巨噬细胞转录因子阴阳1基因通过调节脂肪细胞因子影响胰岛素敏感性

目的探讨巨噬细胞转录因子阴阳1(YY1)基因对葡萄糖耐量、胰岛素敏感性的影响。方法通过Cre-Loxp系统,成功获得巨噬细胞YY 1基因特异性敲除(YY 1^(f/f);lyz2-cre)小鼠。高脂喂养小鼠12~13周,检测小鼠葡萄糖耐量(血糖水平)和胰岛素耐量(相对血糖值)。将高脂喂养的YY 1基因敲除小鼠(实验组,YY 1^(f/f);lyz2-cre)与对照组(YY 1^(f/f))小鼠分别注射0.9%氯化钠溶液和胰岛素(剂量均为0.75 U/kg),取其附睾脂肪、肌肉、肝脏组织,采用免疫印迹法检测蛋白激酶B(Akt)-糖原合成酶激酶3β(Gsk3β)通路关键蛋白(Akt、Gsk3β)的磷酸化水平。采用ELISA法检测高脂饮食后实验组小鼠与对照组小鼠血清胰岛素、脂联素和瘦素水平。应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测正常饮食的两组小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDM)中炎症因子mRNA相对表达量。结果琼脂糖凝胶电泳见700 bp处显示条带,表明lyz2-cre基因成功表达。实验组小鼠BMDM中,YY 1基因mRNA相对表达量显著低于对照组,表明巨噬细胞YY 1基因特异性敲除小鼠模型构建成功。高脂喂养下,实验组小鼠注射葡萄糖后60、90 min时的血糖水平均显著低于对照组同时间点(P值均<0.05),实验组小鼠注射胰岛素后30、60、90 min时的相对血糖值均显著低于对照组同时间点(P值分别<0.05、0.001、0.01)。正常饮食喂养下,两组各时间点间血糖水平和相对血糖值的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。实验组小鼠附睾脂肪中胰岛素信号通路关键蛋白Akt及Gsk3β磷酸化水平较对照组均明显上调,肌肉和肝脏组织中无明显变化。实验组小鼠血清瘦素、脂联素水平均显著高于对照组(P值均<0.05);实验组小鼠血清胰岛素水平较对照组有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。实验组小鼠BMDM中IL-6 mRNA、TNF-αmRNA、IL-1βmRNA相对表达量均显著低于对照组(P值均<0.001)。结论巨噬细胞转录因子YY1基因敲除,可以通过减轻巨噬细胞炎症,上调脂联素表达,增强脂肪组织胰岛素敏感性,从而改善高脂饮食小鼠的胰岛素抵抗。

转录因子YY1上调PD-L1表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用研究

目的研究转录因子阴阳1(Yin-Yang1,YY1)上调程序性死亡分子配体1(PD-L1)表达促进胆囊癌免疫逃逸的作用。方法采用免疫组化法检测胆囊癌组织、癌旁组织、正常胆囊组织中YY1蛋白表达水平,体外培养正常人胆囊上皮细胞系HGBEC和人胆囊癌细胞系GBC-SD、SGC-996、IH-GB1,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法测定各细胞中YY1水平;YY1 siRNA-1675转染GBC-SD细胞。实验分为BC组、YY1 siRNA NC组、YY1 siRNA-1675组。流式细胞仪测定PD-L1、CD69、CD25水平及人T淋巴细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)测定上清液中白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-4(IL-4)、白细胞介素-10(IL-10)、干扰素γ(IFN-γ)水平;PROMO网站预测YY1的潜在靶基因,行双荧光素酶报告实验验证。结果与正常组织相比,癌旁组织、胆囊癌组织中YY1阳性表达率显著升高(P<0.05),与癌旁组织相比,胆囊癌组织中YY1蛋白阳性表达率显著升高(P<0.05);与人胆囊上皮HGBEC细胞相比,人胆囊癌IH-GB1、SGC-996、GBC-SD细胞中YY1水平显著升高(P<0.05),其中GBC-SD细胞中YY1水平最高,因此后续实验以GBC-SD细胞进行。与BC组、YY1 siRNA-NC组相比,YY1 siRNA-1675组IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、CD69、CD25水平显著升高(P<0.05),YY1、PD-L1水平和人T淋巴细胞凋亡率明显降低(P<0.05);PROMO网站预测表明,PD-L1是YY1的靶基因,双荧光素酶报告实验证明PD-L1是YY1的作用靶点。结论下调YY1水平可靶向抑制PD-L1表达,可能通过此机制抑制胆囊癌免疫逃逸。

脓毒症患儿血清sTREM2和YY1水平及与心肌损伤的相关性研究

目的探讨脓毒症患儿血清可溶性髓样细胞触发受体2(sTREM2)和转录因子阴阳-1(YY1)水平及其与心肌损伤的相关性。方法选取2020年10月至2023年10月期间于本院就诊的134例脓毒症患儿作为研究对象,根据患儿是否存在心肌损伤将其分为心肌损伤组(n=48)和无心肌损伤组(n=86);另选取同期健康儿童72例作为对照组。采用ELISA法检测各组血清sTREM2水平,采用qRT-PCR法检测各组血清YY1表达水平;Pearson法分析患儿血清sTREM2与YY1水平的相关性及二者血清水平与心肌损伤指标的相关性;多因素Logistic回归分析脓毒症患儿发生心肌损伤的影响因素。结果脓毒症患儿血清sTREM2和YY1水平均明显升高(P<0.05);无心肌损伤组和心肌损伤组患儿脓毒性休克占比、CRP、PCT、LD、CK-MB、cTnI、Mb水平比较,差异具有统计学意义(P<0.05);与无心肌损伤组相比,心肌损伤组患儿血清sTREM2和YY1水平明显降低(P<0.05),且血清sTREM2和YY1水平呈正相关(r=0.472,P=0.001),两者与心肌损伤指标LD、CK-MB、cTnI、Mb水平均呈负相关(均P<0.05);Logistic回归分析结果显示,脓毒症休克、CRP、PCT水平升高为脓毒症患儿发生心肌损伤的危险因素,sTREM2和YY1水平升高为保护因素(P<0.05)。结论脓毒症患儿血清sTREM2和YY1水平均明显升高,二者血清水平变化水平与脓毒症患儿心肌损伤密切相关,且sTREM2水平升高和YY1高表达为脓毒症患儿发生心肌损伤的保护因素。

MicroRNA和YY1对肿瘤的调控作用及相互间的影响

MicroRNA(miRNA)是近年来发现的单链非编码小RNA,通过与靶mRNA的特定序列结合,诱导靶mRNA剪切或者阻遏其翻译,从而调控靶基因的表达。许多miRNA都对肿瘤的生长起抑制作用。转录因子阴阳1(YY1)是锌指类转录因子家族中的一员,参与胚胎的形成、生长、分化和细胞增殖等一系列生理过程,且在肿瘤的发生发展中起到促进或抑制的双重作用。本文分析了miRNA和YY1在各种肿瘤中的表达和调控作用,以探讨miRNA在肿瘤中对YY1的影响及作用机制,且通过多种途径对miRNA进行改造来调控YY1,为肿瘤治疗寻求除手术外的其他治疗途径提供新思路。

人鸟苷酸结合蛋白5基因启动子核心调控区域的鉴定及其转录活性分析

目的构建人鸟苷酸结合蛋白5(guanylate binding protein 5,GBP5)基因启动子不同长度截短片段的荧光素酶报告基因质粒,通过分析启动子不同截短片段的转录活性,确定其核心调控区域。方法PCR扩增GBP5基因启动子序列,将启动子序列截短为5个不同长度的片段,连接至载体pGL3-basic,构建重组质粒pGL3-GBP5-11/21/31/41/51。将各重组质粒转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性;利用JASPAR软件预测GBP5启动子区域的转录因子结合位点,依据预测结果选取靶向核心调控区域的阴阳转录因子1(Yin-Yang transcription factor 1,YY1)进行转录调控活性验证;PCR扩增YY1的CDS序列,构建过表达质粒pIRES2-EGFP-YY1;将pIRES2-EGFP-YY1、pGL3-GBP5-21(-1623~+47 bp)质粒与内参质粒pRL-CMV共转染至293FT细胞,检测荧光素酶活性,分析转录因子YY1对GBP5启动子活性的调控作用。结果菌落PCR、双酶切鉴定证明人GBP5基因启动子报告基因质粒构建正确;JASPAR软件预测GBP5启动子区域存在STAT1、YY1、Foxp3等多个转录因子结合位点;双荧光素酶活性检测结果显示,pGL3-GBP5-21(-1623~+47 bp)启动子活性最高,而pGL3-GBP5-41(-520~+47 bp)启动子活性明显降低,提示GBP5启动子核心区域位于5’UTR上游-1623~-520 bp区域;过表达YY1能明显激活GBP5启动子活性,调控GBP5表达。结论人GBP5基因启动子的核心调控区域位于GBP5启动子5’UTR上游-1623~-520 bp区域,该区域存在转录因子YY1结合位点,YY1过表达能显著影响GBP5启动子活性。

脂滴与PRRSV之间对抗与利用并存

猪肺泡巨噬细胞(PAMs)是猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要感染的天然宿主靶细胞,具有重要的免疫学功能。PRRSV感染PAMs后,通常劫持细胞内的各种生命系统为己所用并逃避宿主免疫系统的监管。而宿主细胞也会做出相应的对抗策略以抑制PRRSV复制进而主动清除病毒。近期,m Bio期刊在线发表了题目为“Host cells reprogram lipid droplet synthesis through YY1 to resist PRRSV infection”的研究论文,作者发现宿主细胞通过转录因子阴阳1(YY1)重编程脂滴(LD)抑制PRRSV复制的分子机制,有助于理解正常生理条件下LD与PRRSV之间对抗与利用并存的动态互作关系。