MEK抑制剂PD98059提高小鼠扩大肝切除术后的存活率

目的观察MEK抑制剂PD98059对小鼠扩大肝切除术后存活率的影响。方法采用90％及70％肝切除模型，均随机分为两组，PD98059组肝切除术后经门静脉一次性注射PD98059（1mg／kg），分别观察两组90％肝切除术后7d生存率和评估70％肝切除术后48h肝再生及肝脏损伤情况。结果90％肝切除术后对照组小鼠12h内100％死亡，PD98059组存活时间均超过16h，术后7d生存率达16．7％（P〈0．05）。采用肝脏重量的重建和BrdU结合率来评估肝再生，70％肝切除术后48hPD98059组肝再生率低于对照组（P〈0．05），但术后48h血清ALT水平较对照组明显降低（P〈0．05）。术后48h肝脏HE染色示，PD98059组无明显病理结构改变，对照组呈轻度的脂肪变性。结论MEK抑制剂PD98059适当抑制肝切除术后肝再生的速率，能改善剩余肝脏功能并提高存活率。

PD98059对乙醛刺激的大鼠肝星状细胞增生的影响

目的:探讨特异性MEK1阻断剂PD98059对乙醛刺激的肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)增生及其细胞增生核抗原表达的影响。方法:用PD98059对乙醛刺激的HSC进行处理,分别以MTT比色、免疫细胞化学法检测细胞增生及其细胞增生核抗原表达。结果:PD98059在20μmol/L时即对HSC增生出现抑制作用(P<0.05,C组0.109±0.20 vs B组0.146±0.030),50、100μmol/L时抑制作用逐渐增强(P<0.05,D、E组0.081±0.010、0.056±0.020 vs B组0.146±0.030);HSC中PCNA表达也随PD98059剂量增加而减弱(P<0.05,C、D、E组0.62±0.09、0.47±0.04、0.34±0.04 vs B组0.74±0.05)结论:PD98059对HSC增生及细胞增生核抗原表达具有抑制作用,提示Erk信号传导通路是调控肝星状细胞增生的重要通道。

MAPKs阻断剂对乳鼠心肌细胞能量代谢的影响

目的 :在原代培养的心肌细胞上观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPKs)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,旨在探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰预防与治疗药物提供实验依据 .方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用 .结果 :AngⅡ在 12h内使formazan产物的值逐渐上升 ,12h达到高峰 (A值 :0 .36 4 3± 0 .0 2 4 1) ,此后开始下降 ,至2 4h已低于正常水平 (A值 :0 .2 785± 0 .0 912 ) ,它们的值之间均有显著性统计学差异 (P <0 .0 5或 0 .0 1) ,PD0 980 5 9可以显著地拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响 .结论 :PD0 980 5

PD098059抑制血管紧张素Ⅱ对心肌细胞活力的影响

目的 :观察分裂酶原激活的蛋白激酶系统 (MAPK)特异阻断剂PD0 980 5 9对心肌细胞活力与增殖能力的影响 ,探讨细胞内信号传递通路的阻断是否能有效地干预细胞能量代谢 ,为寻找新的心衰的预防与治疗药物提供实验依据。方法 :利用培养的乳鼠心肌细胞 ,根据活细胞线粒体在能量代谢过程中可作用于MTT产生蓝紫色结晶产物formazan这一原理 ,应用比色法测定血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对培养心肌细胞的活力的影响和PD0 980 5 9的干预作用。结果 :与对照组相比 ,AngⅡ在 12h之内使formazan产物的OD值逐渐上升 ,12h达到高峰 ,此后开始下降 ,至 2 4h已低于正常水平 ,它们的OD值之间均有显著的统计学差异 (P <0 0 5或 0 0 1) ,PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。 结论 :该结果提示PD0 980 5 9可以显著的拮抗AngⅡ对心肌细胞活力的影响。

丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的阻断效应

目的观察丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂对弓形虫速殖子侵入细胞的影响。方法 IFA 荧光标记检测在不同剂量抑制剂作用下及在不同时间其宿主细胞感染速殖子的差异;SDS-PAGE 和 Western blot 分析 MAPK 的表达及其相对活性。结果在 PD980591μM 和10μM 作用下其感染率仅分别为对照组的18.00%(u=9.03,P<0.01)和14.80%(u=7.93,P<0.001);在 PD98059 50μM 作用下宿主细胞感染率在24h 和48h 分别为对照组的55.45%(u=3.58,P<0.01)和49.15%(u=4.08,P<0.01);与对照比较,其 MAPK 的相对活性明显下降,10μM 和50μM 组分别降低了43.03%(u=2.72,P<0.01)和78.79%(u=5.74,P<0.001)。结论 PD98059通过作用于 MAPK 信号转导途径而抑制速殖子侵入宿主细胞的过程。

PI3K/AKT及MEK/ERK信号通路抑制剂对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的作用

目的探讨PI3K/AKT信号通路抑制剂(LY294002)及MEK/ERK信号通路抑制剂(PD98059)对结直肠癌血管内皮细胞管道形成的影响。方法实验分为对照组和实验组,其中对照组分正常组和二甲基亚砜(DMSO)组(0.1%DMSO),实验组分PI3K/AKT信号通路抑制剂组LY294002及MEK/ERK信号通路抑制剂组PD98059(实验组设4个浓度梯度),比较结直肠癌血管内皮细胞在不同抑制剂浓度(2.5、5、10、20μmol/L)作用下在Matrigel胶上管道形成的情况,6 h后观察并取每个孔上、下、左、右、中5个区域中的图片,测其管道形成的总长度,每组均设3个复孔,数据以均数±标准差表示,采用SPSS 16.0软件进行统计分析,以P<0.05为差异有统计学意义。结果对照组中正常组与DMSO组两者管道形成总长度之间差异无统计学意义[(4.16±0.26)mm比(4.17±0.18)mm],而实验组管道形成总长度较对照组都有明显减少(P<0.05)。其中LY294002浓度在2.5、5、10、20μmol/L管道形成的长度分别为(3.08±0.51)、(2.65±0.24)、(2.02±0.18)、(1.08±0.13)mm,而PD98059管道形成的长度分别为(3.39±0.18)、(2.98±0.12)、(2.53±0.18)、(1.88±0.12)mm,随着浓度的增加,管道形成长度逐渐减少,差异有统计学意义(P<0.05)。LY294002与PD98059相比,在相同浓度下,LY294002管道形成长度较PD98059减少(P<0.05)。结论PI3K/AKT信号通路抑制剂及ERK/MEK信号通路抑制剂能够明显抑制结直肠癌血管内皮细胞的管道形成,且随着抑制剂浓度的升高,管道形成能力进一步降低,PI3K/AKT信号通路抑制剂抑制肿瘤血管内皮细胞管道形成的能力比ERK/MEK信号通路抑制剂明显。

MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎的影响

目的 MAPK通路抑制剂PD98059对小鼠急性胰腺炎(AP)病程及相关炎症因子的影响。方法 72只雄性KM小鼠被随机分为4大组,每大组再根据时间段的不同再分3小组,每小组6只小鼠,即(1)雨蛙肽+10%二甲基亚砜(DMSO)(AP组)6 h、12 h、18 h组,(2)雨蛙肽+PD98059(干预组)6 h、12 h、18 h组,(3)NS+PD98059(对照一组)6 h、12 h、18 h组,(4)NS+10%DMSO(对照二组)6 h、12 h、18 h组。雨蛙肽以100μg/kg体重给予小鼠腹腔内注射诱导AP模型,1次/h,共6次。需注射PD98059的两大组在AP诱导前30 min与诱导后1 h将PD98059 10 mg/kg体重溶解于10%的DMSO(1 mg/ml)中,然后进行腹腔注射。作为对照的两大组则腹腔内注射相应剂量的生理盐水以代替雨蛙肽或10%DMSO以代替PD98059。检测各6 h组血清淀粉酶,整个胰腺组织湿干比,各12 h组胰腺组织髓过氧化物酶(MPO)浓度,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测胰腺组织中细胞间黏附分子-1(ICAM-l)mRNA的表达和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清可溶性ICAM-l(sICAM-1),肿瘤坏死因子α(TNF-α)浓度,并观察各18 h组胰腺组织的病理学改变。结果在PD98059干预的6 h组,其淀粉酶浓度及湿干比均明显低于AP组[(19 783±263)U/L vs.(10 919±547)U/L,8.702±0.445 vs.6.800±0.600,P<0.05];在PD98059干预的12 h组,MPO吸光度值及血清sICAM-1与血清TNF-α水平均低于AP组[(0.171±0.014)U/g vs.(0.040±0.009)U/g,(212.85±22.03)pg/ml vs.(169.31±15.16)pg/ml,(70.9±7.8)pg/ml vs.(50.8±9.8)pg/ml,P<0.05],ICAM-1 mRNA也较AP组要低很多(0.42±0.04 vs.0.22±0.03,P<0.05);在PD98059干预的18 h组,其病理组织学评分经过Kruskal-Wallis秩和检验检测后,其H值=18.120,P<0.05,表明AP组小鼠病理改变最大,PD98059的干预可减轻炎症程度。各项数据表明PD98059的干预并不能使胰腺炎病程降到正常。结论 MAPK通路抑制剂PD98059能在一定程度上改善雨蛙肽诱导的小鼠AP,其保护机制可能与抑制部分MAPK信号通路及下调黏附分子的表达有关。

肾上腺髓质素对于喉癌细胞的增殖作用

目的观察肾上腺髓质素(adrenomedullin,ADM)对于喉癌细胞系Hep-2的促进增殖作用。方法采用氚胸腺嘧啶(H3-thymidine,H3-TDR)掺入方法观察不同药物作用下ADM对于喉癌细胞系Hep-2增殖的影响。结果在ADM浓度为1×10-10、1×10-9、1×10-8mol/L时均可以显著促进Hep-2细胞增殖(t=-2654.8、P<0.01,t=-1732.3、P<0.01和t=-836.5、P<0.01),三组浓度的ADM促进Hep-2增殖作用差别有显著性(F=18.5,P<0.01),且有剂量依赖性(r=0.9996,P<0.01)。加入ADM受体阻断剂ADM(22-52)Hep-2细胞的H3-TDR掺入量与单纯ADM孵育组掺入量差别有显著(t=2721.5,P>0.05)。Hep-2细胞经ADM孵育后分别加入丝裂素活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(mitogen-acti-vatedproteinkinase/extracellularsignal-regulatedkinase,MAPK/MEK)阻断剂PD098059、蛋白激酶A(proteinkinaseA,PKA)阻断剂H-89、H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组掺入量差别有显著意义(t=2723.8,P<0.01、t=2095.2,P<0.01〉;但加入P38MAPK通路阻断剂SB202190后,H3-TDR掺入量与单纯ADM刺激组差别无显著性。(t=121.83,P>0.05)。结论肾上腺髓质素对于喉癌细胞Hep-2的增殖有促进作用,阻断ADM受体后Hep-2细胞生长受抑制,ADM促进Hep-2细胞生长信号可以通过MEK、PKA通路起作用,未发现p38MAPK参与该作用。

电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠海马区CypA-ERK1/2通路及其阻断效应的研究

目的观察电针长强穴对FMR1基因敲除小鼠海马区CypA、ERK1/2及CREB蛋白表达的影响及对其阻断效应的研究。方法选取FMR1基因缺失且日龄为25日的KO小鼠,通过聚合酶链式反应鉴定小鼠基因型,选取基因型为纯合子型的小鼠入组,随机分为空白组、长强穴组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,共24只。所有组别的小鼠均于每日固定时间段进行干预,1天1次,连续干预14天。干预前、后连续两天于固定时间内对各组实验小鼠进行自主活动行为学测试。采取免疫组化法及免疫印迹法分析海马区CypA、ERK1/2、CREB蛋白的表达情况。结果①自主活动行为学测试结果:干预后长强穴组自主活动及站立次数低于其他组别;干预后自主活动及站立次数低于干预前。②免疫组化法检测结果:长强穴组CypA、CREB蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,具有统计学意义(P<0.05);长强穴组ERK1/2蛋白的阳性平均光密度表达高于空白组及阻断剂长强穴组,具有统计学意义(P<0.05)。③免疫印迹法检测结果:长强穴组CypA、ERK1/2及CREB蛋白的表达高于空白组、非经非穴组和阻断剂长强穴组,其中ERK1/2及CREB蛋白具有统计学意义(P<0.05)。结论①电针长强穴对实验小鼠自主活动站立行为有影响。②电针长强穴能促进FMR1基因敲除小鼠海马区CypA、ERK1/2及CREB蛋白的表达,且MEK阻断剂PD98059对此有阻断效应。

线粒体ATP敏感钾通道介导缺氧预处理期细胞外信号调节蛋白激酶活化的机制

目的 探讨线粒体ATP敏感钾通道 (mKATP)与细胞外信号调节蛋白激酶 (ERK1/2 )在缺氧预处理延迟保护机制中的相互关系。 方法 采用SD大鼠心肌细胞培养复制、缺氧 /复氧损伤模型及缺氧预处理模型 ,建立对照组、缺氧 /复氧组、缺氧预处理组、二氮嗪组、5 羟基癸酸 +二氮嗪组、5 羟基癸酸 +缺氧预处理组、二氮嗪 +MGP组、缺氧预处理 +2 巯基丙酰基甘氨酸 (MGP)组、二氮嗪 +PD980 5 9组 ,以细胞存活率等作为反映心肌细胞损伤的指标 ,并于预处理后不同时间点分别测定细胞内活性氧含量及ERK1/2 的活性。 结果 缺氧预处理组及二氮嗪组细胞存活率和细胞内超氧化物歧化酶活性〔(81 9± 11 4 ) %、(13 6± 3 7)U/L ,(79 2± 12 4 ) %、(16 5± 4 6 )U/L〕均显著高于缺氧 /复氧组〔(4 2 2± 7 3) %、(8 8± 2 8)U/L〕 ,缺氧预处理组及二氮嗪组乳酸脱氢酶释放〔(10 1 9± 18 9)U/L、(97 5± 17 7)U/L〕均显著低于缺氧 /复氧组〔(2 5 0 5± 4 3 6 )U/L ,均为P <0 0 1〕。缺氧预处理及二氮嗪均可快速诱导细胞内大量的活性氧生成并激活ERK1/2 ,但这些作用均可被mKATP阻滞剂 5 羟基癸酸及氧自由基清除剂MGP所阻断。二氮嗪的细胞保护作用还可被ERK1/2 阻滞剂PD980 5 9所抵消。 结论 mKATP可通过诱导活性?

不同水平干预对心肌细胞ERK核转位及c-fos表达的影响

目的观察血管紧张素(Ang)Ⅱ作用心肌细胞后细胞外信号调节激酶(ERK)活化、核转位情况、c-fos基因表达及在受体和信号ERK水平进行干预的影响.方法采用原代培养的心肌细胞,分别从细胞膜受体和细胞内信号ERK层面进行干预,用细胞免疫化学观察磷酸化ERK入核过程,RT-PCR测定c-fos基因表达量.结果 AngⅡ刺激心肌细胞可见胞核内出现磷酸化ERK染色,Valsartan(10-5 mol/L)、PD98059(5×10-5mol/L)可阻断AngⅡ引起的ERK活化、入核过程,而CGP42112A(10-5mol/L )则无阻断作用;AngⅡ可促进心肌细胞c-fos mRNA表达,在30～60 min达高峰,Valsartan 、PD98059均可抑制该作用,CGP42112A对该作用无明显影响.结论 AngⅡ可磷酸化胞质ERK,并使其发生转位入核,ERK的跨核转运可能是AngⅡ诱导c-fos原癌基因表达的前提.

手针干预对慢性温和不可预知应激模型大鼠前额叶皮层细胞外调节蛋白激酶1/2和脑源性神经营养因子表达的影响

目的:观察在阻断剂PD 98059特异性阻断下,针刺对慢性温和不可预知应激(CUMS)大鼠前额叶细胞外调节蛋白激酶(ERK)1/2、磷酸化ERK 1/2(p-ERK 1/2)和脑源性神经营养因子(BDNF)蛋白表达水平的影响,探讨针刺抗抑郁的机制。方法:SD大鼠随机分为空白组、模型组、针刺组、氟西汀组、模型+DMSO组、模型+ERK通路阻断剂(简称阻断剂)组、针刺+阻断剂组、氟西汀+阻断剂组,每组8只。采用慢性温和不可预知应激方法造模21d。针刺干预选取"百会""印堂",于每日造模前30 min进行,每次10min,共21d。氟西汀组与氟西汀+阻断剂组于造模前30min给予氟西汀灌胃。模型+DMSO组于造模前1h给予DMSO侧脑室注射,模型+阻断剂组、针刺+阻断剂组、氟西汀+阻断剂组于造模前1h予侧脑室注射阻断剂。通过糖水消耗实验对大鼠进行行为学评价,蛋白免疫印迹法检测大鼠前额叶ERK 1/2、p-ERK1/2和BDNF的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组大鼠糖水消耗量及前额叶p-ERK 1/2、BDNF蛋白表达水平均明显下降(P<0.01)。与模型组比较,针刺组、氟西汀组糖水消耗量、p-ERK 1/2蛋白表达水平均明显上调(P<0.01),BDNF蛋白表达水平上调(P<0.05,P<0.01),模型+阻断剂组糖水消耗量减少(P<0.05)。与针刺组比较,针刺+阻断剂组糖水消耗量、p-ERK 1/2蛋白表达水平均明显下调(P<0.01)。各组大鼠ERK 1/2蛋白表达水平差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:针刺可能是通过上调前额叶ERK1/2的磷酸化水平,增加BDNF蛋白表达,改善CUMS模型大鼠抑郁样行为,从而发挥抗抑郁效应。