巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在大鼠2型星形胶质细胞中的表达

目的观察1型和2型星形胶质细胞(T1A、T2A)是否表达神经干细胞的标志物、是否具有神经干细胞的特性。方法取新生大鼠脑皮质,体外培养纯化的O-2A祖细胞、T1A和T2A,应用激光共焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达;观察O-2A祖细胞、T1A和T2A在碱性成纤维生长因子(bFGF)和表皮生长因子(EGF)的培养液中生长方式的改变。结果巢蛋白在O-2A祖细胞和T2A中表达,T1A不表达;SSEA-1仅在T2A中表达。在干细胞培养基中培养10d,T2A形成能增殖和连续传代的细胞球,细胞球巢蛋白标记阳性,贴壁后分化细胞具有神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞样形态;但相同培养条件下的O-2A祖细胞和T1A生长方式无改变。结论巢蛋白和SSEA-1在两型星形胶质细胞中的表达存在差异,T2A具有神经干细胞的某些生物学特性。

巢蛋白和阶段特异性胚胎抗原-1在O-2A谱系细胞中的表达

目的观察O-2A(oligodentrocyte-type-2 astrocytes)谱系细胞是否是表达神经干细胞的标志物。方法取新生大鼠脑皮质体外培养纯化的O-2A祖细胞、少突胶质细胞和2型星形胶质细胞,应用激光共聚焦双重免疫荧光标记技术检测巢蛋白(nestin)和阶段特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达。结果nestin在O-2A祖细胞和2型星形胶质细胞中表达,在少突胶质细胞中不表达;SSEA-1仅在2型星形胶质细胞中表达。结论nestin和SSEA-1在O-2A谱系细胞中的表达存在差异,可能具有神经干细胞的特征。

传代培养人胚胎生殖干细胞的生物学鉴定

目的：通过对传代培养至第5代细胞分子标记物的表达分析,鉴定传代培养的细胞为人胚胎生殖干细胞(embrgonic germ stem cells,EGCs)。方法：取5～10周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养人EGCs,挑选传代培养至第5代生长良好的细胞,采用免疫细胞化学法分别检测SSEA-1、SSEA-3、Oct-4、hTERT的表达。结果：组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学法显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA- 1、SSEA-3、Oct-4、hTERT。结论：组织块体外传代培养第5代所获得的细胞,为未分化的人EGCs。

SSEA-1、Oct-4在人胚胎生殖细胞的表达

目的体外培养人胚胎生殖细胞（EG细胞）,通过检测培养的细胞中SSEA-1、Oct-4的表达,鉴定人胚胎生殖细胞.方法取5～9周人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜,进行组织块体外培养,采用流式细胞术及免疫细胞化学检测培养细胞的SSEA-1、Oct-4表达;取5～9周人胚胎的生殖腺嵴,制备石蜡切片,利用免疫组织化学方法,检测原始生殖细胞的SSEA-1表达.结果组织块体外培养得到的细胞,经免疫细胞化学及流式细胞仪显示的单个细胞或细胞集落,均阳性表达SSEA-1、Oct-4.石蜡切片免疫组织化学显示,人胚胎生殖腺嵴中有许多SSEA-1阳性表达的原始生殖细胞.结论组织块体外培养所获得细胞来源于原始生殖细胞,为未分化的人胚胎生殖细胞.

SSEA-4在不同分期卵巢腺癌中表达及与化疗耐药和预后相关性

目的 探讨阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-4在不同分期卵巢腺癌中表达及其与化疗耐药性及预后的相关性。方法 应用免疫组化法检测SSEA-4在不同分期卵巢腺癌组织中表达;分析不同分期及SSEA-4表达患者临床资料、近期化疗疗效、术后5年存活率、复发情况等。结果 Ⅳ期组卵巢腺癌转移及腹水显著高于Ⅰ~Ⅱ期组及Ⅲ期组(P<0.05),即随着卵巢腺癌分期的增加淋巴转移及腹水增多。患者年龄、绝经情况、妊娠次数及分化程度在不同SSEA-4表达的患者的卵巢癌组织中无差异(P>0.05);其中淋巴结转移情况及腹水发生在SSEA-4阳性表达组相较于阴性表达组显著偏高(P<0.05)。SSEA-4在Ⅳ期组表达显著高于Ⅲ期组及Ⅰ~Ⅱ期组(P<0.05),即随着卵巢腺癌肿瘤分期的增加,SSEA-4阳性表达升高。SSEA-4阴性表达组化疗有效及化疗敏感性显著高于SSEA-4阳性组(P<0.05)。关于患者预后,SSEA-4阳性表达患者复发情况及死亡情况显著偏高(P<0.05)。SSEA-4阳性表达患者3、5年生存率显著低于SSEA-4阴性表达患者(P<0.05),1年生存率差异无统学意义(P>0.05)。SSEA-4阳性表达与不同卵巢腺癌分期与患者化疗有效、耐药性、复发具有显著正相关(P<0.05)。结论 SSEA-4在卵巢腺癌中的表达与肿瘤分期显著相关,可作为卵巢腺癌恶行程度的评价指标。SSEA-4与患者化疗耐药及预后显著相关,其表达强度可有效反映患者对化疗的敏感程度,可作为化疗耐药及预后的指标,有希望成为卵巢腺癌肿瘤恶性程度、近期化疗疗效及远期预后的有效指标。

电针对脊髓损伤大鼠星形胶质细胞的影响及机制

目的观察电针治疗脊髓损伤大鼠的行为功能及脊髓损伤部位胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和阶段性特异性胚胎抗原-1(SSEA-1)的表达,阐明电针对脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生及分化的影响及其机制。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组、模型组和电针治疗组,每组20只。分别于脊髓损伤造模后第3、7、14、28天时进行BBB评分(Basso-Beaie-Bresnehan scale),并用免疫组化方法检测大鼠脊髓损伤部位GFAP和SSEA-1变化并与对照组比较。结果电针组与模型组在3d和7d时,GFAP和SSEA-1阳性细胞数有差异(P<0.01),7d时阳性细胞数达到峰值,在14d时电针组和模型组的阳性细胞数有差异(P<0.05),而在28d时,电针组和模型组GFAP阳性细胞无明显差异(P>0.05),但SSEA-1阳性细胞有统计学差异(P<0.05)。结论电针治疗能够增加脊髓损伤模型大鼠星形胶质细胞逆分化,激发星形胶质细胞的干细胞潜能,从而促进损伤后脊髓功能的恢复;损伤后的脊髓GFAP和SSEA-1阳性表达的高峰期都在7d,提示脊髓损伤后7d内可能为电针治疗介入的黄金期。

类胚体诱导脐带间充质干细胞向生殖细胞的分化

背景:脐带间充质干细胞能否在体外和体内微环境条件下衍生为卵母细胞,对女性生殖的维持及卵母细胞的再生均具有十分重要的意义。目的:进一步验证体外微环境类胚体对脐带间充质干细胞向生殖细胞分化的影响。方法:将脐带间充质干细胞进行悬滴培养,使其形成类胚体,进而采用将类胚体与人或小鼠卵巢颗粒细胞共培养、卵泡液条件培养基培养等方法,体外诱导脐带间充质干细胞向早期生殖细胞分化。结果与结论:①将脐带间充质干细胞进行悬滴培养,其能够形成类胚体。②流式细胞仪检测结果:类胚体形成5d后,其中SSEA-1阳性细胞占15.61%。③免疫组织化学检测结果:形成5d的类胚体与人或小鼠的卵巢颗粒细胞共培养,10d后生殖系标记物SCP3、生长分化因子9阳性表达,而颗粒细胞及采用卵泡液培养的类胚体均无表达。结果表明,脐带间充质干细胞体外悬滴培养可形成类胚体,与人或小鼠卵巢颗粒细胞共培养后均表达生殖系特异性标记物。

干细胞标志分子在猪脐带组织中的表达

【目的】研究干细胞标志分子,如干细胞"干性"调控关键基因及胚胎阶段特异性抗原(Stage-specific embryonic antigen,SSEA)在猪脐带组织中的表达状况,为猪脐带来源细胞的利用提供参考。【方法】以猪脐带为研究材料,利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化方法,分析干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1以及SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中的表达。【结果】RT-PCR分析显示,干细胞"干性"调控关键基因Oct4、Nanog、Sox2、Rex1在所有猪脐带样品中阳性转录,但Nanog mRNA的相对表达量显著低于Oct4mRNA、Sox2mRNA和Rex1mRNA,而后三者之间无显著差异;免疫组化分析显示,Oct4、Nanog、Sox2、SSEA-1、SSEA-3和SSEA-4在猪脐带组织中呈阳性染色,表达这些蛋白抗原的阳性细胞主要分布于脐带华通氏胶,且多集中于血管附近。【结论】从基因转录和蛋白水平证实猪脐带组织表达干细胞标志分子,SSEAs表达谱与猪胚胎生殖细胞相符,提示脐带组织中含有早期未分化的多潜能细胞。

鸡胚胎干细胞的分离培养与鉴定

利用胰蛋白酶消化法从X期鸡胚中分离胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs),以鸡胚成纤维细胞为滋养层,进行体外培养,采用形态法和标志分子检测对获得的干细胞进行鉴定。结果显示,获得典型的呈巢状或岛状的鸡胚胎干细胞(chicken embryonic stem cells,cESCs)克隆,细胞碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,AKP)染色呈蓝紫色,表明具有较高的内源性AKP活性;胚胎阶段特异性表面抗原SSEA-1(stage specific embryonic antigen 1,SSEA-1)鉴定结果呈阳性,显示cESCs克隆具有多能性。本试验成功分离出cESCs,可体外培养并保持未分化状态及多能性。