胎肝细胞输注移植联合运动对阻塞性黄疸大鼠肝损伤修复与再生的影响

目的:观察胎肝细胞输注移植联合中等强度有氧运动干预对大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤的修复与再生的影响。方法:40只SD大鼠随机分为假手术、阻塞性黄疸致肝损伤、胎肝细胞及胎肝细胞联合运动干预4组,后3组均采用改良的胆总管结扎法构建大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤模型。自孕龄12～16天的SD孕鼠胚胎中提取肝脏组织,加工制备胎肝细胞。两胎肝细胞组于模型构建过程中的胆总管结扎后进行胎肝细胞肝门静脉输注移植。运动组进行坡度5%、速度16.8 m/min、每天45 min、每周5天、共12周的中等强度跑台训练。12周后大鼠禁食过夜,随后分离出肝组织并取材,应用HE染色法观察大鼠肝细胞形态;生物化学法测定血清总胆红素(TBIL)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)含量;免疫组化技术检测肝组织表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、多药耐药蛋白(MPR2)的蛋白表达;RT-PCR技术检测EGF、FXR、MRP2 mRNA表达。结果:假手术组肝细胞形态结构正常,阻塞性黄疸致肝损伤组可见肝细胞广泛空泡样变性、片状坏死,胎肝细胞组肝细胞少量点状坏死,胎肝细胞联合运动组肝细胞未见明显坏死。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠血清TBIL、AST、ALT含量显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠HGF、EGF阳性表达显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.01),而MRP2阳性表达显著高于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。胎肝细胞组和胎肝细胞联合运动组大鼠EGF mRNA表达显著低于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.01),而MRP2、FXR mRNA含量表达显著高于阻塞性黄疸致肝损伤组(P<0.05)。结论:胎肝细胞肝门静脉输注移植以及胎肝细胞肝门静脉输注移植联合中等强度有氧运动对阻塞性黄疸导致的重症肝损伤有明显的修复与再生作用,其机制可能是通过促进肝细胞再生相关因子的表达和肝细胞的增殖,从而发挥修复与再生作用。

骨髓干细胞移植联合大柴胡汤对重症阻塞性黄疸致肝损伤大鼠的治疗作用研究

目的:观察骨髓干细胞输注移植联合中药大柴胡汤对重症阻黄致肝损伤大鼠,肝细胞形态、血清相关指标及肝组织中白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)mRNA表达的影响,探讨肝损伤修复过程中肝细胞炎性相关因子可能起到的作用及机理。方法:采用在改良胆总管结扎方法基础上,我们构建的胆总管短期悬挂法:一种新的重症阻塞性黄疸致大鼠肝损伤模型。将36只该模型大鼠随机分为非用药、中药、骨髓干细胞+中药治疗共3组。HE染色法观察肝细胞形态变化;生物化学法分析血清中ALT、AST、TBIL含量;RT-PCR技术检测肝组织IL-1β、IL-6mRNA表达水平。结果:HE染色显示:非用药组肝细胞损伤明显,肝小叶内可见大片坏死灶,其内可见大量纤维细胞增生;中药治疗组部分肝小叶内可见灶状及小片状坏死;骨髓干细胞+中药治疗组肝小叶结构完整,无变形及坏死。血清学检查显示:中药和骨髓干细胞+中药治疗组血清AST、ALT、TBIL含量较非用药组低(P<0.05)。RT-PCR实验显示:中药组和骨髓干细胞+中药组肝组织IL-1β、IL-6mRNA表达水平较非用药组低(P<0.01)。结论:骨髓干细胞输注移植及中药大柴胡汤,对重症阻塞性黄疸致肝损伤有显著的抗细胞损伤和修复作用,且两者联用效果更为明显。二者对重症阻黄致肝损伤发生保护作用的分子机制可能与通过抑制细胞炎性通路有关。

大柴胡汤联合运动对阻塞性黄疸大鼠肝脏炎症细胞因子的影响

目的:观察中药大柴胡汤联合中等强度有氧运动对大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤肝脏炎症细胞因子的影响。方法:40只SD大鼠随机分为4组:正常组(CG组),模型组(OJ组),中药组,中药+运动组。采用改良的胆总管结扎法构建大鼠阻塞性黄疸致重症肝损伤模型,两中药组于胆总管结扎术后3天进行大柴胡汤灌胃,每天(下午6时)灌胃1次,剂量2 ml/次,共12周。运动组进行坡度5%、速度16.8 m/min、每天45 min、每周5天、共12周的中等强度跑台训练。12周后大鼠禁食过夜,随后分离出肝组织并取材,对各组大鼠肝脏组织损伤情况进行显微结构形态学观察;免疫组化法检测肝组织Toll样受体4(TLR4)及髓样分化因子88(MyD88)蛋白表达水平;RT-PCR法检测肝组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素6(IL-6)、白介素10(IL-10)mRNA表达水平;生物化学分析法检测血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和总胆红素(TBIL)含量。结果:①HE染色显示:正常组肝细胞索排列整齐;模型组大鼠肝细胞大量纤维化,可见大片状肝细胞变性、坏死,乃至肝细胞索结构紊乱;中药组可见肝细胞少量点、片状坏死,肝小叶结构改变,肝索排列欠整齐;中药+运动组无明显组织坏死,肝小叶结构基本正常,肝索排列较整齐。②血清学结果:中药+运动组ALT、AST、TBIL水平较模型组显著降低(P<0.01),中药组ALT、AST水平也显著下降(P<0.05)。③免疫组织化学染色结果显示:中药+运动组大鼠肝组织TLR4、MyD88表达均显著低于模型组(P<0.01)。④RT-PCR结果显示:与模型组比较,中药+运动组大鼠血清IL-6、TNF-α表达降低(P<0.01),而IL-10表达升高(P<0.01)。结论:中等强度有氧运动联合中药大柴胡汤能调节肝脏炎症细胞因子的表达,增强阻塞性黄疸致重症肝损伤大鼠的免疫功能,从而明显减轻阻黄致大鼠肝损伤的程度。

NF-κB信号通路在小鼠阻塞性黄疸及运动与黑果枸杞多糖干预中的差异表达

目的:探讨NF-κB信号通路在小鼠阻塞性黄疸致肝损伤的机理及阐述运动联合黑果枸杞多糖改善肝损伤的效果。方法:KM小鼠随机分为5组:假手术组、模型组、枸杞组、运动组、枸杞+运动组。应用HE染色、免疫组化法、Realtime-PCR技术对肝组织进行检测。结果:1)HE染色显示,假手术组肝细胞索排列整齐;模型组大鼠肝细胞纤维化,可见片状肝细胞变性、坏死,乃至肝细胞索结构紊乱;枸杞组、运动组可见肝细胞少量点、片状坏死,肝小叶结构改变,肝索排列欠整齐;枸杞+运动组无明显组织坏死,肝小叶结构基本正常,肝索排列较整齐。免疫组织化学染色结果显示,枸杞+运动组小鼠肝组织NF-KB P65、TNF-α阳性表达均显著低于模型组。Real-time PCR结果显示,与模型组比较,枸杞+运动组小鼠血清NF-k B、TNF-α、TGF-β、IL-6 m RNA表达降低。结论:运动联合黑果枸杞多糖能改善肝损伤小鼠的免疫功能,对阻塞性黄疸小鼠的肝细胞具有修复作用。

基于Illumina测序的运动拮抗OJ致肝损伤炎性差异表达基因分析

本研究采用Illumina高通量测序技术对运动干预阻塞性黄疸致肝损伤模型小鼠的血液和肝组织进行测序,并验证运动在干预血液和肝组织炎症相关的因子差异表达的作用。本研究用雄性健康昆明种小鼠30只,随机分成假手术组、模型组和运动组,采用腹壁悬挂胆总管方法进行阻塞性黄疸致肝损伤造模。造模成功炎性期后,对运动组小鼠采取中等强度的跑台运动进行训练。对小鼠的血液和肝组织分别进行Illumina高通量测序,并对炎性相关差异表达因子进行相关性分析。结果显示,运动能有效地干预阻塞性黄疸致肝损伤所诱发的炎性反应,使炎症相关因子差异表达显著下降,与炎症和免疫相关的信号通路的富集表现显著降低。运动干预小鼠的血液和肝组织中差异表达显著的炎性相关的因子主要富集在NF-κB、TGF-β、TNF等信号通路的相关因子,其相关分子功能主要涉及到细胞信号转导、抑制细胞凋亡、免疫反应等。从KEGG富集的信号通路来看,小鼠血液和肝组织中的差异性显著富集通路也主要集中于NF-κB、TGF-β、TNF炎性相关的信号通路。且各炎性因子及炎性信号通路的差异表达在小鼠血液和肝组织内呈现相同趋势。结果表明中等强度的有氧运动能对阻塞性黄疸致肝损伤起到有效的抗炎效果,其表现在相关的炎性因子表达显著下降,且炎性信号通路的表达也显著降低,同时,各炎性因子和炎性信号通路的富集与差异表达呈现相同趋势。本研究为临床上采用有氧运动干预阻塞性黄疸致肝损伤患者的效果评定及其靶标因子筛选等提供实验基础。