烯醇化酶在阴道加德纳菌和乳杆菌的表达及其对糖酵解影响的研究

目的:研究烯醇化酶在阴道加德纳菌菌株和乳杆菌菌株的胞膜上和胞质内表达的差异情况,并比较两种菌的糖酵解能力的区别。方法:从细菌性阴道病患者阴道分泌物中分离、纯化、鉴定的加德纳菌菌株,从健康女性阴道分泌物中分离乳杆菌菌株,同等条件下,在体外培养一段时间后,检测菌液中残余葡萄糖、乳酸、丙酮酸和三磷酸腺苷(ATP)的浓度。分别提取加德纳菌和乳杆菌的胞膜和胞质蛋白,采用蛋白质免疫印迹法(western blotting)检测胞质和胞膜中的烯醇化酶的情况。结果:加德纳菌的培养基中残余的葡萄糖明显变少,而培养乳杆菌的培养基中残余葡萄糖含量相对较多,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);加德纳菌产生的ATP含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。当在反应体系中加入烯醇化酶抗体后,残余葡萄糖的量有所增加,而ATP、乳酸和丙酮酸含量都有所减少;所有加德纳菌和乳杆菌的胞质中均存在烯醇化酶,其中加德纳菌的烯醇化酶的含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。仅部分加德纳菌菌株和乳杆菌菌株的胞膜上存在烯醇化酶,加德纳菌胞膜上的烯醇化酶的含量显著高于乳杆菌(P<0.05)。结论:烯醇化酶在阴道加德纳菌和乳杆菌的表达存在一定差别,这种差别一定程度上影响了两种菌种代谢的能力。

阴道乳杆菌抑制加德纳菌的机制研究

目的 研究中国健康女性阴道微环境中分离的乳杆菌对细菌性阴道病患者阴道微环境分离的阴道加德纳菌的抑制效应及其机制。方法 通过体外实验将中国健康女性阴道乳杆菌菌株和细菌性阴道病患者的阴道加德纳菌菌株共培养,观察乳杆菌对加德纳菌增殖活性的影响。将乳杆菌、阴道加德纳菌与阴道上皮细胞共培养,计算加德纳菌与上皮细胞的黏附情况,评价乳杆菌对加德纳菌黏附阴道上皮细胞的影响。比较乳杆菌培养的菌液、菌体、上清、阴道上皮细胞、乳杆菌菌体+阴道上皮细胞对加德纳菌增殖的抑制效应,分析乳杆菌抑制加德纳菌的可能机制。结果 对阴道加德纳菌增殖活性有显著抑制作用的乳杆菌菌株有5个(卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、发酵乳杆菌和德氏乳杆菌)(P<0.05),其中3个菌株(卷曲乳杆菌、加氏乳杆菌和詹氏乳杆菌)能够明显干扰加德纳菌对上皮细胞的黏附过程(P<0.05)。菌体、上皮细胞、上清、菌液的抑菌效果逐步递增,而菌体和上皮细胞同时存在时,其抑菌效果明显超过菌液。结论 健康女性阴道乳杆菌菌株可以抑制细菌性阴道病患者阴道加德纳菌的增殖活性,能干扰加德纳菌对阴道上皮细胞的黏附过程。乳杆菌是通过多种机制完成对加德纳菌的抑制效应的。

阴道加德纳菌与阴道阿托波菌共培养生长状态及粪肠球菌上清液对两者共培养抑制作用的体外研究

目的:研究阴道加德纳菌与阴道阿托波菌共培养后的生长特性,同时探究粪肠球菌上清对阴道加德纳菌与阴道阿托波菌混合培养生物膜形成的影响。方法:选取临床诊断为BV患者的阴道分泌物标本中分离纯化鉴定的阴道加德纳菌及阴道阿托波菌,观察阴道加德纳菌及阴道阿托波菌共培养24、48、72h的生长情况及成膜情况。观察粪肠球菌标准株24h内生长情况及产酸能力。通过检测OD值观察阴道加德纳菌单独培养、阴道加德纳菌与阿托波菌混合培养与分别加入粪肠球菌上清共培养24、48、72h后的生物膜形成情况。结果:加德纳菌与阿托波菌2∶1比例共培养的成膜能力比相同菌量的加德纳菌强,差异有统计学意义(P<0.05)。阿托波菌几乎不生成生物膜。粪肠球菌上清液对单加德纳菌及加德纳菌与阿托波菌(2∶1)混合培养生物膜形成有明显的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:阴道加德纳菌与阴道阿托波菌共培养后可互相促进生物膜的形成。粪肠球菌上清液对单阴道加德纳菌及阴道加德纳菌与阴道阿托波菌混合培养的生物膜形成有抑制作用。

双性水对阴道加德纳菌生物膜影响的研究

目的研究双性水对加德纳菌生物膜形成的影响。方法选取在首都医科大学附属北京妇产医院初次诊断为细菌性阴道病患者,在阴道分泌物中分离纯化并鉴定为加德纳菌10株,双性水与加德纳菌共培养48h或者双性水作用于已培养24h的加德纳菌后,检测OD值、最小抑菌浓度(MIC)值,并通过扫描电镜观察加德纳菌的生物膜形成情况。结果加德纳菌生物膜在培养48h形成较好(P<0.05)。双性水对加德纳菌有一定的杀菌作用。被抑制的加德纳菌在电镜下生物膜形成减少,未被抑制的和已形成生物膜的加德纳菌,双性水作用后其生物膜无明显变化。结论双性水可抑制加德纳菌生物膜的形成,但对已形成成熟生物膜的加德纳菌无明显作用。

抑制阴道加德纳菌的乳杆菌的筛选及其抑菌机制的研究

目的筛选对阴道加德纳菌增殖有抑制功能的阴道乳杆菌菌株,探讨阴道乳杆菌菌株抑制加德纳菌的可能机制,为开发用于细菌性阴道病(BV)治疗的益生菌菌株提供先决条件。方法分别从BV患者和健康女性阴道分泌物中分离阴道加德纳菌菌株和乳杆菌菌株,通过spot on lawn法筛选有抑制阴道加德纳菌增殖的乳杆菌菌株,用双层牛津杯法对比乳杆菌菌液、上清液、菌体对阴道加德纳菌菌株抑制作用的差别。结果从20例健康女性阴道分泌物中获得62株阴道乳杆菌菌株,分属于6个菌种,其中18株有抑制阴道加德纳菌的作用。通过对18株有抑菌效应的乳杆菌菌株的不同成份(菌液、菌体、上清液)研究表明,其菌液、菌体和上清液均有抑菌效应,菌液的抑菌效应明显大于上清液组。上清液经过蛋白酶K处理之后,8份标本的抑菌效果消失,10份标本的抑菌效果明显减弱。结论该研究共纯化和鉴定阴道乳杆菌菌株62株,其中18株具有抑制阴道加德纳菌增殖的功能。产生蛋白类抑菌物质可能参与了阴道乳杆菌抑制阴道加德纳菌增殖的机制。

抑制阴道加德纳菌乳酸菌的筛选及安全性研究

为筛选具有较强抑制阴道加德纳菌(Gardnerella vaginalis)特性的乳酸菌菌株,该研究通过双层琼脂扩散法测定菌株抑制阴道加德纳菌的能力,从筛菌样品中筛选能力较强的乳酸菌,通过溶血性试验、动物致病性试验评价其安全性,并进行了耐酸耐胆盐能力试验。结果表明,筛选菌株中罗伊氏粘液乳杆菌(Limosilactobacillus reuteri)HCS02-001抑菌能力最强,发酵上清液抑菌圈直径为18.23 mm,发酵上清液经过3倍浓缩后抑菌圈直径可达21.58 mm。菌株HCS02-001无溶血性,无致病性,在pH 2.0条件下培养17 h活菌数对数值为7.97,存活率为85.52%,在1.5%胆盐条件下培养17 h活菌数对数值为8.48,存活率为90.99%。结果显示罗伊氏粘液乳杆菌HCS02-001具有较强的抑制阴道加德纳菌特性,初步判定其具备安全性。

阴道内乳杆菌与粪肠球菌共培养生长状态及其上清液对阴道加德纳菌抑制作用的体外研究

目的:研究阴道菌群中乳杆菌与粪肠球菌共培养后的生长特性,同时探究乳杆菌与粪肠球菌共培养上清液对阴道加德纳菌生物膜形成的影响。方法:选取临床诊断为BV患者的阴道分泌物标本中分离纯化鉴定的粪肠球菌和阴道加德纳菌,在妇科阴道微生态评价系统中诊断为菌群异常患者阴道分泌物标本中分离纯化鉴定的卷曲乳杆菌,观察乳杆菌与粪肠球菌共培养24、48、72h的生长情况及产乳酸能力。通过检测OD值观察阴道加德纳菌单独培养与分别加乳杆菌、粪肠球菌及其混合培养的上清液共培养24、48、72h后的生物膜形成情况。结果:乳杆菌与粪肠球菌混合培养后产L-乳酸比单独乳杆菌和单独粪肠球菌少,差异有统计学意义(P<0.05)。随着时间的增加,乳杆菌与粪肠球菌共培养后的菌量逐渐增多,但比粪肠球菌单独培养菌量多(P<0.05)。随着时间增加,乳杆菌与粪肠球菌共培养的成膜能力较乳杆菌、粪肠球菌单独培养的成膜能力好(P<0.05)。24h时乳杆菌上清液对加德纳菌成膜能力无明显抑制作用,而粪肠球菌上清液及乳杆菌与粪肠球菌共培养的上清液对加德纳菌生物膜形成有明显的抑制作用,差异有统计学意义(P<0.05);48h和72h时乳杆菌上清液、粪肠球菌上清液、乳杆菌与粪肠球菌共培养的上清液对加德纳菌的成膜能力均有很强的抑制作用,且共培养的上清液较单独培养的上清液抑制作用强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:乳杆菌与粪肠球菌共培养后在产乳酸方面存在拮抗作用,同时共培养后可相互促进生物膜的形成,而不促进细菌的生长。随着培养时间增加,乳杆菌与粪肠球菌共培养的上清液对阴道加德纳菌生物膜的抑制作用比单乳杆菌或单粪肠球菌上清液强,表明乳杆菌与粪肠球菌共培养后对加德纳菌生物膜形成的抑制有协同作用。

阴道加德纳菌对细菌性阴道病的病原学诊断评价

目的 探讨阴道加德纳菌对细菌性阴道病(BV)的病原学诊断价值。方法 对237例妇科门诊生殖道感染患者,采集阴道分泌物标本,用直接涂片染色、细菌分离培养、PCR和 BV试验等 4 种方法,检测阴道加德纳菌和细菌性阴道病;BV诊断按照 Amsel金标准分组:BV组 174 例,非 BV组 63 例;另设对照组 40 例为健康体检妇女。结果 BV组174例直接涂片(线索细胞)、细菌培养、PCR和BV试验等4种方法阳性检出率分别为30.5%、51.1%、78.2%和89.7%;63例非BV组,阳性检出率分别为 6.3%、9.5%、11.1%和 28.6%,2 组比较经统计学分析,P值均<0.05,差异有显著性;40例健康对照组,只有PCR阳性检出率为12.5%,余均为阴性;23株 GV药敏试验结果甲硝唑敏感2株,替硝唑敏感3株,罗红霉素敏感3株,阿奇霉素敏感4株,克林霉素敏感 1 株。结论阴道加德纳菌在细菌性阴道病中占有主导作用,是细菌性阴道病的重要致病菌之一;BV诊断试验快速、敏感,适用于BV筛查;涂片染色检测线索细胞简单、易行,且可同时进行真菌、淋菌等检测;细菌分离培养是阴道加德纳菌鉴定的金标准。

男女性生殖道炎性疾病者阴道加德纳菌及其他病原菌感染研究

目的了解男女性生殖道炎性疾病者阴道加德纳菌及其他病原菌的感染状况.方法收集2003年10月～2004年8月,无锡地区682例(男459例,女223例)男女性生殖道炎性疾病患者的尿道和宫颈分泌物标本及115例前列腺炎患者的前列腺液标本,进行阴道加德纳菌(GV)、解脲脲支原体(Uu)、人支原体(MH)、生殖道支原体(MG)、肺炎支原体(MP)、淋病奈瑟球菌(NG)、沙眼衣原体(CT)检测,女性同时进行念珠菌和滴虫检测.结果男性生殖道患者GV阳性率为8.1%,居NG(37.3%)、Uu(22.7%)之后列第3位;女性Gv为28.3%,居念珠菌(42.6%)、Uu(38.6%)之后也列第3位.结论男女性生殖道炎性疾病患者GV阳性率较高,在检出的病原菌中居第3位,对STD患者应注重GV的检测及治疗.

STD患者阴道加德纳菌及其他病原菌感染状况

目的了解STD患者阴道加德纳菌及其他病原菌感染状况。方法收集2003年10月～2004年6月无锡地区682例STD患者的生殖道拭子标本进行阴道加德纳菌(GV)、解脲脲原体(UU)、人型支原体(MH)、生殖支原体(MG)、肺炎支原体(MP)、淋病奈瑟菌(NG)、沙眼衣原体(CT)检测,女性同时检测念珠菌和滴虫。结果男性STD患者GV阳性率为8.1%,居NG(37.3%),UU(22.7%)之后列第3位;女性GV为28.3%,居念珠菌(42.6%),UU(38.6%)之后也列第3位。结论STD患者GV阳性率较高,在检出的病原菌中居第3位,对STD患者应注重GV的检测及治疗。

Mohnarin 2008年度报告:淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、气单胞菌与副溶血弧菌耐药性分析

目的了解淋病奈瑟菌、阴道加德纳菌、气单胞菌与副溶血弧菌耐药状况。方法采用纸片法、MIC法或E-test法测定细菌药物敏感性,使用WHONET5.4软件进行分析,对卫生部全国细菌耐药性监测网(Mohnarin)所属三级甲等医院2008年1月1日至2008年12月31日分离的4种菌株进行分析。结果①共分离到淋病奈瑟菌138株、阴道加德纳菌119株、嗜水气单胞菌336株、其它气单胞菌115株和副溶血弧菌51株。②淋病奈瑟菌对青霉素G耐药率63.6%,对头孢西丁、头孢噻肟敏感率在95%以上,其他头孢菌素敏感率仅为73.3%～79.2%,对环丙沙星耐药率高达90%。③阴道加德纳菌对β-内酰胺类、万古霉素、氯霉素敏感性较高,对大环内酯、克林霉素、四环素、阿米卡星敏感率在60%～79.3%,对氧氟沙星仅37.5%敏感率。④嗜水气单胞菌对多数β-内酰胺类敏感性差,但对碳青霉烯类敏感性超过90%;对阿米卡星、米洛环素、多黏菌素B、左氧氟沙星敏感率在80%以上。结论四种细菌对抗菌药物敏感性各具特点,临床需根据耐药情况选择抗菌药物。

男性不育患者精液阴道加德纳菌感染调查

目的 :了解男性不育患者精液阴道加德纳菌 (Gv)的感染状况。 方法 :收集 2 0 0 2年 4月～ 2 0 0 3年 5月期间无锡市妇幼保健院男性不育门诊就诊的 373例男性精液标本 ,以及其中 6 3例Gv阳性患者的配偶阴道拭子标本 ,应用套式聚合酶链反应 (nPCR)技术进行Gv检测。 结果 :男性不育患者精液Gv定植率为 4 4 .2 % ,阳性者配偶阳性率达 87.3%。 结论 :男性不育患者精液Gv定植率较高 ,Gv可经性生活传播。

阴道加德纳菌分离培养及快速鉴定

细菌性阴道病（bacterial vaginnosis，BV），也称非特异性阴道炎，临床表现为阴道分泌物增加并伴有典型的腥臭味，呈灰白色，均匀一致，稀薄，黏度很低。该病主要病原体之一是阴道加德纳菌（Gardnerrela vaginalis，Gv）本文报告阴道加德纳菌分离培养及快速鉴定方法。

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅲ.流行病学调查

对国内主要狐场狐狸阴道加德纳氏菌病的流行病学调查表明,银黑狐、北极狐、赤狐及彩狐均对本病易感染,主要通过交配传染,病狐在本病流行中起主要作用.各狐场感染率为0.9—21.9%,导致流产率1.5—14.7%,空怀率3.2—47.5%,揭示了本病的严重危害性.通过血清学和病原分离证实,本病可感染饲养管理人员,为人兽共患病.除狐狸外,貉、水貂及犬也可感染.实验动物中小白鼠、大白鼠、地鼠、豚鼠和家兔对本病不感染.

中药安菌凝胶对狐狸阴道加德纳菌病的实验研究

通过对狐狸加德纳菌病 (GVF)阴道菌群分析、阴道光镜和电镜下组织学结构观察认定 ,GVF与人类细菌性阴道病 (BV)同属菌群失调所致 ,并以此为动物模型 ,采用黄芪、苦参、蛇床子、甘草四味中药以新型高分子材料卡波姆 (Carbomer)为赋形剂制成凝胶 ,对其进行体外抑菌实验和不同组方的疗效比较 ,结果显示 :B组方中药制剂 (安菌凝胶 )治疗后的疗效最好 。

阴道加德纳菌感染与男性不育的相关性研究

目的探讨精液中阴道加德纳菌(Gv)感染与男性不育的关系。方法采用套式PCR术进行Gv检测并与精液参数、精液白细胞含量、AsAb进行相关分析;383例男性不育就诊者精液中检出Gv阳性者设为阳性组;精液Gv阴性者设为阴性组。结果就诊者精液中检出Gv阳性者86例,阳性组精子密度、精子活率、a+b活力、低渗肿胀率明显低于阴性组(P<0.05);而阳性组精子畸形率、精液pH值,白细胞精液症检出率、AsAb阳性率明显高于阴性组(P<0.05,P<0.01);两组精液量、精液黏度增高率差异无显著性(P>0.05)。结论精液中Gv感染可影响精液质量,是男性不育的重要原因之一。

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究 Ⅵ.阴道加德纳氏菌病灭活疫苗的研制

选用免疫原性优良的我国狐狸阴道加德纳氏菌主要流行型血清Ⅰ型GVF44号菌株,先后试验研制了氢氧化铝胶、蜂胶和油佐剂灭活苗。试验结果表明,铝胶苗的安全性优,免疫剂量为40亿菌/1ml,3倍免疫剂量的铝胶灭活苗接种狐狸后无任何不良反应,免疫后21d经100个ID_(50)强毒的攻击,对Ⅰ型的保护率达92％。对Ⅱ、Ⅲ型的保护率达80％以上。免疫持续期为6个月,4～10℃条件下可保存10个月。通过田间试验应用证实该疫苗安全、有效。

一种新的人兽共患传染病——狐狸阴道加德纳氏菌病的研究——Ⅱ.病原菌的鉴定

对从狐狸流产胎儿和阴道分泌物中分离得到的16株菌进行了细胞形态、细胞壁显微结构的观察和生化、对人血红细胞具溶血性、DNA的G+C含量等测定。根据它们细胞呈革兰氏阳性到可变,形态从球杆到杆状的多形态性,接触酶和氧化酶均阴性,葡萄糖的O/F测定为发酵产酸,主要产物有乙酸和乳酸等主要产物,归为阴道加德纳氏菌,但由于它们对营养要求不苛求,生长速度快和对氧要求低等,又不同于人体来源的加德纳氏菌。因此,将这群菌另定为一个亚种——阴道加德纳氏菌狐狸亚种(Gardnerella vaginalis subsp.fox)。模式株为U80。