双酚A和邻苯二甲酸二丁酯暴露对雌性幼鼠青春期发育的影响

目的研究双酚A(BPA)和邻苯二甲酸二丁酯(DBP)对雌性幼鼠青春期发育的影响。方法将64只21日龄SD雌性幼鼠用随机数字表法分为BPA干预组(BPA 0.25 mg/kg灌胃10 d)、DBP干预组(DBP 50 mg/kg灌胃10 d)、BPA+DBP干预组(BPA 0.20 mg/kg+DBP 40 mg/kg灌胃10 d)、雌二醇(E_(2))组(E_(2)0.1 mg/kg灌胃10 d)、BPA空白对照组(10 mL/kg不含BPA的玉米油溶液灌胃10 d)、DBP空白对照组(10 mL/kg不含DBP的玉米油溶液灌胃10 d)、正常对照组(不做任何处理)和溶剂组(10 mL/kg玉米油溶液灌胃10 d),每组8只。观察幼鼠阴道开口时间(VOD),收集子宫、卵巢进行病理学检查,采用酶联免疫吸附试验检测血清卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和Kisspeptin水平,采用实时荧光定量PCR检测下丘脑KISS-1、G蛋白偶联受体54(GPR54)和卵巢雌激素受体(ER)α、ERβmRNA表达水平。结果与正常对照组和溶剂组相比,BPA干预组和E_(2)组VOD提前,差异有统计学意义(P<0.05)。BPA干预组血清LH、FSH、LH/FSH、E_(2)、Kisspeptin水平明显高于BPA空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。E_(2)组血清LH、FSH和Kisspeptin水平明显低于正常对照组和溶剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。BPA干预组下丘脑KISS-1、GPR54 mRNA表达水平明显高于BPA空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。E_(2)组下丘脑KISS-1和卵巢ERβmRNA表达水平明显低于正常对照组和溶剂组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论BPA暴露可致雌性幼鼠性早熟,其致病机制可能与下丘脑Kisspeptin-KISS-1/GPR54-促性腺激素释放激素信号传导和下丘脑-垂体-性腺轴提前激活有关。

动物促生长剂对大鼠生长及生殖系统发育的影响

目的 探讨动物促生长剂对雌性大鼠生长及部分生殖系统发育指标的影响。方法采用整体动物实验方法，研究不同浓度促生长剂溶液对大鼠阴道开口时间、动情周期、体内激素水平等的作用。结果 和对照组相比：(1)低剂量组大鼠平均体重明显高于对照组(P＜0．05)；(2)低剂量组大鼠阴道开口时间明显早于对照组(P＜0．01)；(3)灌胃2周后低剂量组进入动情期的大鼠显著多于对照组(P＜0．01)，中剂量组和高剂量组比低剂量组进入动情周期的大鼠数呈下降趋势；(4)各剂量组大鼠体内的激素水平没有显著性差异。结论 促生长剂对大鼠有一定的雌激素样作用，而且这种影响可能与促生长剂的浓度有一定的相关性。

新生儿期不同剂量双酚A暴露对雌性大鼠青春发育的影响

目的研究新生儿期不同剂量双酚A（BPA）暴露对雌性大鼠阴道开口时间（VOD）和下丘脑Kiss-1基因、卵巢雌激素受体（ER）基因表达的影响。方法将新生雌性Sprague-Dauley大鼠随机分为6组,即空白对照组、溶剂组、17β-雌二醇组（17β-estradiol,E2,10μg/d）、低剂量BPA组（每日25μg/kg）、中剂量BPA组（每日50μg/kg）和高剂量BPA组（每日250μg/kg）,在生后0-6 d（PND 0-6）经皮下注射每日给药。记录VOD,并于当天处死,取出下丘脑、卵巢并称重,计算下丘脑、卵巢脏器系数。通过real-time PCR的方法测定下丘脑Kiss-1 mRNA和卵巢中ERαmRNA、ERβmRNA表达量。结果与对照组相比,E2组、中、高剂量BPA组VOD提前;E2组下丘脑Kiss-1 mRNA、卵巢ERβmRNA表达量较对照组明显降低（P〈0.05）。结论新生儿期每日50μg/kg及250μg/kg BPA暴露可引起的大鼠青春期启动提前,但并非通过Kiss-1基因表达改变来实现;新生儿期每日25μg/kg BPA暴露未引起大鼠青春期启动提前。

双酚A暴露诱导雌性大鼠性早熟的下丘脑KISS-1和GPR54基因甲基化分子机制探讨

目的探讨双酚A(BPA)暴露诱导雌性大鼠性早熟的下丘脑KISS-1和GPR54基因甲基化分子机制。方法将SD雌性幼鼠(21 d龄)分为4组,即BPA干预组(0.25 mg/kg)、BPA空白对照组(与BPA组同时处死)、17β-雌二醇组(E2,0.1 mg/kg)、溶剂对照组(直至大鼠出现阴道开口再处死),每天以灌胃方式持续给药10 d,以大鼠阴道开口时间(VOD)为观察终点(VOD当天处死),BPA干预组阴道开口当天处死时,按1∶1比例处死BPA空白对照组。收集大鼠卵巢和下丘脑组织,采用real-time PCR方法检测卵巢ERα、ERβmRNA和下丘脑KISS-1、GPR54 mRNA相对表达水平,焦磷酸测序PCR方法检测KISS-1、GPR54基因甲基化水平。结果BPA干预组和E2组VOD较溶剂对照组提前(P<0.05),BPA空白对照组处死时未出现阴道开口,BPA干预组下丘脑KISS-1、GPR54 mRNA表达水平明显高于BPA空白对照组(P<0.05),但与溶剂对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。E2组下丘脑KISS-1 mRNA和卵巢ERβmRNA表达水平明显低于溶剂对照组(P<0.05)。BPA干预组、BPA空白对照组、E2组和溶剂对照组4组间比较,下丘脑KISS-1基因CpG位点甲基化水平差异无统计学意义,而GPR54基因CpG位点甲基化水平存在显著性差异,其中BPA干预组、E2组和溶剂对照组GPR54片段1 CpG位点甲基化水平显著低于BPA空白对照组(P<0.05),且其甲基化水平与VOD呈正相关(rs=0.245,P=0.009)。BPA干预组GPR54片段2 CpG位点甲基化水平显著低于溶剂对照组,而E2组卵巢ERβ基因甲基化水平显著高于溶剂对照组(P<0.05)。结论BPA暴露可导致雌性幼鼠阴道开口(性早熟)提前,其下丘脑GPR54基因甲基化水平改变可能是毒性机制之一。

双酚A诱导青春前期雌性大鼠中枢性性早熟模型的建立

目的在青春前期应用双酚A(bisphend A,BPA)建立雌性大鼠中枢性性早熟模型。方法正常21日龄清洁级SD雌性大鼠24只,随机分为3组:溶剂对照1组、溶剂对照2组、双酚A模型组,双酚A模型组给予0.25 mg/(kg·d)BPA溶液连续灌胃10 d,溶剂对照组给予等体积玉米油溶液,于阴道开口当天处死双酚A模型组和溶剂对照2组,并按1:1同时处死溶剂对照1组,检查子宫、卵巢性腺形态学,检测血清性激素、kisspeptin浓度和下丘脑KISS-1、GPR54 mRNA水平。结果与溶剂对照2组相比,双酚A模型组的阴道开口时间平均提前了4.1 d(P<0.05);双酚A模型组血清LH、FSH、E2和kisspeptin浓度水平、下丘脑KISS-1、GPR54 mRNA表达量较溶剂对照1组显著增加(P<0.05)。结论 BPA暴露可以诱导青春前期雌性大鼠性发育提前,可以考虑用于建立中枢性性早熟模型,为后续研究打下基础。