ELISA可视化微阵列芯片法检测蜂蜜中硝基呋喃类药物的残留量

ELISA可视化微阵列芯片法具有操作简单、检测速度快、检测样本量大、精确度和灵敏度好等特点,且自动化程度较高。本文主要检测了蜂蜜中的呋喃它酮代谢物AMOZ、呋喃唑酮代谢物AOZ、呋喃西林代谢物SEM和呋喃妥因代谢物AHD这四类硝基呋喃类代谢物的浓度。研究结果表明,在24组实验样品中,有两组不合格,其他均合格,蜂蜜产品质量总体较好。

金黄色葡萄球菌肠毒素阵列ELISA检测方法的建立及评价

目的为实现对5种经典肠毒素的准确、快速鉴定及分型,本研究基于ELISA和芯片技术,建立金黄色葡萄球菌肠毒素(SE)阵列ELISA(Array-ELISA)检测方法。方法通过原核表达、亲和纯化制备SE蛋白,利用杂交瘤腹腔注射制备腹水,纯化SE单克隆抗体,通过ELISA对抗体的灵敏度、特异性进行评价,点制Array-ELISA阵列,评价Array-ELISA对SE检测的灵敏度和特异性。结果采用Array-ELISA,在PBS中SE的检测限除葡萄球菌肠毒素C(SEC)为10 ng/mL外,其余均为0.0001 ng/mL,液态牛奶中SE的检测限为(0.001~10)ng/mL。在PBS和牛奶中SE检测的特异性均为100%,各型SE之间无交叉反应。同时显示与肉毒毒素也无交叉反应。结论成功建立Array-ELISA检测方法,能够灵敏、准确鉴定同一份样本中5种经典SE。

一种检测小鼠转录因子活性的微阵列芯片的构建及应用

转录因子是一类具有序列特异性的双链DNA结合蛋白.在哺乳动物细胞中,一个转录因子可以调控多个靶基因,一个基因也同时受到多个转录因子的调控,从而形成复杂的基因表达网络调控机制.在蛋白质水平检测特定状态下组织或细胞中的转录因子活性对深入研究基因表达调控的分子机制具有重要的意义.针对TRANSFAC数据库提供的226个小鼠转录因子的PSSM,设计了240个转录因子结合探针,构建了可以在蛋白质水平同时检测约200个小鼠转录因子的微阵列芯片,实验结果显示:a.针对含有不同DNA结合结构域的7个转录因子,进行依赖于抗体的转录因子活性检测,结果证明该芯片具有良好的特异性;b.针对NFκB转录因子纯品,芯片的检测灵敏度可以达到0.5nmol/L,线性范围为0.5～20nmol/L,表明芯片具有较高的灵敏度和良好的定量能力;c.针对经典的IKK,JNK信号通路和JAK/STAT信号通路,该芯片可以检测到其关键转录因子的活性变化,证明芯片的可靠性;d.针对小鼠前脂肪细胞系3T3-L1的分化,该转录因子活性芯片不但检测到了已经报道的活性发生变化的转录因子,如PPAR家族和C/EBP家族外,还发现了以前没有报道过的SRF等,充分显示了芯片技术的高通量优势和发现新数据的能力.

单分子ELISA技术检测的临床应用

近年来,蛋白质和核酸的检测方法发生很大突破,超微量反应体系能很大程度地提高检测方法的敏感度。单分子ELISA技术是一种有潜力的蛋白质检测方法,其通过分离单分子进行测量,实现精准定量,而不是进行整体测量反映平均水平。与传统ELISA相比,单分子ELISA技术具有高分辨率、灵敏、低背景信号、低样本量、分析时间短等优点,能在复杂样本中进行低浓度蛋白质的检测,能广泛应用于监测HIV早期感染、癌症化疗切除后复发、神经系统疾病以及炎性疾病的发生、发展等方面。

一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法

目的:为了分析SEREX抗原克隆在异体食管癌患者血清中和健康对照人血清中的反应情况,我们发展了一种基于免疫印迹的高通量肿瘤相关抗原筛选和鉴定方法。方法:采用新发展的基于免疫印迹原理的抗原克隆微阵列检测方法与传统的噬菌斑检测法对食管癌患者血清中IgG的反应情况进行了比较,并采用两种方法分析了两个SEREX阳性克隆与40例食管癌患者血清和40例健康人血清中的IgG的阳性反应率。通过ELISA对两种方法得到的结果进行了验证。结果:两个阳性克隆在两种检测方法中均与同一例食管癌病人血清起反应,采用抗原克隆微阵列检测方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25%和37.5%,采用噬菌斑检测法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为27.5%和37.5%;ELISA方法检测p53和rps3两个克隆阳性率分别为25.0%和31.25%。结论:本研究采用两种方法检测患者血清IgG反应的结果是一致的,抗原克隆微阵列检测方法可以代替传统的噬菌斑筛选法。

大容量抗体库高通量筛选方法的研究进展

随着蛋白质组学研究的发展，抗体在疾病的诊断、治疗和基础研究上的作用越来越大，迫切要求发展高通量的抗体筛选方法。本文研究整理了最近几年在噬菌体抗体高通量筛选方法上的研究进展，对磁珠法、基于自动化工作站的普通ELISA法、膜法、微阵列芯片法和液相悬浮芯片法等高通量筛选方法进行了综述。