+)热性药灌胃^(+)负重游泳的方法,睡眠剥夺复合组采用饮食不节^(+)热性药灌胃^(+)睡眠剥夺的方法,分别造模3周、6周、9周。造模第0周,记录每只小鼠抓力与体质量。造模第3、6、9周比较各组小鼠体质量、抓力、力竭游泳时间、饮水量、唾液流率、粪便含水率、面温;进行旷场实验,记录300 s内小鼠活动的总路程、站立次数、角落时间和中心时间;计算胸腺指数、脾脏指数;检测外周血中CD4^(+)、CD8^(+)T淋巴细胞含量和血清中环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)含量。结果试验期间,游泳复合组小鼠死亡3只,睡眠剥夺复合组死亡1只。造模第3周,与空白组比较,游泳复合组力竭游泳时间显著减少,睡眠剥夺复合组体重、力竭游泳时间显著减少,总路程、站立次数和中心时间显著增加(P<0.01);与游泳复合组同时间相比,睡眠剥夺复合组总路程、站立次数和中心时间均显著增加(P<0.05或P<0.01)。造模第6周,与空白组相比,游泳复合组角落时间、血清cAMP含量、cAMP/cGMP值显著增加,睡眠剥夺复合组cAMP/cGMP值显著增加,外周血CD4^(+)T淋巴细胞含量、唾液流率、胸腺指数显著降低,游泳复合组和睡眠剥夺复合组抓力、力竭游泳时间、脾脏指数显著减少(P<0.05或P<0.01)。造模第9周,与空白组相比,游泳复合组和睡眠剥夺复合组饮水量、角落时间、血清cAMP含量、cAMP/cGMP值显著增加,唾液流率、抓力、力竭游泳时间、总路程、站立次数、中心时间、血清cGMP含量、胸腺指数、脾脏指数及外周血CD4^(+)T淋巴细胞、CD8^(+)T淋巴细胞、CD4^(+)/CD8^(+)值显著减少,游泳复合组粪便含水率出现显著降低(P<0.05或P<0.01);与游泳复合组相比,睡眠剥夺复合组饮水量、粪便含水率、抓力显著增加(P<0.05)。造模第3、6、9周末各组小鼠面温差异均无统计学意义(P>0.05)。结论游泳复合组与睡眠剥夺复合组造模9周均能出现与临床气阴两虚相似的症状。若进行与便秘相关的实验,使用游泳复合组造模方法建立气阴两虚模型;若实验与便秘无关,则更适合使用睡眠剥夺复合组造模方法建立气阴两虚模型,以减少实验动物死亡率。

黄芪注射液与生脉注射液对气阴两虚证候细胞模型代谢的影响

目的:探索建立体外血清诱导2型糖尿病气阴两虚证候细胞模型,探索证候模型细胞代谢物的变化。方法:建立血清诱导气阴两虚证候人肝癌细胞(HepG2)细胞模型;观察药物对细胞活性的影响;给予黄芪注射液、生脉注射液和雪菊醇提物进行干预,以方测证辅助验证模型;采用1H-NMR代谢组学方法检测证候模型细胞中代谢物变化规律。结果:含0.5%气阴两虚2型糖尿病患者血清诱导24 h时可抑制细胞活性,给予益气养阴药物黄芪注射液与生脉注射液干预后促进证候模型细胞活性(P<0.05)。证候细胞中异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸等氨基酸、α-葡萄糖、β-葡萄糖及果糖等糖类、脂肪酸及甘油磷酯酰胆碱等代谢物含量发生变化(P<0.05)。结论:血清诱导证候细胞模型在一定程度上可以反映气阴两虚证,黄芪注射液与生脉注射液对气阴两虚证候细胞模型具有改善作用。

基于中医辨证保健理论探索辅助降血糖功能评价方法

目的:通过建立“气阴两虚型胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱动物模型”,探索符合中医辨证特点且适用于保健食品功能评价的证候模型,以期为研发辅助降血糖辨证保健产品提供方法学参考。方法:选取45只雄性SD大鼠,根据基础血糖值分为空白组、模型组、阳性组[十味消渴胶囊1.32 g(kg·d),相当于人7.92 g/d]。采用力竭游泳、甲状腺素(T)皮下注射、连续高脂饲料合并链脲佐菌素(STZ)注射复合因素造模。实验第一天开始给药,连续灌胃33 d。结果:模型组大鼠出现懒动无力、毛发枯黄、情绪躁动等气阴两虚的证候表证;饮水量、进食量、排尿量显著增加、体质量显著降低;空腹血糖(FBG)、血糖曲线下面积(AUC)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)显著升高,HOMA-β、胰岛素敏感指数(Insulin Sensitivity Index, ISI)显著降低,血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)显著升高,高密度脂蛋白(HDL)显著降低,三碘甲状腺原氨酸(T)、T显著升高,环磷酸腺苷(cAMP)显著升高、环磷酸鸟苷(cGMP)显著降低、cAMP/cGMP显著升高,力竭游泳时间显著降低,脾脏指数、胸腺指数显著降低。十味消渴胶囊能显著增加模型大鼠体质量,降低空腹血糖,改善糖耐量,延长力竭游泳时间,降低T、T的水平,降低cAMP/cGMP比值,改善胰岛素抵抗。结论:采用力竭游泳、T注射、高脂喂养结合STZ注射复合因素建立“气阴两虚型胰岛素抵抗糖脂代谢紊乱动物模型”,造模设计在思路和方法上符合中医基本理论,可以用于益气养阴类中药保健食品降血糖功能的评价。

采用复合因素建立内热消渴小鼠模型的特点分析

背景:糖尿病属于中医“消渴”范畴,根据该病的发展进程及临床表现往往有不同的证候表现,多数情况下早期表现以热盛为主称之为热盛型消渴,中晚期以气阴两虚证候为主称之为气阴两虚型消渴。目的:采用复合方法,制备体现中医症候特点的内热消渴小鼠模型,为研究消渴病的演变规律及相关药物研究奠定基础。方法:30只ICR小鼠随机分为空白对照组、短时程模型组和长时程模型组,短时程模型组连续5 d腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素,然后继续灌服20 g/kg温热药14 d建立内热消渴动物模型;长时程模型组是在短时程模型的基础上继续灌服同剂量温热药21 d。测定各组小鼠造模后体质量、空腹血糖、饮水量、摄食量、尿量、血清胰岛素水平;计算胰岛素抵抗指数、胰岛素敏感指数;测定肝、肾组织中线粒体呼吸链复合物Ⅲ、Ⅴ的活性;苏木精-伊红染色检测小鼠胰腺病理变化。实验经河南省中医药大学动物伦理委员会批准,动物伦理批件号:DWLL202003270。结果与结论:①与空白组相比,短时程模型组和长时程模型组的小鼠均表现出多饮多食多尿、体质量降低、肛温升高等消渴病的典型症状(P<0.05),空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数水平显著升高,胰岛素敏感指数水平显著降低(P<0.05),肝肾组织中线粒体呼吸链复合物Ⅲ和Ⅴ的活性升高(P<0.05);胰腺病理观察发现短时程模型组和长时程模型组小鼠的胰腺组织有不同程度的损害;②与短时程模型组相比,长时程模型组多饮多食多尿、体质量增长缓慢、肛温随着病情发展有明显降低(P<0.05);空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数明显升高,胰岛素敏感指数明显降低(P<0.05);肝肾组织中线粒体呼吸链复合物Ⅲ和Ⅴ的活性显著降低(P<0.05);病理观察随着病情的发展胰岛功能进一步损伤和破坏;③结果表明,“链脲佐菌素+温热药”复合因素造模,可完善内热消渴的病证结合模型,且模型存在着证候演变规律:短时程模型表现出热盛型消渴,长时程模型表现出气阴两虚型消渴。