毕赤酵母碳源阻遏因子编码基因PpMIG1和PpMIG2的克隆与序列分析

通过MIG基因的同源性设计简并引物,采用PCR方法从毕赤酵母(Pichia pastoris)中成功克隆了两个MIG同源基因的核心片段,同时利用Genome Walking的方法获得了基因的全长及其侧翼序列,并分别命名为PpMIG1和PpMIG2。序列分析显示,PpMIG1基因全长1335bp,编码444个氨基酸;PpMIG2基因全长1365bp,编码454个氨基酸。这个两个基因所编码的蛋白质均与酿酒酵母碳源阻遏因子ScMig1同源,在氨基末端具有两个典型的C2H2锌指结构域,该结构域能够与受葡萄糖阻遏的许多基因的启动子相结合。PpMig阻遏因子的获得为毕赤酵母碳源阻遏机制的研究奠定了基础。

Stl阻遏因子控制葡萄球菌引起中毒性休克的“致病性岛”

葡萄球菌中毒性休克综合症（staphylococcal tox-ic shock syndrome,STSS）是一种潜在的致命疾病,以发烧、低血压、剥脱性皮疹、腹泻、呕吐,最终导致休克和多脏器系统功能障碍等为特征。其女性发病率显著高于男性,其中90%与月经来潮有关,近年来检测资料显示,皮肤和外科感染引起的STSS有增多趋势。

碳阻遏因子CRE对匍枝根霉产纤维素酶调控作用的研究

为研究匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)TP-02中碳代谢阻遏因子CRE对其产纤维素酶的调控特性,从其基因组DNA中扩增得到CRE全长基因,并利用重叠PCR(overlapping PCR)技术将潮霉素B抗性基因(hyg B)插入其中,既破坏cre正常转录又提供了筛选标记。通过电转化将p UCmT-cre-hyg B导入匍枝根霉萌发孢子,经抗性筛选得到△CRE突变株。利用RT-q PCR对此突变株纤维素酶基因转录水平进行研究,发现eg、bg、cbh1和cbh2的转录均有所提高,分别为48.75%、26%、5.6%和38.6%。同时,△CRE突变株的纤维素酶在表达水平上也均高于原菌,其中内切葡聚糖苷酶酶活提高了58.62%。CRE的破坏在一定程度上减弱了碳阻遏效应,其对纤维素酶的调控具有特异性。其中,对内切酶的调控最为显著。此外,△CRE突变株在3%糖浓度下仍高产纤维素酶,这为后续酶系优化及产业化生产提供了一定的依据。

蜕皮激素与其受体EcR-USP的转录调控机制

蜕皮激素20-羟基蜕皮酮(20-hydroxyecdysone,20E)是一种典型的类固醇激素,主导调控昆虫的蜕皮、变态、生殖等重要生理过程。20E受体EcR-USP已被鉴定近20年,20E与其受体复合物的转录调控机制也有了许多重要突破。已有研究表明:(1)20E受体由核受体EcR和USP形成;(2)EcR-USP异源二聚体在分子伴侣蛋白复合物的协助下获得DNA结合活性;(3)20E通过解除共阻遏因子和募集共激活因子来激活EcR-USP异源二聚体并启动下游基因的转录;(4)20E-EcR-USP配体-受体复合物引发20E初级应答基因的表达,由20E初级反应基因编码的转录因子诱导表达的20E次级应答基因级联放大20E信号,从而调控昆虫蜕皮、变态、生殖等生理过程。

甲状腺激素调节靶基因转录的分子机制

甲状腺激素受体 (TR)为配体依赖性转录因子。未结合T3 的TR与辅阻遏因子等形成复合物 ,此复合物通过使局部的组蛋白去乙酰化而使局部染色质变得紧密 ,进而抑制靶基因的基础转录。结合了T3 的TR与辅阻遏因子解离 ,转录恢复到基础水平。随后辅激活因子与结合了T3 的TR形成复合物 ,此复合物通过使组蛋白乙酰化而使局部染色质变得松弛 ,进而激活靶基因的转录。辅激活因子复合物还能使RNA聚合酶稳定 。

TGM2、CtBP2在胃癌及癌旁组织中的表达及意义分析

目的探讨转谷氨酰胺酶2(TGM2)、转录辅阻遏因子2(CtBP2)在胃癌及癌旁组织中的表达及意义。方法收集124例胃癌患者的癌组织和癌旁组织,采用免疫组化染色和半定量积分方法检测TGM2和CtBP2在胃癌及癌旁组织中的表达,并分析其表达与胃癌患者临床病理及预后的关系。结果TGM2和CtBP2在胃癌组织中的表达量高于癌旁组织(P<0.05);TGM2表达水平与肿瘤分化程度、临床分期和淋巴结转移有关(P<0.05),与性别、年龄和肿瘤直径无关(P>0.05);CtBP2表达只与分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤直径、临床分期、淋巴结转移无关(P>0.05);TGM2阴性患者3年生存率高于阳性患者(P<0.05),CTBP2阴性患者3年生存率高于阳性患者(P<0.05)。结论TGM2和CtBP2在胃癌组织中的表达率更高,可以作为胃癌疾病早期诊断的标志物;TGM2的表达水平与分化程度、临床分期和淋巴结转移有关,CtBP2的表达只与分化程度有关,TGM2和CtBP2均与患者预后密切相关,可以用于胃癌病情评估和预后判断。